- •Содержание
- •1 Аналитический обзор 11
- •2 Методическая часть 29
- •3. Экспериментальная часть 37
- •4 Обсуждение результатов эксперимента 44
- •Условные обозначения
- •Введение
- •1 Аналитический обзор
- •1.1 Регулярные мультимолекулярные структуры
- •1.2 Хроматография
- •1.2.1 Металл-аффинная хроматография – сочетание принципов лигандообменной и аффинной хроматографии
- •1.3 Методы характеризации сорбентов
- •1.3.1 Удельная поверхность
- •1.3.2 Емкость сорбента, влажность
- •1.3.3 Электрокинетический потенциал
- •1.4 Maldi масс-спектрометрия
- •1.5 Идентификация белков – метод pmf
- •1.6 Тандемная масс-спектрометрия (мс-мс) и идентификация пептиов по фрагментным масс-спектрам
- •1.7 Идентификация пост-трансляционных модификаций
- •1.8 Аддукты зомана с сывороточным альбумином
- •2 Методическая часть
- •2.1 Используемые материалы:
- •2.2 Методики получения сорбента и исследования
- •2.2.1 Получение рмм (FeIii) сорбента
- •2.2.2 Определение удельной поверхности сорбента
- •2.2.3 Определение сорбционной емкости сорбента
- •2.2.3.1 Проведение металл-аффинного анализа
- •2.2.3.2 Определение влажности рмм Fe(III) сорбента
- •2.2.3.3 Определение влажности коммерческого сорбента
- •2.2.4 Анализ фосфорилированных пептидов казеина молока коровы
- •2.2.4.1 Выделение суммарного белка из обезжиренного сухого молока
- •2.2.4.2 Гидролиз суммарного белка молока коровы в присутствии трипсина
- •2.2.5 Анализ фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека
- •2.2.5.1 Гидролиз сывороточного альбумина человека в присутствии пепсина
- •2.2.6 Масс-спектрометрический анализ
- •2.2.6.1 Масс-спектрометрический анализ методом maldi-tof и maldi-tof-tof
- •2.2.6.2 Обработка данных масс-спектрометрического анализа
- •3. Экспериментальная часть
- •3.1. Получение рмм Fe(III) сорбента
- •3.2 Определение удельной поверхности
- •3.3 Определение электрокинетического потенциала и размера частиц.
- •3.4 Определение сорбционной емкости сорбента
- •3.4.1Проведение металл-аффинного анализа
- •3.4.2 Определение содержание пептида в проскоке и контрольном образце
- •3.4.3 Определение влажности коммерческого сорбента и рммс Fe(III)
- •3.5 Анализ фосфорилированных пептидов казеина молока коровы
- •3.5.1 Приготовление микроколонки с сорбентом
- •3.5.2 Металл-аффинная хроматография на коммерческом сорбенте
- •3.5.3 Металл-аффинная хроматография на рммс Fe(III)
- •3.6 Анализ фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека
- •3.6.1 Приготовление металл-аффинной колонки
- •3.6.2 Выбор элюэнта
- •3.6.3 Металл-аффинная хроматография на коммерческом сорбенте
- •3.6.4 Металл-аффинная хроматография на рммс Fe(III)
- •3.7 Масс-спектрометрический анализ
- •3.7.1 Проведение масс-спектрометрического анализа
- •4 Обсуждение результатов эксперимента
- •4.1 Охарактеризация сорбента
- •4.1.1. Получение рмм сорбента, содержащего ионы железа (III) и приготовление хроматографических колонок.
- •4.1.2 Определение удельной поверхности
- •4.1.3 Определение емкости сорбента
- •4.1.4 Микроэлектрофоретические исследования.
- •4.1.4.1 Определение электрокинетического потенциала
- •4.1.4.2 Расчет удельной поверхности рмм сорбента
- •4.2 Исследование возможности специфичного выделения фосфорилированных пептидов из биологического образца методом металл-аффинной хроматографии с использованием рммс(Fe III)
- •4.3 Разработка метода металл-аффинного выделения прямых ковалентных аддуктов зомана с сывороточным альбумином с помощью рмм сорбентов Fe(III) для последующего масс-спектрометрического анализа
- •4.3.1 Поиск и идентификация аддуктов сывороточного альбумина человека с зоманом
- •4.3.2 Выделение фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека с использованием рммс (Fe III)
- •4.3.2 Масс-спектрометрическая идентификация сайтов связывания зомана с альбумином при взаимодействии с белками in vitro
- •Выводы по работе:
- •Список использованных источников.
- •Приложение а Технико-экономическая оценка научно-исследовательской работы Обоснование договорной цены на разработку
- •Расчет затрат на научно-исследовательскую разработку
- •Расчет затрат на сырье, материалы, реактивы, покупные изделия и полуфабрикаты
- •Расчет затрат на энергоресурсы
- •Расчет затрат на приборы, оборудование для научно-экспериментальных работ и суммы амортизационных отчислений
- •Расчет затрат на оплату труда с обязательными начислениями
- •Прочие затраты Расчет суммы расходов по использованию вычислительной техники.
- •Затраты на выполнение специальных анализов.
- •Расчет суммы накладных расходов
- •Расчет сметы затрат на разработку
- •Приложение б Охрана труда и окружающей среды
- •1 Опасные и вредные производственные факторы
- •2 Пожарная безопасность
- •3 Обеспечение санитарно-гигиенических условий
- •4 Вентиляция
- •5 Аптечка и ее содержание
- •6 Освещение помещения
- •7 Безопасность выполнения работы в лаборатории
- •8 Анализ технологических операций
- •9 Меры первой помощи
- •Охрана окружающей среды
- •Приложение в
- •Приложение г Масс-спектры смеси триптических пептидов казеина, элюированных с колонки с сорбентом, содержащим ионы железа.
-
-
-
-
9 Меры первой помощи
1) Поражение электрическим током
При ударе электрическим током необходимо как можно быстрее освободить пострадавшего от действия тока, сняв напряжение с электрооборудования, вызвавшего поражение. Если система включения/выключения оборудования находится в отдаленности, то пострадавшего освобождают при помощи диэлектрических материалов, не забывая о собственной безопасности.
При сравнительно легких поражениях, если работа сердца и органов дыхания не нарушена, и человек не потерял сознание, следует вывести пострадавшего на свежий воздух, освободить его от стесняющей одежды, дать понюхать нашатырный спирт.
При отсутствии пульса на сонной артерии необходимо приступить к реанимации: начать непрямой массаж сердца и искусственное дыхание. Затем пострадавшему следует приподнять ноги, приложить холод к голове и продолжать реанимацию до появления врача.
2) Термический ожог
При слабых ожогах кожи (ожогах без нарушения целостности ожоговых пузырей) обожженный участок необходимо подставить под струю холодной воды на (10-15) минут или приложить к нему холод на (20-30) минут. Нельзя смазывать обожженную поверхность маслами и жирами.
При сильных ожогах с нарушением целостности ожоговых пузырей и кожи следует вызвать врача или немедленно доставить пострадавшего в лечебное учреждение. До оказания медицинской помощи необходимо осторожно, не допуская травмирования, обнажить обожженный участок и накрыть его сухой стерильной тканью. Затем поверх сухой ткани приложить холод. Запрещается промывать ожог водой, а также антисептическими средствами. Обработка ожогов производится только квалифицированными специалистами. Запрещается бинтовать обожженную поверхность.
3) Химический ожог
При поражениях кожи агрессивными жидкостями (сильными кислотами, едкими щелочами и т.п.) требуется немедленное промывание под струей холодной воды до прибытия «Скорой помощи». После обильного промывания на обожженную кислотой кожу накладывают примочку из (2-3)-%-ного раствора соды, а при ожогах щелочью - примочку из слабого раствора уксусной или борной кислоты и снова промывают водой. Не допускается использовать сильнодействующие и концентрированные растворы кислот щелочей для реакции нейтрализации на коже пострадавшего.
При попадании едких химических веществ в глаза, необходимо промывать глаз под струей холодной воды так, чтобы она стекала от носа к наружному уголку глаза. Недопустимо применять нейтрализующую жидкость при попадании в глаза едких химических веществ (кислота - щелочь).
4) Механические повреждения
При ранениях кожных покровов следует остановить кровотечение, приложив тампон, смоченный 3% перекисью водорода. Промывать рану можно только в случае попадания в нее едких или ядовитых веществ. При загрязнении раны требуется осторожно удалить грязь с кожи вокруг раны по направлению от краев раны наружу. Очищенный участок смазывают раствором йода. При этом нельзя допускать попадание йода внутрь раны. Затем накрывают рану чистой салфеткой, полностью прикрыв края раны, закрепляют салфетку бинтом или лейкопластырем.
В случае артериального кровотечения пострадавшему накладывают кровоостанавливающий жгут не более чем на один час. На конечностях точка прижатия артерии должна быть выше места кровотечения, на шее и голове – ниже раны или в ране. До наложения жгута поврежденную конечность следует оставить в приподнятом положении.
Если после оказания первой помощи потеря крови оказалась значительной, то пострадавшего следует направить к врачу.