0. 3. Экспериментальная часть

3.1. Получение рмм Fe(III) сорбента

Сорбент получали по методике, описанной в п.2.2.1. В качестве субфазы использовали 10^-4 М водного раствора хлорида железа (III) объемом 1,5дм³ (для ванны размером 500мм х 150мм х 20мм). На субфазу наносили 30мкл насыщенного раствора стеариновой кислоты (HSt) в гексане. После испарения гексана с поверхности водной субфазы, на поверхности образовывался монослой стеариновой кислоты, который коллапсировали, собирали с поверхности раствора в микропробирку и в дальнейшем использовали в качестве сорбента.

3.2 Определение удельной поверхности

В качестве образцов для проведения эксперимента были выбраны вещества, близкие по строению к МС сорбента – стеариновая кислота и пальмитат алюминия. В предварительно вымытые и высушенные адсорберы поместили навески образцов: , и исследовали по методике, описанной в п.2.2.2.

3.3 Определение электрокинетического потенциала и размера частиц.

Электрокинетический потенциал (ξ-потенциал) и размер частиц измеряли методом микроэлектрофореза используя прибор Zetaciser NANO ZC.

Для проведения эксперимента в колбу на 50 мл поместили 15 монослоев сорбента. При микроэлектрофоретических исследованиях регуляторами рН во всех случаях служили растворы HCl и KOH. Дисперсию сорбента получали в ультразвуком диспергаторе при частоте 44МГц в течение 3 минут. Приготовили растворы КCl с различным значением pH для двух концентраций электролита:

1,8; 3,4; 4,5; 5,8; 7 для концентрации KCl 10^-3М

2,2; 3,2; 3,5; 4,5; 5,8; 7,9 для концентрации KCl 10^-4М

После чего провели измерения электропроводности и электрофоретической подвижности на приборе Zetaciser NANO ZC. С помощью этого же прибора измерели размеры полученных структур. Данные исследования проводились на кафедре коллоидной химии Санкт–Петербургского государственного университета.

3.4 Определение сорбционной емкости сорбента

3.4.1Проведение металл-аффинного анализа

Емкость сорбента определяли с использованием фосфорилированного пептида SSNGHVY_рGKLSSI (B-60). Для определения емкости сорбента 54мкл раствора, содержащего пептид в концентрации 20мг/мл, доводили до объема 100мкл 0,1%(об. доли) TFA и наносили на колонку с 5,4 мг РММС(Fe) и собирали проскок. Затем сравнивали содержание пептида в исходном растворе и количеством, оставшемся в проскоке. Количественное определение проводили хроматографическим методом (ОФ-ВЭЖХ, Милихром А-02), с использованием метода внешнего стандарта (п.2.2.3).

3.4.2 Определение содержание пептида в проскоке и контрольном образце

Определение количества пептида в образцах проводили на жидкостном хроматографе «Милихром А-02» при следующих характеристиках:

колонка Prontosil C18, размер колонки 2,0×120мм, зерно 5,0мкм; скорость подачи элюентов 200,00 мкл/мин, градиент элюции (10-90)% элюента В; длина волны на спектрофотометрическом детекторе 280нм; объем контрольного образца, взятый на анализ – 3мкл, объем образца проскока, взятый на анализ – 10мкл.

В качестве элюентов использовались растворы объемом 200мл:

• А – 0,25%(об. доли) раствор уксусной кислоты в дистиллированной воде;

• В – 0,25%(об. доли) раствор уксусной кислоты в ацетонитриле.

Приготовленные элюенты фильтровались через фильтр с размером пор 11мкм во избежание попадания частичек пыли в прибор, и выдерживались 20 мин в ультразвуковой ванне для дегазации.