7. Методи спектрофотометрій

Методи спектрофотометрій визначення загального|спільного| білка сироватки крові засновані на вимірюванні|вимірі| світлопогленання в ультрафіолетовій області.

Розчини білка володіють поглинанням при 270–290 і 200–225 нм|. Поглинання при 270–290 нм| визначається присутністю в молекулі білка ароматичних амінокислот — Тирозину, триптофану і фенілаланіна|. Поглинання при 200–225 нм| практично в 20 разів вище, ніж при 280 нм|, і обумовлено головним чином пептидними|пептид| зв'язками.

Точність і специфічність методів визначення білка, заснованих на поглинанні при 270 –290 нм|, невелика, оскільки зміст|вміст,утримання| Тирозину і триптофану може коливатися|вагатися| в різних білках сироватки крові. Крім того, присутність в сироватці вільних амінокислот — Тирозину і триптофану, сечової кислоти і білірубіну, що поглинають при 280 нм|, вносить певну погрішність. У зв'язку з цим даний метод не використовує для прямого визначення вміст загального|спільного| білка в сироватці.

Навпаки, поглинання в ультрафіолетовій області — 200 – 225 нм| обумовлено в основному пептидними|пептид| зв'язками, у зв'язку з чим величина поглинання різних білків сироватки розрізняється трохи. У цьому спектральному діапазоні закон Бера дотримується при концентрації білка в сироватці до 120 г/л.

Визначення загального|спільного| білка сироватки крові за допомогою прямої фотометрії при 210 нм| забезпечує отримання|здобуття| результатів, порівнянних з|із| біуретовим методом і методом Кьельдаля. В той же час даний метод практично не застосовується із-за необхідності використання кювет, що не поглинають при 210 нм|, і монохроматора|, що здорожує метод.

8. Рефрактометричні методи

Рефрактометричні методи визначення загального|спільного| білка сироватки засновані на здібності розчинів білка до заломлення світлового потоку. При температурі 17,5 °С показник заломлення води рівний 1,3332, при тій же температурі показник заломлення сироватки коливається|вагається| в межах 1,3480–1,3505. У зв'язку з тим, що концентрація електролітів і небілкових органічних сполук, що впливають на її заломлюючу здатність|здібність|, невелика і достатньо|досить| постійна в сироватці здорової людини, величина показника заломлення сироватки крові залежить в першу чергу|передусім,насамперед| від вмісту в ній білків. Калібрування приладу проводять сироваткою з|із| відомою концентрацією білка. Простота робить|чинить| рефрактометрію зручним методом для визначення змісту|вмісту,утримання| загального|спільного| білка в сироватці крові, хоча при ряду|лаві,низці| захворювань, зокрема, при цукровому діабеті, хронічній нирковій недостатності його використання може приводити|призводити,наводити| до істотної|суттєвої| помилки.

9. Колориметричні (фотометричні) методи

Колориметричні методи визначення загального|спільного| білка засновані на кольорових реакціях білків з|із| хромоген-образуючими| реактивами або на неспецифічному скріпленні|зв'язуванні| фарбника|барвника|.

Серед колориметричних методів визначення концентрації загального|спільного| білка сироватки найбільш поширеним вважається|лічить| біуретовий метод, заснований на так званій «кольоровій біуретовій реакції», в ході якої білки реагують в лужному середовищі|середі| з|із| сульфатом міді з|із| утворенням з'єднань|сполучень,сполук|, забарвлених|пофарбованих| у фіолетовий колір|цвіт|, інтенсивність забарвлення|фарбування| залежить від концентрації загального|спільного| білка в сироватці. Біуретовий метод визначення загального|спільного| білка в сироватці крові був затверджений як уніфікований в 1972 р.

Колориметричні методи визначення загального|спільного| білка сироватки крові достатньо|досить| прості і відносно дешеві. До недоліку|нестачі| методу відноситься дія деяких речовин, що інтерферує (зокрема ліків).