
- •Содержание
- •1 Аналитический обзор 11
- •2 Методическая часть 29
- •3. Экспериментальная часть 37
- •4 Обсуждение результатов эксперимента 44
- •Условные обозначения
- •Введение
- •1 Аналитический обзор
- •1.1 Регулярные мультимолекулярные структуры
- •1.2 Хроматография
- •1.2.1 Металл-аффинная хроматография – сочетание принципов лигандообменной и аффинной хроматографии
- •1.3 Методы характеризации сорбентов
- •1.3.1 Удельная поверхность
- •1.3.2 Емкость сорбента, влажность
- •1.3.3 Электрокинетический потенциал
- •1.4 Maldi масс-спектрометрия
- •1.5 Идентификация белков – метод pmf
- •1.6 Тандемная масс-спектрометрия (мс-мс) и идентификация пептиов по фрагментным масс-спектрам
- •1.7 Идентификация пост-трансляционных модификаций
- •1.8 Аддукты зомана с сывороточным альбумином
- •2 Методическая часть
- •2.1 Используемые материалы:
- •2.2 Методики получения сорбента и исследования
- •2.2.1 Получение рмм (FeIii) сорбента
- •2.2.2 Определение удельной поверхности сорбента
- •2.2.3 Определение сорбционной емкости сорбента
- •2.2.3.1 Проведение металл-аффинного анализа
- •2.2.3.2 Определение влажности рмм Fe(III) сорбента
- •2.2.3.3 Определение влажности коммерческого сорбента
- •2.2.4 Анализ фосфорилированных пептидов казеина молока коровы
- •2.2.4.1 Выделение суммарного белка из обезжиренного сухого молока
- •2.2.4.2 Гидролиз суммарного белка молока коровы в присутствии трипсина
- •2.2.5 Анализ фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека
- •2.2.5.1 Гидролиз сывороточного альбумина человека в присутствии пепсина
- •2.2.6 Масс-спектрометрический анализ
- •2.2.6.1 Масс-спектрометрический анализ методом maldi-tof и maldi-tof-tof
- •2.2.6.2 Обработка данных масс-спектрометрического анализа
- •3. Экспериментальная часть
- •3.1. Получение рмм Fe(III) сорбента
- •3.2 Определение удельной поверхности
- •3.3 Определение электрокинетического потенциала и размера частиц.
- •3.4 Определение сорбционной емкости сорбента
- •3.4.1Проведение металл-аффинного анализа
- •3.4.2 Определение содержание пептида в проскоке и контрольном образце
- •3.4.3 Определение влажности коммерческого сорбента и рммс Fe(III)
- •3.5 Анализ фосфорилированных пептидов казеина молока коровы
- •3.5.1 Приготовление микроколонки с сорбентом
- •3.5.2 Металл-аффинная хроматография на коммерческом сорбенте
- •3.5.3 Металл-аффинная хроматография на рммс Fe(III)
- •3.6 Анализ фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека
- •3.6.1 Приготовление металл-аффинной колонки
- •3.6.2 Выбор элюэнта
- •3.6.3 Металл-аффинная хроматография на коммерческом сорбенте
- •3.6.4 Металл-аффинная хроматография на рммс Fe(III)
- •3.7 Масс-спектрометрический анализ
- •3.7.1 Проведение масс-спектрометрического анализа
- •4 Обсуждение результатов эксперимента
- •4.1 Охарактеризация сорбента
- •4.1.1. Получение рмм сорбента, содержащего ионы железа (III) и приготовление хроматографических колонок.
- •4.1.2 Определение удельной поверхности
- •4.1.3 Определение емкости сорбента
- •4.1.4 Микроэлектрофоретические исследования.
- •4.1.4.1 Определение электрокинетического потенциала
- •4.1.4.2 Расчет удельной поверхности рмм сорбента
- •4.2 Исследование возможности специфичного выделения фосфорилированных пептидов из биологического образца методом металл-аффинной хроматографии с использованием рммс(Fe III)
- •4.3 Разработка метода металл-аффинного выделения прямых ковалентных аддуктов зомана с сывороточным альбумином с помощью рмм сорбентов Fe(III) для последующего масс-спектрометрического анализа
- •4.3.1 Поиск и идентификация аддуктов сывороточного альбумина человека с зоманом
- •4.3.2 Выделение фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека с использованием рммс (Fe III)
- •4.3.2 Масс-спектрометрическая идентификация сайтов связывания зомана с альбумином при взаимодействии с белками in vitro
- •Выводы по работе:
- •Список использованных источников.
- •Приложение а Технико-экономическая оценка научно-исследовательской работы Обоснование договорной цены на разработку
- •Расчет затрат на научно-исследовательскую разработку
- •Расчет затрат на сырье, материалы, реактивы, покупные изделия и полуфабрикаты
- •Расчет затрат на энергоресурсы
- •Расчет затрат на приборы, оборудование для научно-экспериментальных работ и суммы амортизационных отчислений
- •Расчет затрат на оплату труда с обязательными начислениями
- •Прочие затраты Расчет суммы расходов по использованию вычислительной техники.
- •Затраты на выполнение специальных анализов.
- •Расчет суммы накладных расходов
- •Расчет сметы затрат на разработку
- •Приложение б Охрана труда и окружающей среды
- •1 Опасные и вредные производственные факторы
- •2 Пожарная безопасность
- •3 Обеспечение санитарно-гигиенических условий
- •4 Вентиляция
- •5 Аптечка и ее содержание
- •6 Освещение помещения
- •7 Безопасность выполнения работы в лаборатории
- •8 Анализ технологических операций
- •9 Меры первой помощи
- •Охрана окружающей среды
- •Приложение в
- •Приложение г Масс-спектры смеси триптических пептидов казеина, элюированных с колонки с сорбентом, содержащим ионы железа.
Расчет затрат на энергоресурсы
В составе энергетических затрат определяются затраты на электроэнергию, пар, воду, холод и другие ресурсы, использованные непосредственно при выполнении исследования.
Затраты на электроэнергию, использованную при выполнении исследования, рассчитывается следующим образом:
,
(А.3)
где Mi - установленная мощность электродвигателей оборудования и электроприборов, кВт, принимаемая по паспортным данным используемого оборудования;
Kмi — коэффициент использования оборудования по мощности, доли единицы, обычно принимается в интервале от 0,7 до 0,9;
Ti - время использования оборудования и приборов за весь период исследования, ч;
Цэ – цена одного киловатт-часа электроэнергии, руб.
Цэ=2,9 руб/кВт ч.
Расчет затрат на электроэнергию приведен в таблице А.2.
Таблица А.2 - Расчет затрат на электроэнергию |
|
|
||||||
Использованные оборудование и приборы |
Число единиц оборудо-вания, шт n |
Установ-ленная мощность, кВт Мi |
Время использо-вания оборудо-вания, ч Ti |
Коэффи-циент исполь-зуемой мощности Кмi |
Цена одного кВт/час электроэнер-гии, руб Цэ |
Затраты на электро-энергию, руб Зэ |
||
Весы лабораторные электронные Kern ALJ 220-4 |
1 |
0,01 |
20 |
0,9 |
2,9 |
0,5 |
||
Ультразвуковая мойка Bransonic 1510E |
1 |
0,08 |
10 |
0,9 |
2,9 |
2,1 |
||
Термостат твердотельный «Термит» |
1 |
0,2 |
10 |
0,7 |
2,9 |
4,06 |
||
Хроматограф жидкостный микроколоночный «Милихром А-02» |
1 |
0,117 |
10 |
0,9 |
2,9 |
3,05 |
||
Микроцентрифуга настольная Eppendorf MiniSpin |
1 |
0,07 |
10 |
0,9 |
2,9 |
1,83 |
||
Перемешивающее устройство ЛАБ-ПУ-02 |
1 |
0,05 |
10 |
0,9 |
2,9 |
1,3 |
||
Дистиллятор АДЭ-5 |
1 |
5 |
80 |
0,9 |
2,9 |
1044 |
||
Продолжение таблицы А.2 |
||||||||
Использованные оборудование и приборы |
Число единиц оборудо-вания, шт n |
Установ-ленная мощность, кВт Мi |
Время использо-вания оборудо-вания, ч Ti |
Коэффи-циент исполь-зуемой мощности Кмi |
Цена одного кВт/час электроэнер-гии, руб Цэ |
Затраты на электро-энергию, руб Зэ |
||
Дистиллятор АДЭ-5 |
1 |
5 |
80 |
0,9 |
2,9 |
1044 |
||
Хроматограф газовый «Цвет-600» |
1 |
0,65 |
2 |
0,9 |
2,9 |
3,4 |
||
Интегратор цифровой И-02 |
1 |
0,08 |
2 |
0,9 |
2,9 |
0,4 |
||
Итого |
|
1060,64 |
Расчет суммы затрат на другие виды энергии (Зэi) осуществляется по формуле:
,
(А.4)
где Рэi - расход i-того вида энергоресурса, в нат. единицах измерения;
Цэi - цена i-того вида энергоресурса за ед., руб.
При выполнении НИР было израсходовано 10м3 холодной воды стоимостью 25 руб./м3.
Таким образом, затраты на воду составят: Зэi = 10·25 = 250 руб.