- •Содержание
- •1 Аналитический обзор 11
- •2 Методическая часть 29
- •3. Экспериментальная часть 37
- •4 Обсуждение результатов эксперимента 44
- •Условные обозначения
- •Введение
- •1 Аналитический обзор
- •1.1 Регулярные мультимолекулярные структуры
- •1.2 Хроматография
- •1.2.1 Металл-аффинная хроматография – сочетание принципов лигандообменной и аффинной хроматографии
- •1.3 Методы характеризации сорбентов
- •1.3.1 Удельная поверхность
- •1.3.2 Емкость сорбента, влажность
- •1.3.3 Электрокинетический потенциал
- •1.4 Maldi масс-спектрометрия
- •1.5 Идентификация белков – метод pmf
- •1.6 Тандемная масс-спектрометрия (мс-мс) и идентификация пептиов по фрагментным масс-спектрам
- •1.7 Идентификация пост-трансляционных модификаций
- •1.8 Аддукты зомана с сывороточным альбумином
- •2 Методическая часть
- •2.1 Используемые материалы:
- •2.2 Методики получения сорбента и исследования
- •2.2.1 Получение рмм (FeIii) сорбента
- •2.2.2 Определение удельной поверхности сорбента
- •2.2.3 Определение сорбционной емкости сорбента
- •2.2.3.1 Проведение металл-аффинного анализа
- •2.2.3.2 Определение влажности рмм Fe(III) сорбента
- •2.2.3.3 Определение влажности коммерческого сорбента
- •2.2.4 Анализ фосфорилированных пептидов казеина молока коровы
- •2.2.4.1 Выделение суммарного белка из обезжиренного сухого молока
- •2.2.4.2 Гидролиз суммарного белка молока коровы в присутствии трипсина
- •2.2.5 Анализ фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека
- •2.2.5.1 Гидролиз сывороточного альбумина человека в присутствии пепсина
- •2.2.6 Масс-спектрометрический анализ
- •2.2.6.1 Масс-спектрометрический анализ методом maldi-tof и maldi-tof-tof
- •2.2.6.2 Обработка данных масс-спектрометрического анализа
- •3. Экспериментальная часть
- •3.1. Получение рмм Fe(III) сорбента
- •3.2 Определение удельной поверхности
- •3.3 Определение электрокинетического потенциала и размера частиц.
- •3.4 Определение сорбционной емкости сорбента
- •3.4.1Проведение металл-аффинного анализа
- •3.4.2 Определение содержание пептида в проскоке и контрольном образце
- •3.4.3 Определение влажности коммерческого сорбента и рммс Fe(III)
- •3.5 Анализ фосфорилированных пептидов казеина молока коровы
- •3.5.1 Приготовление микроколонки с сорбентом
- •3.5.2 Металл-аффинная хроматография на коммерческом сорбенте
- •3.5.3 Металл-аффинная хроматография на рммс Fe(III)
- •3.6 Анализ фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека
- •3.6.1 Приготовление металл-аффинной колонки
- •3.6.2 Выбор элюэнта
- •3.6.3 Металл-аффинная хроматография на коммерческом сорбенте
- •3.6.4 Металл-аффинная хроматография на рммс Fe(III)
- •3.7 Масс-спектрометрический анализ
- •3.7.1 Проведение масс-спектрометрического анализа
- •4 Обсуждение результатов эксперимента
- •4.1 Охарактеризация сорбента
- •4.1.1. Получение рмм сорбента, содержащего ионы железа (III) и приготовление хроматографических колонок.
- •4.1.2 Определение удельной поверхности
- •4.1.3 Определение емкости сорбента
- •4.1.4 Микроэлектрофоретические исследования.
- •4.1.4.1 Определение электрокинетического потенциала
- •4.1.4.2 Расчет удельной поверхности рмм сорбента
- •4.2 Исследование возможности специфичного выделения фосфорилированных пептидов из биологического образца методом металл-аффинной хроматографии с использованием рммс(Fe III)
- •4.3 Разработка метода металл-аффинного выделения прямых ковалентных аддуктов зомана с сывороточным альбумином с помощью рмм сорбентов Fe(III) для последующего масс-спектрометрического анализа
- •4.3.1 Поиск и идентификация аддуктов сывороточного альбумина человека с зоманом
- •4.3.2 Выделение фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека с использованием рммс (Fe III)
- •4.3.2 Масс-спектрометрическая идентификация сайтов связывания зомана с альбумином при взаимодействии с белками in vitro
- •Выводы по работе:
- •Список использованных источников.
- •Приложение а Технико-экономическая оценка научно-исследовательской работы Обоснование договорной цены на разработку
- •Расчет затрат на научно-исследовательскую разработку
- •Расчет затрат на сырье, материалы, реактивы, покупные изделия и полуфабрикаты
- •Расчет затрат на энергоресурсы
- •Расчет затрат на приборы, оборудование для научно-экспериментальных работ и суммы амортизационных отчислений
- •Расчет затрат на оплату труда с обязательными начислениями
- •Прочие затраты Расчет суммы расходов по использованию вычислительной техники.
- •Затраты на выполнение специальных анализов.
- •Расчет суммы накладных расходов
- •Расчет сметы затрат на разработку
- •Приложение б Охрана труда и окружающей среды
- •1 Опасные и вредные производственные факторы
- •2 Пожарная безопасность
- •3 Обеспечение санитарно-гигиенических условий
- •4 Вентиляция
- •5 Аптечка и ее содержание
- •6 Освещение помещения
- •7 Безопасность выполнения работы в лаборатории
- •8 Анализ технологических операций
- •9 Меры первой помощи
- •Охрана окружающей среды
- •Приложение в
- •Приложение г Масс-спектры смеси триптических пептидов казеина, элюированных с колонки с сорбентом, содержащим ионы железа.
2 Пожарная безопасность
Научно-исследовательская работа проводилась в специально оборудованном помещении лаборатории, которое характеризуется следующими параметрами:
1) Категория по взрывопожарной и пожарной опасности В4. Это пожароопасные помещения, в которых находятся горючие и трудногорючие жидкости, твердые горючие и трудногорючие вещества и материалы (в том числе пыли и волокна), способные при взаимодействии с водой, кислородом воздуха или друг с другом только гореть при условии, что эти помещения не относятся к взрывопожароопасным. [45]
2) Класс взрывоопасной или пожароопасной зоны В-1б. Это невзрыво- и непожароопасные зоны лабораторных помещений, в которых при нормальной эксплуатации взрывоопасные смеси горючих газов и паров не образуются, а возможны только в результате аварий и неисправностей. В лаборатории имеются легковоспламеняющиеся жидкости (ЛВЖ) в небольших количествах, недостаточных для создания взрывоопасной смеси в объеме, превышающем 5% свободного объема помещения. Работа с горючими газами и ЛВЖ производится без применения открытого огня в вытяжных шкафах. [45]
Для определения пожароопасной категории В1-В4 помещения необходимо осуществить расчет значения удельной временной пожарной нагрузки g на пожароопасном участке.
При пожарной нагрузке, включающей в себя различные сочетания горючих, трудногорючих жидкостей, твердых горючих и трудногорючих веществ и материалов в пределах пожароопасного участка, пожарная нагрузка Q, МДж, определяется по формуле Б.1:
(Б.1)
где Gi – количество i-го материала пожарной нагрузки, кг;
QHiP – низшая теплота сгорания i- го материала пожарной нагрузки, МДж/кг.
Удельная пожарная нагрузка g, МДж/м2, определяется из соотношения:
,
(Б.2)
где S - площадь размещения пожарной нагрузки, м2.
Таблица Б.2 - Расчет удельной пожарной нагрузки
|
Материал |
Теплота сгорания QHiP , МДж/кг |
Количество материала Gi, кг |
Удельная пожарная нагрузка g, МДж/м2 |
|
Бумага, книги, журналы |
13,40 |
15 |
3,35 |
|
Древесина (мебель) |
13,80 |
250 |
57,5 |
|
Гексан |
20,3 |
0,3 |
0,1 |
|
Уксусная кислота |
87,6 |
0,3 |
0,44 |
|
Резина |
33,52 |
0,15 |
0,08 |
|
Линолеум |
47,4 |
60 |
47,4 |
|
Пластик |
41,87 |
2 |
1,4 |
|
Итого |
|
110,26 |
|
Площадь размещения пожарной нагрузки S = 60 м2 .
В помещении лаборатории, где выполнялась работа удельная пожарная нагрузка составила 110,26 МДж/м2 . Таким образом, категория пожароопасности помещения В4.
В лабораторном помещении необходимо наличие средств пожаротушения. В качестве первичных средств пожаротушения могут быть использованы асбест, песок, одеяла. Углекислотные огнетушители ОУ-2, ОУ-5, ОУ-8 предназначены для тушения загораний различных веществ и материалов, а также электроустановок, находящихся под напряжением не выше 1000 В. Огнетушитель ОХП-10 не может быть использован с электрооборудованием, так как в составе заряда он содержит водный раствор. Запрещается использование химического огнетушителя при воспламенении электрооборудования. Для защиты от сбоев в схеме электропитания, способных привести к возгоранию такой техники, как компьютер, принтер и выпрямительно-стабилизирующее устройство, корпуса приборов выполнены из трудновоспламеняемых пластиков.
При возникновении пожара необходимо немедленно обесточить оборудование, сообщить дежурному сотруднику, если требуется вызвать пожарную охрану.
