0. 2 Методическая часть

2.1 Используемые материалы:

1. PHOS-Select Iron Affinity Gel, Sigma.

2. Ацетонитрил, хч.

3. Трипсин (Sigma Aldrich).

4. Раствор Аммиака 10%.

5. Жидкий азот, тех.

6. Гелий, вс.

7. CHCA MALDI Matrix.

8. Пробирка типа Eppendorf на 1,5мл.

9. Пробирка резьбовая типа Falcon 10 мл.

10. Наконечник автоматической пипетки на 10мкл.

11. Наконечник автоматической пипетки на 200мкл.

12. Наконечник автоматической пипетки на 1мл.

13. Millipore ZipTip С18.

14. Фильтр Millex-GV, 0.22µm PVDF 4mm.

15. Ultrafiltration Spin-Columns, 0.45μm.

16. Трифторуксусная кислота (ТФУ) Sigma-Aldrich.

17. Штатив на 96 микропробирок.

18. Весы лабораторные электронные Kern ALJ 220-4.

19. Ультразвуковая мойка Bransonic 1510E.

20. Термостат твердотельный «Термит».

21. Хроматограф жидкостный микроколоночный «Милихром А-02».

22. Микроцентрифуга настольная Eppendorf MiniSpin.

23. Дистиллятор АДЭ-5.

24. Хроматограф газовый «Цвет-600».

25. Интегратор цифровой И-02.

26. 33 mm Non-sterile Millex Filter Units.

27. Перемешивающее устройство ЛАБ-ПУ-02.

28. Дозатор механический Proline.

2.2 Методики получения сорбента и исследования

2.2.1 Получение рмм (FeIii) сорбента

В специальной ванне на поверхность водной субфазы наносят по каплям раствор ПАВ в подходящем неполярном легколетучем органическом растворителе. Раствор ПАВ растекается по поверхности воды, образуя монослой, ограниченный бортами ванны и подвижными барьерами, которые могут регулировать поверхностное давление в образовавшемся монослое. Затем монослой сжимают до конденсированного состояния (рисунок 2.2.1.1), после чего твердая подложка с постоянной скоростью погружается и поднимается перпендикулярно поверхности МС и таким образом монослой переносится на твердую подложку.

Рисунок 2.2.1.1 - Процесс образования монослоя.

2.2.2 Определение удельной поверхности сорбента

Удельную поверхность определяли по методу тепловой десорбции (газохроматографическим методом) по стандартной методике [13].

2.2.3 Определение сорбционной емкости сорбента

2.2.3.1 Проведение металл-аффинного анализа

В качестве колонок были использованы фильтры с мембраной (размер пор 0.45 мкм) Millex-LH. Предварительно взвешенную спиновую колонку заполнили сорбентом, колонку поместили в микропробирку на 1,5 мл и с помощью центрифуги (15 сек , 3000 об/мин) отделили консервирующий раствор (TFA 0,1%). Далее колонку с сорбентом взвесили и по разности масс установили массу сорбента. Приготовили две порции раствора, содержащего пептид SSNGHVY_рGKLSSI (B-60) и одну порцию нанесли на сорбент (таким образом, что количество пептида составило 20% от массы сорбента), вторую часть сохранили для хроматографического анализа. Колонку инкубировали на качающейся платформе в течение 15 мин. Затем жидкую фазу отделили с помощью центрифугирования (30 сек, 3000 об/мин). Проскок сохранили для дальнейшего анализа. Далее нанесли на сорбент 100 мкл 5% раствора аммиака, после чего центрифугировали 30 сек при 3000 об/мин. Элюат сохранили для анализа.

2.2.3.2 Определение влажности рмм Fe(III) сорбента

В предварительно взвешенную спиновую колонку поместили 30 монослоев сорбента и с помощью центрифуги (15 сек, 3000 об/мин) отделили лишнюю жидкость. Затем колонку взвесили и по разности масс установили массу влажного сорбента.. Далее на колонку нанесли ацетон в таком количестве, чтобы сорбент был погружен в слой ацетона полностью. С помощью центрифуги (15 сек, 5000 об/мин) ацетон отделили, и колонку с сорбентом выдерживали в вакуумном эксикаторе в течение 30 минут до полного высыхания сорбента. Затем колонку взвесили и установили массу сухого сорбента.