- •Содержание
- •1 Аналитический обзор 11
- •2 Методическая часть 29
- •3. Экспериментальная часть 37
- •4 Обсуждение результатов эксперимента 44
- •Условные обозначения
- •Введение
- •1 Аналитический обзор
- •1.1 Регулярные мультимолекулярные структуры
- •1.2 Хроматография
- •1.2.1 Металл-аффинная хроматография – сочетание принципов лигандообменной и аффинной хроматографии
- •1.3 Методы характеризации сорбентов
- •1.3.1 Удельная поверхность
- •1.3.2 Емкость сорбента, влажность
- •1.3.3 Электрокинетический потенциал
- •1.4 Maldi масс-спектрометрия
- •1.5 Идентификация белков – метод pmf
- •1.6 Тандемная масс-спектрометрия (мс-мс) и идентификация пептиов по фрагментным масс-спектрам
- •1.7 Идентификация пост-трансляционных модификаций
- •1.8 Аддукты зомана с сывороточным альбумином
- •2 Методическая часть
- •2.1 Используемые материалы:
- •2.2 Методики получения сорбента и исследования
- •2.2.1 Получение рмм (FeIii) сорбента
- •2.2.2 Определение удельной поверхности сорбента
- •2.2.3 Определение сорбционной емкости сорбента
- •2.2.3.1 Проведение металл-аффинного анализа
- •2.2.3.2 Определение влажности рмм Fe(III) сорбента
- •2.2.3.3 Определение влажности коммерческого сорбента
- •2.2.4 Анализ фосфорилированных пептидов казеина молока коровы
- •2.2.4.1 Выделение суммарного белка из обезжиренного сухого молока
- •2.2.4.2 Гидролиз суммарного белка молока коровы в присутствии трипсина
- •2.2.5 Анализ фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека
- •2.2.5.1 Гидролиз сывороточного альбумина человека в присутствии пепсина
- •2.2.6 Масс-спектрометрический анализ
- •2.2.6.1 Масс-спектрометрический анализ методом maldi-tof и maldi-tof-tof
- •2.2.6.2 Обработка данных масс-спектрометрического анализа
- •3. Экспериментальная часть
- •3.1. Получение рмм Fe(III) сорбента
- •3.2 Определение удельной поверхности
- •3.3 Определение электрокинетического потенциала и размера частиц.
- •3.4 Определение сорбционной емкости сорбента
- •3.4.1Проведение металл-аффинного анализа
- •3.4.2 Определение содержание пептида в проскоке и контрольном образце
- •3.4.3 Определение влажности коммерческого сорбента и рммс Fe(III)
- •3.5 Анализ фосфорилированных пептидов казеина молока коровы
- •3.5.1 Приготовление микроколонки с сорбентом
- •3.5.2 Металл-аффинная хроматография на коммерческом сорбенте
- •3.5.3 Металл-аффинная хроматография на рммс Fe(III)
- •3.6 Анализ фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека
- •3.6.1 Приготовление металл-аффинной колонки
- •3.6.2 Выбор элюэнта
- •3.6.3 Металл-аффинная хроматография на коммерческом сорбенте
- •3.6.4 Металл-аффинная хроматография на рммс Fe(III)
- •3.7 Масс-спектрометрический анализ
- •3.7.1 Проведение масс-спектрометрического анализа
- •4 Обсуждение результатов эксперимента
- •4.1 Охарактеризация сорбента
- •4.1.1. Получение рмм сорбента, содержащего ионы железа (III) и приготовление хроматографических колонок.
- •4.1.2 Определение удельной поверхности
- •4.1.3 Определение емкости сорбента
- •4.1.4 Микроэлектрофоретические исследования.
- •4.1.4.1 Определение электрокинетического потенциала
- •4.1.4.2 Расчет удельной поверхности рмм сорбента
- •4.2 Исследование возможности специфичного выделения фосфорилированных пептидов из биологического образца методом металл-аффинной хроматографии с использованием рммс(Fe III)
- •4.3 Разработка метода металл-аффинного выделения прямых ковалентных аддуктов зомана с сывороточным альбумином с помощью рмм сорбентов Fe(III) для последующего масс-спектрометрического анализа
- •4.3.1 Поиск и идентификация аддуктов сывороточного альбумина человека с зоманом
- •4.3.2 Выделение фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека с использованием рммс (Fe III)
- •4.3.2 Масс-спектрометрическая идентификация сайтов связывания зомана с альбумином при взаимодействии с белками in vitro
- •Выводы по работе:
- •Список использованных источников.
- •Приложение а Технико-экономическая оценка научно-исследовательской работы Обоснование договорной цены на разработку
- •Расчет затрат на научно-исследовательскую разработку
- •Расчет затрат на сырье, материалы, реактивы, покупные изделия и полуфабрикаты
- •Расчет затрат на энергоресурсы
- •Расчет затрат на приборы, оборудование для научно-экспериментальных работ и суммы амортизационных отчислений
- •Расчет затрат на оплату труда с обязательными начислениями
- •Прочие затраты Расчет суммы расходов по использованию вычислительной техники.
- •Затраты на выполнение специальных анализов.
- •Расчет суммы накладных расходов
- •Расчет сметы затрат на разработку
- •Приложение б Охрана труда и окружающей среды
- •1 Опасные и вредные производственные факторы
- •2 Пожарная безопасность
- •3 Обеспечение санитарно-гигиенических условий
- •4 Вентиляция
- •5 Аптечка и ее содержание
- •6 Освещение помещения
- •7 Безопасность выполнения работы в лаборатории
- •8 Анализ технологических операций
- •9 Меры первой помощи
- •Охрана окружающей среды
- •Приложение в
- •Приложение г Масс-спектры смеси триптических пептидов казеина, элюированных с колонки с сорбентом, содержащим ионы железа.
-
Список использованных источников.
-
Масс-спектрометрия с мягкими методами ионизации в протеомном анализе (обзор) / Н.В. Краснов, Я.И.Лютвинский, Е.П.Подольская // Научное приборостроение. - 2010. Т.20, №4. С.5-20.
-
Uma K. Aryal, Andrew R. S. Ross. Enrichment and analysis of phosphopeptides under different experimental conditions using titanium dioxide affinity chromatography and mass spectrometry. // Rapid Commun. Mass Spectrom. 2010; 24: 219–231.
-
Идентификация пептидов сывороточного альбумина, модифицированных фосфорорганическими соединениями, с применением методов хроматографии и масс-спектрометрии / В.Д.Гладилович, И.А. Краснов. Е.П. Подольская, Я.А.Дубровский, Н.Г. Войтенко, С.В. Фиронов, В.Н. Бабаков, Н.В. Гончаров, Н.В.Краснов // Научное приборостроение. - 2010. Т.20. №4. С.84-92.
-
Ковальчук,М.В. Молекулярный конструктор Лэнгмюра-Блоджетт / М.В. Ковальчук, В.В. Клечковская, Л.А. Фейгин. Природа, 2003.
-
Blodgett, Katherine B. Use of Interface to Extinguish Reflection of Light from Glass. Physical Review, 55, 1939.
-
Пат. 2193255 Российская Федерация, H01L21/18. Микроэлектронная структура на основе кремний-диэлектрик для изготовления полупроводниковых приборов и способ ее получения / В.В. Лучинин, Д.А. Козодаев, С.И. Голоудина, В.М. Пасюта, А.В. Корляков, В.И. Закржевский, В.В. Кудрявцев, В.П. Склизкова; заявитель и патентообладатель Центр технологий микроэлектроники. - № 2002101249/28; заявл. 08.01.2002; опубл. 20.11.2002.
-
Рамбиди Н.Г. Молекулярная элементная база перспективных информационно-логических устройств / Н.Г Рамбиди, В.М Замалин, Ю.М.Сандлер, П.А Тодуа, А.С. Холманский. - Итоги науки и техники, сер. Электроника. Т. 22. М.: ВИНИТИ, 1987, 168 с.
-
Аналитическая хроматография / К.И.Сакодынский, В.В. Бражников, С.А.Волков, В.Ю.Зельвенский, Э.С.Ганкина, В.Д.Шатц. – М.-Химия, 1993. – 464с.
-
Хроматография. Основные понятия. Терминология / Под ред. В.А. Даванкова. Серия "Сборники научно-нормативной терминологии". Вып. 114. М.: Комитет научной терминологии РАН, 1997.
-
Grigoriy S. Chaga. Twenty-five years of immobilized metal ion affinity chromatography: past, present and future. // J. Biochem. Biophys. Methods. 2001;49:313–334.
-
Jerker Porath. Immobilized Metal Ion Affinity Chromatography // Protein Expression and purification, 1992;3:263-281.
-
Leonard D. Holmes, Martin R. Schiller. Immobilized Iron(III) Metal Affinity Chromatography for the Separation of Phosphorylated Macromolecules: Ligands and Applications. // Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies. 1997;20(1):123-142.
-
Ворожбитова Л.Н.Определение удельной поверхности твердых тел газохроматографическим методом: Методические указания / СпбГТИ(ТУ) – 1998. 24с.
-
Кельцев Н.В. Основы адсорбционной техники / Н.В.Кельцев. 2-е изд. – М., Химия, 1984. – 592с.
-
Исследование электроповерхностных свойств пленок стеариновой кислоты и ее солей в растворах электролитов / Н.Г.Суходолов, Л.Г.Левашова, А.И.Янилович, С.Ю.Павлов // Биологические мембраны. т.7 №12 1990. с 1337-1341.
-
A. El-Aneed, A. Cohen, J. Banoub . Mass Spectrometry, Review of the Basics: Electrospray, MALDI, and Commonly Used Mass Analyzers. // Applied Spectroscopy Reviews, 2009;44(3):210-230.
-
R. Knochenmuss, A. Stortelder, K. Breuker and R. Zenobi. Secondary ion–molecule reactions in matrix-assisted laser desorption/ionization. // J. Mass Spectrom. 2000;35(11):1237–1245.
-
A. El-Aneed, A. Cohen, J. Banoub . Mass Spectrometry, Review of the Basics: Electrospray, MALDI, and Commonly Used Mass Analyzers. // Applied Spectroscopy Reviews, 2009;44(3):210-230.
-
F. Hillenkamp, M. Karas. Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry of Biopolymers. // Anal. Chem. 1991;63(24):1193A-1202A.
-
Michael Karas, Matthias Glückmann and Jürgen Schefer. Ionization in matrix-assisted laser desorption/ionization: singly charged molecular ions are the lucky survivors. // J. Mass Spectrom. 2000;35:1-12.
-
R. Knochenmuss, A. Stortelder, K. Breuker and R. Zenobi. Secondary ion–molecule reactions in matrix-assisted laser desorption/ionization. // J. Mass Spectrom. 2000;35(11):1237–1245.
-
. Тандемные масс-спектрометры в биохимии / А. Н. Веренчиков, Н. В. Краснов, Л. Н. Галль // Научное приборостроение. - 2004;14(2):4–23.
-
Li, B., Schopfer, L. M., Hinrichs, S. H., Masson, P., and Lockridge,O. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry assay for organophosphorus toxicants bound to human albumin at Tyr411. // Anal. Biochem. 2007;361:263–272.
-
Bin Li, Lawrence M. Schopfer, Steven H. Hinrichs, Patrick Masson, Oksana Lockridge. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of- flight mass spectrometry assay for organophosphorus toxicants bound to human albumin at Tyr411 // Analytical Biochemistry. 2007;361:263–272.
-
Bin Li, Lawrence M. Schopfer, Steven H. Hinrichs, Patrick Masson, Oksana Lockridge. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of- flight mass spectrometry assay for organophosphorus toxicants bound to human albumin at Tyr411 // Analytical Biochemistry. 2007;361:263–272.
-
Bin Li, Schopfer L.M., Hinrichs S.H., Masson P., Lockridge O. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry assay for organophosphorus toxicants bound to human albumin at Tyr411 // Anal. Biochem. 2007. V.361. P. 263-272.
-
Harald J., Breyer F., Thumfart J.O., Hochstetter H., Thiermann H. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) for detection and identification of albumin phosphylation by organophosphorus pesticides and G- and V-type nerve agents // Anal Bioanal Chem. 2010.
-
ГОСТ 4495—87. Молоко цельное сухое. – Введ. 01.09.88. – М.: Межгосударственный стандарт: Изд-во Стандартинформ, 2008. - 6с.
-
Исследование свойств наноструктур (пленок Лэнгмюра-Блоджетт), содержащих ионы железа, и определение их состава с привлечением методов масс-спектрометрии / Е.А.Рожкова, И.А.Краснов, Н.Г.Суходолов, Е.П.Подольская, А.И.Янклович, Н.В.Краснов // Научное приборостроение 2008, Т.18. №4.С.54-61.
-
. Идентификация алкилированного аддукта сывороточного альбумина человека методами масс-спектрометрии / И.А.Краснов, Е.П.Подольская, Н.В.Гончаров, В.Н.Бабаков, Л.М.Глашкина, Е.Е.Ермолаев, Я.А.Дубровский, Д.С.Прокофьева, Н. Г.Войтенко, Т.И.Смолихина, Н.Б.Поляков, А.С.Радилов, Н.В.Краснов // Научное приборостроение. - 2008. Т.18. №4.С.54-61.
-
Сычев С.Н.Высокоэффективная жидкостная хроматография на микроколоночных хроматографах серии «Милихром»: Монография / С.Н.Сычев, К.С.Сычев, В.А.Гаврилина. – Орел: ОрелГТУ, 2002. – 134с.
-
Блинов Л.М. Физические свойства и применение Лэнгмюровских моно- и мультимолекулярных структур. Успехи химии, Т. 52, Вып. 8, 1989.
-
Блинов Л.М. Лэнгмюровские пленки. Успехи физических наук, Т. 155, Вып. 3, с.433- 480, 1988.
-
Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии /О.Б. Рудаков, И.А. Востров, С.В. Федоров, А.А. Филлипов, В.Ф. Селеменев, А.А. Приданцев. – Воронеж: Водолей. 2004. -528 с/
-
Масс-спектрометрия с мягкими методами ионизации в токсикологическом анализе / Е.П.Подольская, В.Н. Бабаков // Научное приборостроение. - 2008. Т.18, №4. С.5-12.
-
. Определение токсинов пептидной природы методом MALDI-MS (обзор) / Я.А.Дубровский, Е.П.Подольская // Научное приборостроение. - 2010. Т.20. №4. С.21-35.
-
Кувшинов В.В. Экономическая оценка результатов дипломной научно-исследовательской работы. Бизнес-план инновационного проекта: Метод. указания для студентов технологических специальностей / В.В.Кувшинов, Н.В.Михайлова, О.В.Сарычева, К.Г.Нужная. – СПб.: ГОУ ВПО СПбГТИ(ТУ), 2003 – 85с.
-
ГОСТ 12.0.003-74. Система стандартов безопасности труда. Опасные и вредные производственные факторы. Классификация. – Введ. 01.01.1976. – М.: Межгосударственный стандарт : Изд-во стандартов,2004. – 4с.
-
ГОСТ 12.1.003-83 ССБТ. Шум. Общие требования. – Введ. 01.07.1982. – М.: Межгосударственный стандарт : Изд-во стандартов, 2008. – 4с.
-
СН 2.2.4/2.1.8-562-96 Шум на рабочих местах, в помещениях жилых, общественных зданий и на территории жилой застройки. – Введ. 31.10.1996. - М.: Межгосударственный стандарт : Изд-во стандартов, 2008. – 14с.
-
ГОСТ 12.1.012-2004. Система стандартов безопасности труда. Вибрационная безопасность. Общие требования. – Взамен ГОСТ 12.1.012-90; введ. 2008-07-01. – М.: Стандартинформ, 2008. – 16с.
-
ГОСТ 12.1.005-88. Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны. – Введ. 01.01.1989. – М.: Межгосударственный стандарт : Изд-во стандартов, 2008. – 49с.
-
Пожаровзрывоопасность веществ и материалов и средства их тушения. Справочник в 2-х частях / под ред. А.Я.Корольченко.- М.:2000.
-
ГН 2.2.5.686-98 Предельно допустимые концентрации вредных веществ в воздухе рабочей зоны. – Введ. 01.09.1998. — М: Российский регистр потенциально опасных химических и биологических веществ Минздрава России / Минздрав РФ Д998, 1998. — 207 с.
-
НПБ 105-03. Определение категорий помещенией и зданий по взрывоопасной и пожарной опасности. – Взамен НПБ 105-95, НПБ 107-97 ; введ. 01.08.2003. - ГУГПС МВД России. - М. : ВНИИПО, 2003. - 25 с.
-
ГОСТ 12.4.021 - 75. Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования. – Введ. 01.07.1976. – М.: Межгосударственный стандарт : Изд-во стандартов, 2007. – 6с.
-
СниП 23-05-95. Естественное и искусственное освещение. Нормы проектирования.-М .- Минстрой России, ГП ЦПП, 1995.
-
Правила устройства электроустановок / Минэнерго СССР. - М.: Энергоатомиздат, 1986. - 648 с.
-
СанПиН 2.2.2.542-96. Гигиенические требования к видеодисплейным терминалам, персональным электронно-вычислительным машинам и организация работ. - М.: Изд-во стандартов, 1996.
-
Захаров Л.Н. Техника безопасности в химической лаборатории / Л.Н.Захаров. – Л., 1991. – 336с.
-
Беспамятнов Г.П. Предельно допустимые концентрации химических веществ в окружающей среде. Справочник / Г.П.Беспамятнов, Ю.А.Кротов. – Л., 1985. – 528с.
-
Лидин Р.А. Химические свойства неорганических веществ: Учебное пособие для вузов. 3-е изд., испр./ Р.А.Лидин, В.А.Молочко, Л.Л.Андреева; под ред. Р.А.Лидина. – М.: Химия, 2000. 480с.
-
Кирюшкин А.А. Охрана труда и окружающей среды: Метод. указания к дипломному проектированию / А.А. Кирюшкин, З.В.Капитоненко, Г.К.Ивахнюк. - СПб., СПбГТИ(ТУ), 2005.-27с.
