Билет 35
Общие и частные методы изолирования. Изолирование подкисленным этанолом. Изолирование водой, подкисленной щавелевой кислотой.
Подкисленный этанол. 100 г тщательно измельченного биоматериала вносят в широкогорлую колбу на 500 мл, заливают этиловым (96°) спиртом до покрытия им твердых частиц исследуемого объекта. Смесь подкисляют 10 %-м спиртовым раствором щавелевой кислоты. Содержимое колбы периодически перемешивают стеклянной палочкой. Через некоторое время проверяют рН и при необходимости прибавляют 10 %-й спиртовой раствор щавелевой кислоты до рН = 2...3 (т.к. этиловый спирт подавляет диссоциацию щавелевой кислоты, для измерения рН берут 5 капель жидкости, находящейся в колбе, выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 5 капель воды и определяют рН раствора универсальной индикаторной бумагой). Колбу слегка закрывают пробкой, оставляют на сутки в теплом месте (25-30 С) при периодическом перемешивании ее содержимого. После этого кислую спиртовую вытяжку сливают с биоматериала. Настаивание биоматериала с новыми порциями этанола, подкисленного до рН=-2...3, производят еще 3-4 раза. Кислые спиртовые вытяжки соединяют и переносят в фарфоровую чашку. Биоматериал переносят на фильтр и промывают этиловым спиртом, который присоединяют к полученным вытяжкам. Объединенные спиртовые вытяжки упаривают до густоты сиропа на водяной бане, нагретой до 40 °С. К сиропообразной жидкости при перемешивании стеклянной палочкой по каплям прибавляют этиловый спирт (96°) до прекращения выпадения примесей в осадок. Образовавшийся осадок отфильтровывают, фильтр промывают спиртом. Фильтрат снова упаривают на водяной бане до густоты сиропа. Упаривание и осаждение проводят многократно (до прекращения осаждения примесей от прибавления этилового спирта). К очищенной таким образом сиропообразной жидкости прибавляют 25 мл воды. Если при этом образуется осадок, его отфильтровывают. Кислую водно-спиртовую жидкость переносят в делительную воронку, прибавляют 10-15 мл хлороформа и легко взбалтывают в течение 5 мин, а затем отделяют хлороформную вытяжку. Жидкость еще 2-3 раза взбалтывают с новыми порциями хлороформа (по 10-15 мл). Хлороформные вытяжки соединяют и исследуют.
Оставшуюся в делительной воронке кислую жидкость подщелачивают 25 %-м раствором аммиака до рН = 9…10. Из этой жидкости алкалоиды и другие токсические вещества 3-4 раза экстрагируют новыми порциями хлороформа (по 10- 15 мл). Хлороформные вытяжки соединяют и исследуют на наличие алкалоидов и некоторых других токсических веществ основного характера.
Недостатки: трудоемкость, требуется 8-10 рабочих дней. На один анализ расходуется около 500 мл этилового спирта. Из-за большого количеством операций, связанных с осаждением примесей из вытяжек, в ходе ХТА могут теряться определенные количества ядовитых веществ, адсорбирующихся примесями. Метод является эффективным для выделения ядовитых соединений из гнилостного биологического материала.
Вода подкисленная: изолирование алкалоидов (кодеин, морфин, кокаин) и других токсических веществ. 100 г мелко измельченного трупного материала (печень, желудок) вносят в колбу вместимостью 500 мл. Трупный материал заливают 200 мл воды, подкисленной насыщенным водным раствором щавелевой кислоты до рН = 2,0...2,5. Смесь биологического материала и подкисленной воды оставляют на 2 ч при периодическом перемешивании содержимого колбы. После этого кислую водную вытяжку сливают с трупного материала, который еще раз в течение часа настаивают с водой, подкисленной щавелевой кислотой до рН = 2,5, затем вытяжку сливают с трупного материала. Кислые водные вытяжки соединяют и процеживают через двойной слой марли. Процеженную вытяжку центрифугируют. Надосадочную жидкость из центрифужного стакана переносят в делительную воронку. Эту жидкость 3-4 раза взбалтывают с новыми порциями хлороформа (по 15-20 мл). Хлороформные вытяжки из кислой среды соединяют и исследуют на наличие токсических веществ, которые экстрагируются хлороформом из кислой среды (алкалоиды, вещества, обладающие слабыми основными свойствами – кофеин, стрихнин). Оставшуюся в делительной воронке кислую водную вытяжку подщелачивают 25 %-м раствором аммиака до рН = 10 и 3-4 раза взбалтывают с хлороформом (порциями по 15-20 мл). Хлороформные вытяжки из щелочной среды соединяют и исследуют на наличие алкалоидов, их синтетических аналогов и других органических веществ основного характера.
При изолировании алкалоидов и других токсических веществ подкисленной водой в несколько раз сокращается время анализа. Для выделения токсических веществ с помощью этого метода не требуется применение этилового спирта. Метод непригоден для выделения из биологического материала соединений, нерастворимых в подкисленной воде, ограниченно пригоден для выделения токсических веществ из загнившего биологического материала. Недостаток – образование стойких эмульсий при экстрагировании из водной фазы хлороформом.
Ядовитые грибы — это такие виды, которые при употреблении в пищу вызывают различные расстройства в организме человека вплоть до смертельного исхода.
Классификация.