20.2. Эфирные масла при длительном воздействии малых радиационных доз

Работа выполнена на мышах-самцах гибридов FL(CBAЧC57BL6) массой 16—18 г. Животных содержали в условиях вивария при смешанном освещении на стандартной диете.

Гуморальный иммунный ответ оценивали по числу антителообразующих клеток в селезенке на 5-е сутки после иммунизации. Использовали метод локального гемолиза в геле агарозы (Ерне и Нордин). Учитывали число АОК на всю селезенку и на 10 6 спленоцитов. В качестве антигена использовали тимусзависимый антиген — эритроциты барана в оптимальной дозе (2-10⁸ клеток на мышь). Антиген вводили внутривенно в 0,5 мл среды 199.

Облучение экспериментальных животных выполняли на аппарате РУМ-17. Источник излучения Со-60, фокусное расстояние — 15 см, фильтры — Аl и Сu . Мощность облучения — 108 R в 1 мин.

При анализе радиопротекторного действия РАВ их ингалировали животным, помещенным в замкнутое пространство. Время ингаляции — 20 мин. С помощью ароматизатора-дозатора создавали заданную концентрацию 0,2; 0,4; 0,6 мг/м.куб. В качестве РАВ использовали композицию (лаванда, пихта, мята, базилик, жасмин).

Условия эксперимента: реакция гуморального иммунного ответа на дозированное внешнее облучение в малых дозах; динамика силы иммунного ответа у мышей, перенесших облучение в дозе 0,2 Гр; радиопротекторный эффект РАВ при дозированном хроническом облучении в малых дозах.

На первом этапе исследования была выявлена зависимость силы иммунного ответа от дозы облучения. При этом исследовали реакцию гуморального компонента иммунного ответа на дозированное внешнее облучение в малых дозах. В качестве контрольных животных были использованы интактные мыши, ибо манипуляции, связанные с облучением (подсадка мышей в контейнеры и пр.), существенно не влияли на иммунный ответ (табл. 14).

Оказалось, что однократное внешнее облучение в малых дозах способно изменить иммунный ответ (табл. 15).

Облучение в дозах 0,4 и 0,6 Гр приводило к супрессии иммунного ответа, а облучение в дозе 0,2 Гр не сопровождалось ограничением накопления АОК. Однако последующие исследования показали, что облучение, даже однократное в допустимой дозе аварийного обслуживания, сопровождается угнетением антителообразования в динамике пострадиационного периода (табл. 16).

Таблица 14. Гуморальный иммунный ответ на эритроциты барана ннтактных мышей и мышей, подвергнутых ложному облучению

Группа животных	Число опытов (и мышей)	Количество АОК
		на селезенку	на 106 спленоцитов
Интактные	2(11)	46 282	103
Ложнооблученные	2(10)	48 183	124

Таблица 15. Реакция гуморального компонента иммунного ответа на однократное дозированное внешнее облучение в малых дозах

Группа животных	Число опытов (и мышей)	Количество АОК
		на селезенку	на 106 спленоцитов
Интактные	2(13)	36 303	78
Доза 0,2 Гр	2(12)	33 164	97
Доза 0, 4 Гр	2(12)	22 676	67
Доза 0, 6 Гр	2(11)	23 288	59

Таблица 16. Динамика силы иммунного ответа у животных, перенесших внешнее равномерное облучение в дозе 0,2 Гр

Сутки послеоблучения	Группа животных	Число опытов (и мышей)	Количество АОК
			на селезенку	на 106 спленоцитов
1	Контроль Опыт	2(11) 2(12)	33 474 29 922	99 130
4	Контроль Опыт	2(10) 2(10)	25 276 11 053	51 29
8	Контроль Опыт	2(11) 2(10)	19 520 41 114	104 308

Супрессия гуморального иммунного ответа после однократного внешнего облучения в дозе 0,2 Гр была зарегистрирована на 4-е сутки пострадиационного периода.

На втором этапе исследования животных ежедневно подвергали воздействию ионизирующего излучения в течение 20 дней до суммарной дозы, равной эффективной допустимой дозе аварийного обслуживания человека, способной, судя по представленным выше данным, обусловить развитие иммунодепрессии (0,2 Гр), отчетливо регистрируемой на 4-е сутки пострадиационного периода. Мышей опытной группы перед облучением ингалировали композицией в течение 20 мин в заданных концентрациях. В качестве контроля использовали животных, получивших только ингаляцию. Иммунизацию проводили по схеме на 7-е, 15-е и 21-е сутки. Опыт дублирован. В использованных группах мышей число животных колебалось от 10 до 14.

Хроническое дозированное облучение в течение 20 дней до суммарной дозы, равной эффективной допустимой дозе аварийного обслуживания человека, сопровождалось иной динамикой модуляции функции иммунной системы по сравнению с таковой при однократном облучении в равной дозе (0,2 Гр).

Супрессия антителообразования в ответ на антигенную стимуляцию эритроцитами барана при хроническом дозированном облучении регистрировалась в тот период, когда при остром однократном облучении наблюдается стимуляция гуморального иммунного ответа, в частности на 7—8-е сутки. Очевидно, репаративные процессы в иммунной системе при хроническом дозированном облучении, имеющие клеточную природу, оказывались существенно подавленными. Ингаляция композицией РАВ в дозах 0,4 и 0,6 мг/м.куб. способна обеспечить иммунопротективный эффект, возможно, через стимуляцию репаративных процессов. В селезенке мышей, получавших ингаляции, накапливалось достоверно большое АОК по сравнению с их числом у мышей, подвергнутых только облучению. На 15-е сутки хронического дозированного облучения различия не столь демонстративны.

В основе феномена стимуляции антителогенеза при дозированном хроническом равномерном облучении, регистрируемого по числу АОК на миллион спленоцитов на 15-е сутки облучения, лежит, возможно, не только стимуляция репаративных процессов, например усиленная миграция стволовых кроветворных клеток в органы иммуногенеза из костного мозга, но и угнетение Т-супрессоров. Следовательно, есть основание предположить, что ингаляции могут реализовать свой иммунопротективный эффект не только на уровне стволовой кроветворной клетки, но и на уровне регуляторных популяций Т-лимфоцитов, снимая, например, ограничение функции Т-лимфоцитов-супрессоров. С достоверностью можно только сказать, что ежедневные ингаляции композицией в дозах 0,4—0,6 мг/м.куб. в течение 7 дней до иммунизации и 5 дней после иммунизации способны обеспечить иммунопротективный эффект при хроническом равномерном дозированном облучении малыми дозами, не превышающими суммарной дозы 0,12 Гр.

Эфирные масла и резервные возможности костного мозга животных при хроническом радиационном облучении. В работе использованы самцы мышей гибридов FL(CBAЧC57BL6) 3-месячного возраста. Хроническое радиационное облучение в малых дозах воспроизводили на аппарате РУМ-17 ежедневно в дозе 0,2 Гр в течение 25 дней. Все животные были разделены на три группы: 1-я группа — интактные мыши, 2-я группа — контрольные (подвергнуты только облучению), 3-я группа — опытные (получавшие сразу после облучения ингаляции РАВ). Ингаляции проводили в течение 20 мин вгерметически замкнутом объеме. Использовали природную концентрацию РАВ — 0,2 мг/м.куб. В качестве ароматического вещества применяли масло лаванды. Из каждой группы для исследования брали по 5 мышей.

Исследовали периферическую кровь. Каждые 5-е сутки учитывали число лейкоцитов, эритроцитов, подсчитывали лейкоцитарную формулу. Кровь забирали при декапитации.

Прежде всего следует отметить, что не только однократное внешнее облучение в допустимой дозе аварийного обслуживания (0,2 Гр) сопровождается модуляцией гуморального иммунного ответа в динамике пострадиационного периода: в первые 4 сут регистрируется его снижение, а на 8-е сутки — повышение. Ежедневные воздействия ионизирующим излучением до суммарной дозы, которая в 3 раза меньше 0,2 Гр, ограничивают регенеративную способность костного мозга как источника иммунокомпетентных клеток и иммуногенез (табл. 17).

Таблица 17. Гуморальный иммунный ответ на эритроциты барана у мышей, перенесших хроническое дозированное равномерное облучение в суммарной дозе 0,07 Гр

Период исследования (сутки)	Группа животных	Число опытов (и мышей)	Количество АОК
			на селезенку	на 106 спленоцитов
7—8-е	Контроль Опыт	2(12) 2(11)	18 067 7600	129 60

С учетом приведенных данных не вызывает сомнений, что использование в дальнейших исследованиях хронического дозированного равномерного облучения малыми дозами (в частности, ежедневное облучение в дозе 0,2 Гр) в течение 25 дней можно рассматривать в качестве модели хронической лучевой болезни. Гематологически она проявляется постепенно развивающейся лейкопенией, эритроцитозом, абсолютной лимфопенией (табл. 18) и ограничением резервных возможностей костномозгового кроветворения, например в условиях повышенной нагрузки на эритропоэз, индуцированной гипоксической гипоксией (табл. 19).

РАВ в природных концентрациях заметно «снимают» отмеченные патологические сдвиги, что наиболее отчетливо проявляется с 20-х суток наблюдения (табл. 20). На 25-е сутки показатели крови мышей опытной группы практически не отличаются от таковых интактных мышей.

Эффект РАВ реализуется на уровне костного мозга, ибо резервные возможности его у этой группы мышей сохраняются, о чем свидетельствует усиление эритропоэза в ответ на гипоксическую гипоксию. В контрольной группе количество эритроцитов в периферической крови животных после гипоксии не изменяется, в то время как в опытной группе регистрируется достоверное увеличение числа эритроцитов (табл. 21).

Таблица 18. Показатели клеточного состава периферической крови мышей при хронической лучевой болезни

Сутки от начала облучения	Группа животных	Показатели крови
		лейкоциты, 109/л	эритроциты, 1012/л	лимфоциты, 109/л
5-е	Интактные Контрольные	6,05 6,5	3,9 3,6	3,33 3,57
10-е	Интактные Контрольные	9,3 7,2	4,7 5,3	5,3 3,8
15-е	Интактные Контрольные	6,1 6,2	4,4 7,5	3,2 3,2
20-е	Интактные Контрольные	7,0 3,5	2,9 5,3	3,9 1,9
25-е	Интактные Контрольные	5,3 2,8	3,4 6,9	3,8 1,7

Таблица 19. Количество эритроцитов в периферической крови мышей интактной и контрольной групп, перенесших гипоксическую гипоксию

Период исследования	Группа животных	Количество эритроцитов, 1012/л
Исходный	Интактные Контрольные	3,9 5,6
5-е сутки после гипоксии*	Интактные Контрольные	4,7 5,3

* Гипоксическую гипоксию воспроизводили «поднятием» мышей в барокамере на «высоту» 10 000 м с «площадкой» в течение 5 мин.

Таблица 20. Показатели клеточного состава периферической крови мышей при сочетанном действии иронического облучения и ингаляции РАВ

Сутки от начала облучения	Группа животных	Показатели крови
		лейкоциты, 109/л	эритроциты, 1012/л	лимфоциты, 109/л
20-е	Интактные Контрольные Опытные	7,0 3,5 4,4	2,9 5,2 4,7	3,9 1,9 2,9
25-е	Интактные Контрольные Опытные	5,3 2,8 5,8	3,4 6,9 4,7	3,8 1,7 3,1

Таблица 21. Количество эритроцитов в периферической крови мышей опытной и контрольной групп, перенесших гипоксическую гипоксию

Период исследования	Группа животных	Количество эритроцитов, 1012/л
Исходный	Интактные Контрольные Опытные	3,9 5,6 5,3
5-е сутки после гипоксии	Интактные Контрольные Опытные	4,7 5,3 6,9

Таким образом, РАВ обладают радиопротекторными свойствами. Последнее реализуется на уровне костномозгового кроветворения; очевидно, основной мишенью радиопротекторного действия РАВ являются плюрипотентная стволовая клетка или ее ближайшие потомки — коммитированные клетки-предшественники.