
- •Содержание
- •1 Аналитический обзор 11
- •2 Методическая часть 29
- •3. Экспериментальная часть 37
- •4 Обсуждение результатов эксперимента 44
- •Условные обозначения
- •Введение
- •1 Аналитический обзор
- •1.1 Регулярные мультимолекулярные структуры
- •1.2 Хроматография
- •1.2.1 Металл-аффинная хроматография – сочетание принципов лигандообменной и аффинной хроматографии
- •1.3 Методы характеризации сорбентов
- •1.3.1 Удельная поверхность
- •1.3.2 Емкость сорбента, влажность
- •1.3.3 Электрокинетический потенциал
- •1.4 Maldi масс-спектрометрия
- •1.5 Идентификация белков – метод pmf
- •1.6 Тандемная масс-спектрометрия (мс-мс) и идентификация пептиов по фрагментным масс-спектрам
- •1.7 Идентификация пост-трансляционных модификаций
- •1.8 Аддукты зомана с сывороточным альбумином
- •2 Методическая часть
- •2.1 Используемые материалы:
- •2.2 Методики получения сорбента и исследования
- •2.2.1 Получение рмм (FeIii) сорбента
- •2.2.2 Определение удельной поверхности сорбента
- •2.2.3 Определение сорбционной емкости сорбента
- •2.2.3.1 Проведение металл-аффинного анализа
- •2.2.3.2 Определение влажности рмм Fe(III) сорбента
- •2.2.3.3 Определение влажности коммерческого сорбента
- •2.2.4 Анализ фосфорилированных пептидов казеина молока коровы
- •2.2.4.1 Выделение суммарного белка из обезжиренного сухого молока
- •2.2.4.2 Гидролиз суммарного белка молока коровы в присутствии трипсина
- •2.2.5 Анализ фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека
- •2.2.5.1 Гидролиз сывороточного альбумина человека в присутствии пепсина
- •2.2.6 Масс-спектрометрический анализ
- •2.2.6.1 Масс-спектрометрический анализ методом maldi-tof и maldi-tof-tof
- •2.2.6.2 Обработка данных масс-спектрометрического анализа
- •3. Экспериментальная часть
- •3.1. Получение рмм Fe(III) сорбента
- •3.2 Определение удельной поверхности
- •3.3 Определение электрокинетического потенциала и размера частиц.
- •3.4 Определение сорбционной емкости сорбента
- •3.4.1Проведение металл-аффинного анализа
- •3.4.2 Определение содержание пептида в проскоке и контрольном образце
- •3.4.3 Определение влажности коммерческого сорбента и рммс Fe(III)
- •3.5 Анализ фосфорилированных пептидов казеина молока коровы
- •3.5.1 Приготовление микроколонки с сорбентом
- •3.5.2 Металл-аффинная хроматография на коммерческом сорбенте
- •3.5.3 Металл-аффинная хроматография на рммс Fe(III)
- •3.6 Анализ фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека
- •3.6.1 Приготовление металл-аффинной колонки
- •3.6.2 Выбор элюэнта
- •3.6.3 Металл-аффинная хроматография на коммерческом сорбенте
- •3.6.4 Металл-аффинная хроматография на рммс Fe(III)
- •3.7 Масс-спектрометрический анализ
- •3.7.1 Проведение масс-спектрометрического анализа
- •4 Обсуждение результатов эксперимента
- •4.1 Охарактеризация сорбента
- •4.1.1. Получение рмм сорбента, содержащего ионы железа (III) и приготовление хроматографических колонок.
- •4.1.2 Определение удельной поверхности
- •4.1.3 Определение емкости сорбента
- •4.1.4 Микроэлектрофоретические исследования.
- •4.1.4.1 Определение электрокинетического потенциала
- •4.1.4.2 Расчет удельной поверхности рмм сорбента
- •4.2 Исследование возможности специфичного выделения фосфорилированных пептидов из биологического образца методом металл-аффинной хроматографии с использованием рммс(Fe III)
- •4.3 Разработка метода металл-аффинного выделения прямых ковалентных аддуктов зомана с сывороточным альбумином с помощью рмм сорбентов Fe(III) для последующего масс-спектрометрического анализа
- •4.3.1 Поиск и идентификация аддуктов сывороточного альбумина человека с зоманом
- •4.3.2 Выделение фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека с использованием рммс (Fe III)
- •4.3.2 Масс-спектрометрическая идентификация сайтов связывания зомана с альбумином при взаимодействии с белками in vitro
- •Выводы по работе:
- •Список использованных источников.
- •Приложение а Технико-экономическая оценка научно-исследовательской работы Обоснование договорной цены на разработку
- •Расчет затрат на научно-исследовательскую разработку
- •Расчет затрат на сырье, материалы, реактивы, покупные изделия и полуфабрикаты
- •Расчет затрат на энергоресурсы
- •Расчет затрат на приборы, оборудование для научно-экспериментальных работ и суммы амортизационных отчислений
- •Расчет затрат на оплату труда с обязательными начислениями
- •Прочие затраты Расчет суммы расходов по использованию вычислительной техники.
- •Затраты на выполнение специальных анализов.
- •Расчет суммы накладных расходов
- •Расчет сметы затрат на разработку
- •Приложение б Охрана труда и окружающей среды
- •1 Опасные и вредные производственные факторы
- •2 Пожарная безопасность
- •3 Обеспечение санитарно-гигиенических условий
- •4 Вентиляция
- •5 Аптечка и ее содержание
- •6 Освещение помещения
- •7 Безопасность выполнения работы в лаборатории
- •8 Анализ технологических операций
- •9 Меры первой помощи
- •Охрана окружающей среды
- •Приложение в
- •Приложение г Масс-спектры смеси триптических пептидов казеина, элюированных с колонки с сорбентом, содержащим ионы железа.
Расчет затрат на оплату труда с обязательными начислениями
Список сотрудников, занимавшихся проведением исследования:
-
Студент-старшекурсник, являющийся непосредственным исполнителем работы;
-
Консультант по экономике;
-
Консультант по охране труда;
-
руководитель исследовательской работы.
Величина затрат на оплату труда (Зот) может быть рассчитана по формуле:
Зот=Тст·Тф , (А.6)
где Тст - часовая тарифная ставка данного работника;
Тф - время, затраченное конкретным работником на данное исследование, час.
Основная заработная плата исполнителя определяется по формуле А.7:
З = С · n, (А.7)
где С - размер месячной стипендии, руб.;
n - число месяцев, в течении которых выполнялась данная работа.
Обязательные отчисления на социальные нужды принимаются в виде установленного действующим законодательством РФ на данный момент времени процента от суммы начисленной заработной платы и составляют:
для студента – 13%
для преподавателей – 26%
Расчет затрат на оплату труда приведен в таблице А.4
Таблица А.4 – Расчет затрат на оплату труда с обязательными начислениями
Категория работников |
Количество человек |
Часовая тарифная ставка, Тст, руб. |
Затраченное время, Тф, час. |
Сумма затрат на оплату труда, руб. |
Отчисления на социальные нужды, руб.
|
Итого затраты на оплату труда с начислениями, руб. |
З/пл исполнителя |
1 |
1100 (мес.) |
4 (мес.) |
4400 |
572 |
4972 |
З/пл руководителя |
1 |
350 |
25 |
8750 |
2275 |
11025 |
З/пл консультанта по экономике |
1 |
250 |
1 |
250 |
65 |
315 |
З/пл консультанта по охране труда |
1 |
250 |
1 |
250 |
65 |
315 |
Итого |
|
2977 |
16627 |
Прочие затраты Расчет суммы расходов по использованию вычислительной техники.
В статью расходов включается амортизация за время использования компьютера, а так же стоимость услуг Интернет провайдера. Амортизационные отчисления рассчитываются по формуле А.8.
(А.8)
Стоимость доступа в сеть Интернет составляет 400 руб/мес.
Итого затраты на использование компьютера и сети Интернет за четыре месяца составят:
Затраты на выполнение специальных анализов.
При выполнении исследования были проведены специальные анализы в лабораториях, стоимость которых указана в таблице А.5.
Таблица А.5. Расчет стоимости проведения специальных анализов
Название анализа |
Цена за один анализ, руб. |
Количество анализов |
Затраты на проведение анализа, руб. |
Масс-спектрометрический анализ методом MALDI-TOF и MALDI-TOF-TOF |
300 |
30 |
9000 |