- •Учебно-методическое пособие для выполнения лабораторно-практических работ по дисциплине: «Ветеринарная вирусология».
- •Раздел I. Общая вирусология
- •Ведение
- •Раздел I. Общая вирусология
- •Тема 1. Правила работы с вируссодержащими материалами. Устройство вирусологической лаборатории
- •Методика проведения занятия и методические указания по теме
- •1.1 Техника безопасности и правила работы с вируссодержащим материалом
- •1.2 Требования к рабочим помещениям и обеспечение условий работы
- •1.3 Хранение вирусов и других материалов, учет и этикетировка их в лаборатории.
- •1.4 Основные методы консервации вирусов
- •Тема 2. Получение, транспортировка и подготовка патологического материала для вирусологических исследований.
- •Методика проведения занятия и методические указания по теме
- •2.1 Получение и обработка патологического материала
- •2.2 Получение патологоанатомического материала
- •2.3 Получение проб для гистологического исследования.
- •2.4 Транспортировка и хранение проб.
- •Тема 3. Индикация вирусов в патологическом материале по обнаружению вирионов и вирусных телец-включений
- •Методика проведения занятия и методические указания по теме
- •Тема 4. Использование лабораторных животных в диагностических исследованиях. Цели использования лабораторных животных в вирусологии
- •Методика проведения занятия и методические указания по теме
- •Тема 5. Использование лабораторных животных в диагностических исследованиях. Биопроба
- •Методика проведения занятия и методические указания по теме
- •Тема 6. Использование лабораторных животных в диагностических исследованиях. Вскрытие лабораторных животных
- •Методика проведения занятия и методические указания по теме
- •Тема 7. Использование в вирусологии куриных эмбрионов. Культивирование вирусов на куриных эмбрионах
- •Тема 8. Использование в вирусологии куриных эмбрионов. Заражение куриных эмбрионов
- •8.1 Методы экспериментального заражения куриных эмбрионов.
- •Тема 9. Использование в вирусологии куриных эмбрионов. Вскрытие куриного эмбриона и получение вируссодержащего материала. Индикация вирусов
- •9.2 Определение гемагглютинирующих свойств вирусов.
- •Тема 10. Использование в вирусологии культур клеток. Типы культур клеток
- •Тема 11. Использование в вирусологии культур клеток. Культивирование вирусов в культуре клеток
- •Тема 12. Использование в вирусологии культур клеток. Заражение культур клеток. Индикация вируса
- •Методика проведения занятия и методические указания по теме.
- •Тема 13. Титрование антител к вирусам в реакции торможения (задержки) гемагглютинации (ртга, рзга)
- •Методика проведения занятия и методические указания по теме.
- •Тема 14. Использование в вирусологии реакции непрямой гемагглютинации
- •Методика проведения занятия и методические указания по теме.
- •Тема 15. Использование в вирусологии реакции диффузной преципитации в агаровом геле
- •Методика проведения занятия и методические указания по теме.
- •15.2 Основные задачи рдп:
- •Тема 16. Титрование вирусов
- •Методика проведения занятия и методические указания по теме.
- •Библиографический список
- •Оглавление:
- •Раздел I. Общая вирусология
1.4 Основные методы консервации вирусов
Применяют следующие методы консервация вирусов:
1) при хранении плотного вирусного материала (кусочки органов или тканей) часто используют глицерин (50%-ный раствор на физиологическом растворе), который обладает бактериостатическим действием и в то же время защищает вирусы. В этом случае вирус можно хранить при 4°С несколько месяцев;
2) чаще всего вирусы хранят в холодильниках, обеспечивающих температуру минус 20, минус 30, минус 70 °С. При этой температуре некоторые вирусы без добавки защитных веществ сравнительно быстро теряют инфекционность. Известно, что чем меньше белка в вируссодержащей взвеси, тем меньше стабильность вирусов, поэтому очищенные вирусы быстро теряют свою биологическую активность. Хорошее защитное действие при замораживании и хранении вирусов оказывает добавка одного из следующих компонентов: инактивированной сыворотки крови, обезжиренного молока (от 10 до 30 %), желатина (0,5–1,5 %), ДМСО (10 %) и др. При быстром замораживании вируса до минус 196 °С (жидкий азот) с последующим хранением при этой температуре титр вируса в течение нескольких месяцев не снижается. Вирусы, чувствительные к низким значениям рН, следует замораживать в жидкостях, не содержащих однозамещенных фосфатов (NaH2PO4 или КН2РО4), которые обладают кислой реакцией и имеют более низкую точку замерзания, чем двузамещенные фосфаты (Na9HPO4 или К2НРО4) с щелочной реакцией.
Скорость оттаивания вируса существенно не влияет на его активность. Размораживать вирусы можно как при комнатной температуре, так и в водяной бане при температуре 37 °С. Во избежание частого замораживания и оттаивания одного и того же вируссодержащего материала необходимо хранить его маленькими порциями, достаточными для одноразового титрования или использования, например для реакции нейтрализации;
3) лиофилизация, т. е. высушивание в замороженном состоянии в условиях вакуума, – очень хороший способ консервирования вирусов. Для лиофилизации необходимы соответствующая аппаратура, определенный (в зависимости от вида вируса) наполнитель и тщательное выполнение процедуры сушки. На стойкость лиофилизированного вируса влияет не только выбор соответствующего наполнителя, но и состав газа в ампуле (уже 0,5 % кислорода вызывают быструю гибель вируса, в то время как влажность в границах 2–3 % существенно не влияет) и температура хранения лиофилизата – не выше 4 °С. Лиофилизацию лучше проводить в учреждениях, хорошо знакомых с этой методикой. В лиофилизированном виде вирусы могут храниться несколько лет.
Вирусологическая лаборатория должна иметь следующую документацию:
– журнал вирусологических исследований (экспертиз, сельхозучета, формы № 13-вет);
– журнал учета зараженных животных;
– журнал учета выделенных вирусов и их уничтожения;
– журнал учета движения производственных или музейных штаммов и другие книги учета согласно утвержденной инструкции.
Задания:
1. Ознакомиться с вирусологической лабораторией и ее основным оборудованием.
2. Изучить правила работы с вируссодержащим материалом.
Самостоятельная работа студентов:
а) подготовка бокса для работы;
б) отработка навыков работы с пипеткой и стерильными инструментами;
в) изучение документации лаборатории.
Подведение итогов занятия.
Задание к следующему занятию.
Контрольные вопросы
1. Какова роль вирусов в инфекционной патологии животных?
2. Что вы знаете о технике безопасности и правилах работы в вирусологической лаборатории?
3. Какие методы консервации вирусов вы знаете?
4. Какие способы уничтожения вирусов существуют в лабораторной практике?