Анотація

Зеленіна Г. А. Морфогенез в культурi in vitro сегментів стебла та клональне мікророзмноження Arnica chamissonis Less. ssp. foliosa (Nutt.) Maguire.– Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.20 – біотехнологія. Нікітський ботаничний сад –Національный науковий центр, Ялта, 2007.

У дисертаційній роботі розглядаються результати досліджень морфогенезу в культурі in vitro стеблових експлантів Arnica chamissonis Less. ssp. foliosa (Nutt.) Maguire (A. foliosa), метою яких була розробка способу клонального мікророзмноження цінних лікарських рослин виду-інтродуценту. Морфогенез експлантів in vitro відбувався двома шляхами: активацією існуючих та формуванням de novo меристематичних зон у тканинах експлантів. Встановлено, що регенераційна здатність стеблових експлантів залежала від їхнього місця розташування на пагоні і була найбільшою у сегментів базальної частини. Виявлена можливість збільшення регенераційного потенціалу експлантів шляхом попередньої активації меристем донорних рослин при їх вирощуванні з насіння на живильному середовищі МС з фітогормонами БАП чи ГК. Методом планування експерименту знайдено спрощений варіант живильного середовища МС, що був оптимальним для клонального мікророзмноження A. foliosa. Для оцінювання регенераційної здатності експлантів компонентами живильного середовища значущими були цитокінін БАП і сахароза.

Плоїдність регенерантів була стабільною при чисельних циклах клонального мікророзмноження протягом двох років. Вміст арніфоліну в листях та суцвіттях рослин-регенерантів достовірно не відрізнявся від аналогічних показників у рослин, розмножених традиційним вегетативним шляхом. Водний обмін рослин-регенерантів відновлювався за умов підвищеної вологості субстрату і повітря в теплиці. На підставі одержаних даних розроблено спосіб клонального мікророзмноження in vitro A. foliosa, що рекомендується для масового одержання садивного матеріалу цієї культури.

Ключові слова: морфогенез експлантів, сегменти стебла, клональне мікророзмноження, оптимізація складу живильного середовища, метод планування експерименту, рослини-регенеранти.

Аннотация

Зеленина Г. А. Морфогенез в культуре in vitro сегментов стебля и клональное микроразмножение Arnica chamissonis Less. ssp. foliosa (Nutt.) Maguire. – Рукопись.

Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук по специальности 03.00.20 – биотехнология. Никитский ботанический сад – Национальный научный центр, Ялта, 2007.

В диссертационной работе рассматриваются результаты исследований морфогенеза в культуре in vitro стеблевых эксплантов Arnica chamissonis Less. ssp. foliosa (Nutt.) Maguire (A. foliosa), целью которых была разработка способа клонального микроразмножения ценных лекарственных растений вида-интродуцента. Изучение гистогенеза сегментов стебля при культивировании на питательной среде МС с цитокинином БАП (2 мг/л) позволило выявить, что морфогенез стеблевых сегментов A. foliosa in vitro протекал двумя путями: активацией имеющихся меристем почек и формированием в тканях экспланта меристематических зон de novo. Установлено, что регенерационная способность стеблевых эксплантов зависела от их местоположения на побеге и была наибольшей у сегментов базальной части.

Показана возможность увеличения регенерационного потенциала сегментов стебля путем предварительной активации меристем донорных растений при выращивании их из семян in vitro на питательной среде МС с добавлением фитогормонов ГК или БАП в концентрации 1-2 мг/л. При этом и естественно низкая всхожесть семян, и эффективность последующего клонального микроразмножения, за счет заложения дополнительных зон меристематической активности в тканях эксплантов, возрастали в 1,8 раза.

Использование метода планирования эксперимента позволило из 25 вариантов модификаций питательной среды МС, составленных по матрице Малышева В.П., выбрать оптимальный для клонального микроразмножения растений A. foliosa. Им явился упрощенный вариант с уменьшенным до 1 г/л содержанием нитрата аммония, исключением мезо-инозита и витаминного комплекса и добавлением 3 мг/л БАП. При этом было выявлено, что из шести изученных компонентов питательной среды значимыми для оценки регенерационной способности эксплантов являлись цитокинин БАП и сахароза. При использовании оптимального варианта питательной среды коэффициент размножения in vitro составлял 1:27 за пассаж. Показано, что состав питательной среды для укоренения микропобегов in vitro в значительной степени определял темпы роста и развития регенерантов, а также их переход к автотрофному питанию. Для данного этапа оптимальным вариантом питательной среды была модификация МС с половинной концентрацией минеральных солей и добавлением 1 г/л активированного угля. Полная концентрация минеральных солей по МС в питательной среде угнетала укорение и рост регенерантов, а также синтез основных пигментов в их листьях.

При многократных циклах клонального микроразмножения в течение двух лет плоидность регенерантов была стабильной. Содержание фармакологически активного компонента арнифолина в листьях и соцветиях растений-регенерантов достоверно не отличалось от аналогичных показателей у растений, размноженных традиционным вегетативным путём. Выявлено, что условия культивирования in vitro вызывали у растений-регенерантов значительные нарушения водного обмена, которые исчезали в процессе двухступенчатой адаптации в условиях теплицы и в открытом грунте. На основании полученных данных разработан способ клонального микроразмножения растений A. foliosa in vitro, рекомендуемый для массового получения однородного рассадного материала.

Ключевые слова: морфогенез эксплантов, сегменты стебля, клональное микроразмножение, оптимизация состава питательной среды, метод планирования эксперимента, растения-регенеранты.

ANNOTATION

Zelenina G. A. Morphogenesis of in vitro culture steam segments and clonal micropropagation of Arnica chamissonis Less. ssp. foliosa (Nutt.) Maguire – Manuscript.

The dissertation on competition of a scientific degree of Ph. D. on a speciality 03.00.20 – Biotechnology. Nikitsky Botanical Garden – National center of the UAAS, Yalta, 2007.

The dissertation is devoted to the problem of the morphogenesis in vitro culture from the stem segments Arnica chamissonis Less. ssp. foliosa (Nutt.) Maguire (A. foliosa) for the development of clonal micropropagation biotechnology of valuable medicinal plant. The study of histogenesis of stem segments in cultivation on nutrient medium MS with citokinin BAP allowed to expose that the morphogenesis of explants in vitro occurred in two ways: by activating of present and forming de novo meristem zones. It is established that the potential of regeneration from stem segments depends on their position on shoot, explants of basal part had a higher potential. The opportunity of morphogenesis expansion of meristem zones of stem segments was established at preliminary activation of donor plants by addition phytohormones BAP and GA in concentration of 1-2 mg/l in nutrient medium МS for plant cultivation. Thus efficiency of clonal micropropagation increased in 1,2-1,8 time accordingly. By using of planning experiment method the optimal variant of nutrient medium МS with the presence of 3 mg/l BAP, 1 g/l nitrate ammonium without vitamins and meso-inositol is developed, allowing to receive up 7-8 microshoots per explant during 30 days. Exposed that among six studied components of nutrient medium for the estimation of regeneration ability of explants citokinin BAP and sucrose is meaningful. It is routined that composition of nutrient medium for rooting microshoots in vitro largely determined the rates of their growth and development, and also their transition to the autotrophical nutrient. Chromosomes ploid of regenerants was constant along many cycles of clonal micropropagation due to two years. The content of arnipholine in leaf and flowers of regenerants was up to standard of the plants received by the traditional vegetative way. It is revealed that in vitro condition of reception regenerants cause in them significant changes of water exchange, which subsequently are normalized by two-level adaptation of plantlets in the green house and in the field. On the basis of the received data the biotechnological route of clonal micropropagation in vitro of A. foliosa was submitted.

Key words: morphogenesis explants, stem segments, clonal micropropagation, optimization of nutrient mediums, experiment planning method, plantlets.

Підписано до друку 4.12.2006 р.

Формат 66х90/16. Бумага офсетна. Гарнітура Times New Roman/

Обсяг 0,9 друк. арк. Тираж 100 прим. Зак. № 4104/3.

Відруковано з орігінал-макету

у прінт-студії „Абрикос” СПД Бровкін А.В.

Свідоцтво ДК № 1389 від 16.07.2003.

м. Одеса, вул. Зоопаркова, 25