![](/user_photo/2706_HbeT2.jpg)
- •Биологическая химия и молекулярная биология Руководство к лабораторным работам
- •Содержание
- •Рабочая программа курса «биохимия и молекулярная биология»
- •Техника безопасности при работе в биохимической лаборатории
- •Часть 1 Раздел 1 Углеводы
- •Открытие углеводов в растворах
- •2. Восстанавливающие свойства углеводов
- •1.3. Полисахариды Работа 6. Кислотный гидролиз крахмала
- •Работа 7. Выделение гликогена из печени
- •Раздел 2. Липиды
- •Работа 8. Определение кислотного числа
- •Работа 9. Определение числа омыления
- •Работа 11. Качественные реакции на обнаружение витамина е
- •Работа 12. Качественные реакции на ацетон и ацетоуксусную кислоту
- •Раздел 3 Белки
- •3.1. Химическая природа белка (цветные реакции)
- •3. 2. Физико-химические свойства белка
- •3.2.1. Реакции осаждения белков
- •3.2.2. Растворимость белков
- •Высаливание белков
- •3.2.4. Определение изоэлектрической точки белков
- •3. 3. Гидролиз белков
- •Качественные реакции на открытие составных частей сложных белков
- •Раздел 4 Нуклеотиды
- •Работа 29. Исследование состава нуклеиновых кислот
- •Раздел 5. Витамины
- •Работа 30. Количественное определение аскорбиновой кислоты
- •Работа 31. Количественное определение витамина р в чае
- •Контрольные вопросы
- •Раздел 6. Ферменты
- •6.1. Влияние температуры на скорость ферментативной реакции
- •Работа 32. Влияние температуры на активность амилазы слюны
- •Влияние температуры на активность амилазы слюны
- •Влияние температуры на активность холинэстерзы
- •6.2. Влияние рН на скорость ферментативных реакций
- •Работа 34. Влияние рН на активность амилазы слюны
- •Влияние рН на активность амилазы слюны
- •6.3. Специфичность действия ферментов
- •Работа 35. Специфичность действия α-амилазы слюны
- •Работа 36. Специфичность действия сахаразы
- •6.4. Открытие ферментов различных классов
- •Работа 37. Идентификация оксидоредуктаз в биологическом материале
- •Буферные растворы
- •Фосфатный буфер (0,1м), рН 5,8-8,0
- •Бикарбонатный буфер (0,1 м), рН 9,2-10,8
- •Трис-буфер (0,05 м), рН 7,2-9,1
- •Раздел 2. Обмен углеводов
- •Работа 43. Количественное определение углеводов
- •Определение содержания глюкозы в сыворотке крови энзиматическим методом
- •Работа 44. Влияние инсулина на содержание глюкозы в крови
- •Работа 45. Влияние адреналина на содержание глюкозы в крови
- •Работа 46. Определение гликолитической активности эритроцитов
- •Работа 47. Количественное определение содержания гликогена в печени и скелетных мышцах крысы
- •Раздел 3. Биоэнергетика
- •Работа 48. Сравнительное изучение активности сукцинатдегидрогеназы в различных тканях крыс и ее конкурентное торможение
- •Работа 49. Количественное определение макроэргических соединений в мышцах (атр и креатинфосфата)
- •Контрольные вопросы
- •Раздел 4. Обмен липидов Работа 50. Исследование действия липазы поджелудочной железы.
- •Работа 51. Определение общих липидов в сыворотке крови
- •Работа 52. Количественное определение липопротеинов низкой плотности (лпнп) в сыворотке крови
- •Работа 53. Определение общего холестерина в сыворотке крови, основанное на реакции Либермана-Бурхарда (метод Илька)
- •Работа 54. Определение общих фосфолипидов в плазме крови
- •Раздел 5. Обмен нуклеиновых кислот
- •Работа 55. Спектрофотометрическое определение суммарного содержания нуклеиновых кислот
- •Работа 56. Определение температуры «плавления» водородных связей
- •Работа 57. Определение содержания мочевой кислоты
- •Работа 58. Определение активности рибонуклеазы
- •Раздел 6. Обмен белков и аминокислот Работа 59. Количественное определение белка
- •1. Биуретовый метод
- •2. Микробиуретовый метод
- •3. Метод Брэдфорд
- •4. Спектрофотометричекий метод
- •Работа 60. Определение концентрации мочевины в сыворотке крови и моче
- •Работа 61. Определение активности аргиназы печени
- •Работа 62. Количественное определение креатинина в моче и сыворотке крови
- •Работа 63. Определение активности аланинаминотрасферазы и аспартатаминотрасферазы
- •Работа 64. Переаминирование аминокислот
- •Работа 65. Оценка биосинтетической функции ткани по соотношению рнк и днк к белку
Работа 44. Влияние инсулина на содержание глюкозы в крови
Уровень глюкозы в крови находится под контролем нервной системы и эндокринных желез, поэтому в здоровом организме возможны лишь кратковременные его колебания. Это происходит при стрессовых реакциях, болевых приступах, эмоциональных возбуждениях и связано с выбросом в кровь значительного количества адреналина и АКТГ. Стойкая гипер- и гипогликемия наблюдается при нарушении функции поджелудочной железы и надпочечников.
Инсулин при введении в организм вызывает снижение уровня глюкозы в крови и применяется при лечении сахарного диабета. Особенно чувствительна к снижению уровня глюкозы в крови центральная нервная система, так как глюкоза является для нее основным источником энергии. Поэтому, вводя инсулин с лечебной целью при сахарном диабете, необходимо следить за уровнем глюкозы (гипогликемия может вызвать судороги и привести к летальному исходу). В таких случаях нужно срочно ввести глюкозу или адреналин. Понижение уровня глюкозы в крови под влиянием инсулина обусловлено тем, что он стимулирует синтез гликогена из глюкозы в печени и мышцах и тормозит распад гликогена в печени. Инсулин способствует превращению всосавшихся углеводов в жиры, увеличивает проницаемость клеточных мембран в мышечной и жировой тканях для глюкозы, способствуя переходу глюкозы из крови в ткани и ее окислению. Инсулин устраняет тормозящее действие глюкокортикоидов на гексокиназу (увеличивает ее активность), стимулирует цикл трикарбоновых кислот, угнетает активность глюкозо-6-фосфатазы и аденилатциклазы, активирует гликогенсинтазу.
Исследуемый раствор: кровь.
Реактивы: препарат инсулина, гепарин, стерильный физиологический раствор (0,9%-ный раствор NaCl), этиловый спирт, стерильный 40%-ный раствор глюкозы, реактивы для количественного определения концентрации глюкозы (см. работу 43).
Оборудование: пипетки, химические пробирки, центрифужные пробирки, лезвие, вата, шприц, химические стаканы, ФЭК, кюветы с длиной оптического пути 5 мм.
ХОД РАБОТЫ. Кровь берут из ушной вены кролика до введения инсулина и определяют в ней содержание глюкозы. Для предотвращения свертывания крови пробирку для взятия крови обрабатывают гепарином. Инсулин вводят кролику из расчета 1,5 МЕ на 1 кг массы. Препарат инсулина содержит обычно от 20 до 40 МЕ в 1 мл. Его разводят физиологическим раствором так, чтобы взятое количество единиц инсулина содержалось в 3-х мл раствора. Из шприца вытесняют пузырьки воздуха, оставляя в нем 2 мл раствора инсулина, которые вводят кролику подкожно. Через 1 час после введения инсулина у кролика повторно берут кровь и определяют в ней содержание глюкозы. По окончании опыта кролику обязательно вводят 40%-ный раствор глюкозы подкожно.
Работа 45. Влияние адреналина на содержание глюкозы в крови
Адреналин в высоких концентрациях - сильный яд. Его физиологическое действие проявляется в ничтожно малых количествах – 0,0001 мг на 1 кг массы. Он быстро разрушается в желудочно-кишечном тракте, поэтому вводят адреналин подкожно и внутримышечно. При подкожном введении адреналина содержание глюкозы в крови увеличивается, наступает гипергликемия и, если уровень ее достигает 8,88 ммоль/л, начинается выделение глюкозы с мочой (глюкозурия). Адреналин оказывает влияние на углеводный обмен, усиливая распад гликогена в печени до глюкозы. Адреналин через аденилатциклазу и 3’-5’-сАМР вызывает превращение неактивной фосфорилазы «b» в активную фосфорилазу «a», катализирующую распад гликогена в печени. Адреналин в крови инактивируется ферментом моноаминооксидазой. В крови в тканях наряду со свободным адреналином обнаружен комплекс адреналина с белком, который способствует сохранению адреналина в организме. Вводя адреналин в организм кролика и определяя содержание глюкозы до и после введения, можно установить его влияние на углеводный обмен.
Исследуемый материал: кровь.
Реактивы: препарат адреналина, гепарин, стерильный физиологический раствор (0,9%-ный раствор NaCl), этиловый спирт, стерильный 40%-ный раствор глюкозы, реактивы для количественного определения концентрации глюкозы (см. работу 43).
Оборудование: пипетки, химические пробирки, центрифужные пробирки, лезвие, вата, шприц, химические стаканы, ФЭК, кюветы с длиной оптического пути 5 мм.
ХОД РАБОТЫ. У кролика берут кровь из ушной вены до введения адреналина и определяют в ней содержание глюкозы глюкозооксидазным методом. После этого кролику подкожно вводят 0,1%-ный раствор адреналина из расчета 0,3 мл на кг массы тела. Через 30 мин после введения адреналина у кролика снова берут кровь и определяют в ней содержание глюкозы.