2.3.2. Трансвагинальная пункция (извлечение яйцеклеток).

Через 36 часов с помощью пункционной иглы производится транс вагинальная пункция зрелых преовуляторных фолликулов под УЗ- контролем позволяет успешно получать ооциты. При необходимости (недостижимость яичника, спайки) пункция может быть выполнена с помощью лапароскопического доступа. Вся процедура проводится амбулаторно. Во время сбора яйцеклеток женщина находится в состоянии легкого медикаментозного сна.

2.3.3. Приготовление и опенка ооцитов.

Под микроскопом отбираются наиболее зрелые и качественные яйцеклетки, находящиеся на стадии развития метафаза 2. Полученные ооцит- кумулюсные комплексы помещают в среду для культивирования. Одной из широко используемых сред является среда Менезо Б2. среда Medicult. Чашка Петри со средой, с находящимися в ней клетками помещается в инкубатор «температура 37 градусов по Цельсию, газовый состав- 5% кислорода, 5%азота, 90% углекислого газа).

2.3.4. Получение и приготовление спермы.

Сперматозоиды могут быть получены из эякулята. После получения выполняется обработка спермы. Целью обработки является улучшение качества спермы путем получения фракции морфологически нормальных подвижных сперматозоидов и удаления семенной плазмы, неподвижных сперматозоидов, клеточного детрита и лейкоцитов После обработки оценивается качество спермы, что оказывает решающее значение на выбор: ЭКО. Сперматозоиды помещаются в водную среду, причем самые жизнеспособные и подвижные тут же «устремляются в плавание» (затем их вылавливают), а малоподвижные остаются на месте.

Оплодотворение яйцеклеток и культивирование эмбрионов.

После нахождения яйцеклетки в инкубаторе в течении 4-6 часов, находясь в специальных культкральных чашках с питательной средой, к ним подсаживают подготовленные сперматозоиды (причем на одну яйцеклетку приходится от 50 тыс. до 100 тыс. сперматозоидов). Сперматозоиды облепляют яйцеклетку, стремятся все, но только один проникает внутрь яйцеклетки.

Через 12-18 часов проводится контроль оплодотворения. Критерием наступления оплодотворения является четкая визуализация пронуклеусов и появление второго полярного тела. Зиготы переносят в свежую среду, где происходит раннее эмбриональное развитие. Дальнейшее развитие оценивается после 24 часов культивирования. Оценка включает: число и размер бластомеров; наличие ануклеарных фрагментов; темп деления эмбрионов

2.3.7. Перенос эмбрионов.

Перенос эмбрионов в полость матки проводят с помощью специального катетера. Для увеличения шансов на успех, как правило, вводятся 2-3 эмбриона. После успешного переноса врач назначает препараты, поддерживающие развитие эмбрионов (прогестерон, хорионический гонадотропин - ХГ)- Через две недели определяют уровень XГ в крови. Через три недели зародыш можно увидеть с помощью УЗИ. Оставшиеся после культивирования или неперенесенные эмбрионы могут быть заморожены для хранения и возможного последующего переноса. Использование замороженных эмбрионов позволяет женщине избежать повторной гормональной стимуляции яичников, равно как и процедуры пункции яичников.