
- •Содержание
- •1 Аналитический обзор 11
- •2 Методическая часть 29
- •3. Экспериментальная часть 37
- •4 Обсуждение результатов эксперимента 44
- •Условные обозначения
- •Введение
- •1 Аналитический обзор
- •1.1 Регулярные мультимолекулярные структуры
- •1.2 Хроматография
- •1.2.1 Металл-аффинная хроматография – сочетание принципов лигандообменной и аффинной хроматографии
- •1.3 Методы характеризации сорбентов
- •1.3.1 Удельная поверхность
- •1.3.2 Емкость сорбента, влажность
- •1.3.3 Электрокинетический потенциал
- •1.4 Maldi масс-спектрометрия
- •1.5 Идентификация белков – метод pmf
- •1.6 Тандемная масс-спектрометрия (мс-мс) и идентификация пептиов по фрагментным масс-спектрам
- •1.7 Идентификация пост-трансляционных модификаций
- •1.8 Аддукты зомана с сывороточным альбумином
- •2 Методическая часть
- •2.1 Используемые материалы:
- •2.2 Методики получения сорбента и исследования
- •2.2.1 Получение рмм (FeIii) сорбента
- •2.2.2 Определение удельной поверхности сорбента
- •2.2.3 Определение сорбционной емкости сорбента
- •2.2.3.1 Проведение металл-аффинного анализа
- •2.2.3.2 Определение влажности рмм Fe(III) сорбента
- •2.2.3.3 Определение влажности коммерческого сорбента
- •2.2.4 Анализ фосфорилированных пептидов казеина молока коровы
- •2.2.4.1 Выделение суммарного белка из обезжиренного сухого молока
- •2.2.4.2 Гидролиз суммарного белка молока коровы в присутствии трипсина
- •2.2.5 Анализ фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека
- •2.2.5.1 Гидролиз сывороточного альбумина человека в присутствии пепсина
- •2.2.6 Масс-спектрометрический анализ
- •2.2.6.1 Масс-спектрометрический анализ методом maldi-tof и maldi-tof-tof
- •2.2.6.2 Обработка данных масс-спектрометрического анализа
- •3. Экспериментальная часть
- •3.1. Получение рмм Fe(III) сорбента
- •3.2 Определение удельной поверхности
- •3.3 Определение электрокинетического потенциала и размера частиц.
- •3.4 Определение сорбционной емкости сорбента
- •3.4.1Проведение металл-аффинного анализа
- •3.4.2 Определение содержание пептида в проскоке и контрольном образце
- •3.4.3 Определение влажности коммерческого сорбента и рммс Fe(III)
- •3.5 Анализ фосфорилированных пептидов казеина молока коровы
- •3.5.1 Приготовление микроколонки с сорбентом
- •3.5.2 Металл-аффинная хроматография на коммерческом сорбенте
- •3.5.3 Металл-аффинная хроматография на рммс Fe(III)
- •3.6 Анализ фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека
- •3.6.1 Приготовление металл-аффинной колонки
- •3.6.2 Выбор элюэнта
- •3.6.3 Металл-аффинная хроматография на коммерческом сорбенте
- •3.6.4 Металл-аффинная хроматография на рммс Fe(III)
- •3.7 Масс-спектрометрический анализ
- •3.7.1 Проведение масс-спектрометрического анализа
- •4 Обсуждение результатов эксперимента
- •4.1 Охарактеризация сорбента
- •4.1.1. Получение рмм сорбента, содержащего ионы железа (III) и приготовление хроматографических колонок.
- •4.1.2 Определение удельной поверхности
- •4.1.3 Определение емкости сорбента
- •4.1.4 Микроэлектрофоретические исследования.
- •4.1.4.1 Определение электрокинетического потенциала
- •4.1.4.2 Расчет удельной поверхности рмм сорбента
- •4.2 Исследование возможности специфичного выделения фосфорилированных пептидов из биологического образца методом металл-аффинной хроматографии с использованием рммс(Fe III)
- •4.3 Разработка метода металл-аффинного выделения прямых ковалентных аддуктов зомана с сывороточным альбумином с помощью рмм сорбентов Fe(III) для последующего масс-спектрометрического анализа
- •4.3.1 Поиск и идентификация аддуктов сывороточного альбумина человека с зоманом
- •4.3.2 Выделение фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека с использованием рммс (Fe III)
- •4.3.2 Масс-спектрометрическая идентификация сайтов связывания зомана с альбумином при взаимодействии с белками in vitro
- •Выводы по работе:
- •Список использованных источников.
- •Приложение а Технико-экономическая оценка научно-исследовательской работы Обоснование договорной цены на разработку
- •Расчет затрат на научно-исследовательскую разработку
- •Расчет затрат на сырье, материалы, реактивы, покупные изделия и полуфабрикаты
- •Расчет затрат на энергоресурсы
- •Расчет затрат на приборы, оборудование для научно-экспериментальных работ и суммы амортизационных отчислений
- •Расчет затрат на оплату труда с обязательными начислениями
- •Прочие затраты Расчет суммы расходов по использованию вычислительной техники.
- •Затраты на выполнение специальных анализов.
- •Расчет суммы накладных расходов
- •Расчет сметы затрат на разработку
- •Приложение б Охрана труда и окружающей среды
- •1 Опасные и вредные производственные факторы
- •2 Пожарная безопасность
- •3 Обеспечение санитарно-гигиенических условий
- •4 Вентиляция
- •5 Аптечка и ее содержание
- •6 Освещение помещения
- •7 Безопасность выполнения работы в лаборатории
- •8 Анализ технологических операций
- •9 Меры первой помощи
- •Охрана окружающей среды
- •Приложение в
- •Приложение г Масс-спектры смеси триптических пептидов казеина, элюированных с колонки с сорбентом, содержащим ионы железа.
-
Приложение а Технико-экономическая оценка научно-исследовательской работы Обоснование договорной цены на разработку
Базовым принципом ценообразования является установление цены на товар, в том числе и на научно-исследовательскую работу (НИР) на таком уровне, чтобы она, во-первых, возмещала затраты продавца (разработчика) на разработку и, во-вторых, обеспечила взаимную выгоду (экономический эффект, прибыль, доход) как продавца, так и покупателя.
В теории и практике ценообразования принято выделять минимальную цену продавца и максимальную цену покупателя.
Под минимальной ценой продавца понимается цена, ниже которой продажа разработки нецелесообразна. Обычно уровень данной цены определяется затратами на разработку (или с учетом минимальной рентабельности).
Под максимальной ценой покупателя понимается цена, выше которой затраты на приобретение и подготовку к использованию разработки не окупятся будущей прибылью от ее использования.
В реальной коммерческой практике договорная цена устанавливается в интервале между минимальной ценой продавца (нижний предел) и максимальной ценой покупателя (верхний предел цены).
По приводимым в литературе данным, цена на разработку («ноу-хау», лицензия) составляет от 5 % до 30 % будущей прибыли покупателя за весь период использования разработки (жизненный цикл товара).
Ниже приводятся методы расчета минимальной цены продавца и максимальной цены покупателя.
Расчет сметы затрат и определение минимальной цены разработки
Минимальная цена продавца разработки (нижний предел цены) может быть установлена:
а) на уровне затрат на проведение исследования;
б) с учетом минимальной расчетной рентабельности к затратам (35%).
В случае учета рентабельности нижний предел цены (Цнп) определяется затратным методом по формуле (А.1):
,
(А.1)
где С - затраты на разработку (себестоимость научно-технической
разработки продукции);
Рс— расчетная минимальная рентабельность (% к себестоимости).
Если разработка выполняется по заказу (договору), то эти затраты, так же как и уровень рентабельности, включаемой в цену, подлежат согласованию с заказчиком.
Исходной базой для расчета нижнего предела цены служат затраты на разработку, определяемые по смете затрат.
Расчет затрат на научно-исследовательскую разработку
Затраты на разработку включают в себя расходы по основным статьям сметы, в том числе:
- сырье, материалы, реактивы, покупные изделия и полуфабрикаты;
- энергетические затраты;
- оплата труда персонала с обязательным начислением;
- амортизация оборудования и приборов для научно-экспериментальных работ;
- выполнение специальных анализов;
- использование вычислительной техники;
- прочие расходы (услуги сторонних организаций и др.).
Все вышеперечисленные статьи составляют прямые затраты на разработку. Полные затраты на разработку учитывают также накладные расходы.
Расчет затрат на сырье, материалы, реактивы, покупные изделия и полуфабрикаты
Затраты на сырье, материалы и реактивы (Зм), израсходованные на проведение исследования, для каждого вида этих ресурсов определяются исходя из цены каждого вида ресурса (Цi) и его расхода (Pi) в нат. единицах:
(А.2)
где i=l,2,3...n - виды материальных ресурсов.
Расчет затрат на сырье, материалы и реактивы представлен в таблице А.1. Реактивы, стоимость которых указана в евро помечены «*», цены в рублях представлены исходя из курса ЦБ на 16.11.2011. 1 EUR = 41,7руб
Таблица А.1 - Затрат на сырье, материалы и реактивы
Наименование |
Единицы измерения |
Израсходованное количество, н.ед. |
Цена за единицу, руб. |
Сумма затрат, руб. |
|||
|
5 мл |
100 мкл |
4700 |
94 |
|||
Ацетонитрил, хч* |
л |
0,4 |
10813 |
4325,2 |
|||
Трипсин (Sigma Aldrich) |
20мкг |
8 мкг |
1500 |
600 |
|||
Раствор Аммиака 10% |
40 мл |
30мл |
20 |
15 |
|||
Жидкий азот, тех. |
л |
1,25 |
47,20 |
59 |
|||
Гелий, вс |
Баллон 40л |
5,28 |
2085 |
275,2 |
|||
CHCA MALDI Matrix* |
25 мг |
3 |
834 |
100 |
|||
Пробирка типа Eppendorf на 1,5мл |
500шт/уп |
250 |
300 |
150 |
|||
Пробирка резьбовая типа Falcon 10 мл |
250шт/уп |
30 |
750 |
90 |
|||
|
|
|
|
|
|
Продолжение таблицы А.1
|
||||
Наименование |
Единицы измерения |
Израсходованное количество, н.ед. |
Цена за единицу, руб. |
Сумма затрат, руб. |
Наконечник автоматической пипетки на 10мкл |
96 шт |
150 |
170 |
266 |
Наконечник автоматической пипетки на 200мкл |
1000шт/уп |
150 |
450 |
67,5 |
Наконечник автоматической пипетки на 1мл |
1000шт |
50 |
530 |
26,5 |
Millipore ZipTip С18 |
96шт |
10 |
12510 |
1303 |
Фильтр Millex-GV, 0.22µm PVDF 4mm |
50 шт |
10 |
6680 |
1336 |
Ultrafiltration Spin-Columns, 0.45μm |
50 шт |
15 |
4800 |
1440 |
Общая стоимость |
|
10147,4 |
||
Неучтенные затраты (25 %) |
|
2536,8 |
||
Итого: |
|
12684,2 |