27. На чем основан метод электрофореза белков? Какие фракции белков образуются при электрофорезе сыворотки крови?
Электрофорез белков - способ разделения смеси белков на фракции или индивидуальные белки. Электрофорез применяют как для анализа компонентов смеси белков, так и для получения гомогенного белка.Наиболее распространенным вариантом электрофоретического анализа белков, является электрофорез белков в полиакриламидном геле.
Метод электрофореза основан на различии в скорости движения ( подвижности ) белков в электрическом поле, которая определяется величиной заряда белка при определенных значениях рН и ионной силы раствора. В последнее время более широкое распространение получили методы зонального электрофореза белков на различных носителях, в частности на твердых поддерживающих средах: гелях крахмала и полиакриламида, целлюлозе. Преимущества их по сравнению с методом свободного электрофореза состоят в том, что исключается размывание границы белок-растворитель в результате диффузии и конвекции, не требуется налаживания сложной аппаратуры для определения положения границы, а для анализа необходимо небольшое количество белка.
Рис. 1. Электрофореграмма (А) и денситограмма (Б) белков сыворотки крови.
Методом электрофореза на ацетилцеллюлозе или геле агарозы белки сыворотки крови можно разделить на:
альбумины (55-65%),
α1-глобулины (2- 4%),
α2 -глобулины (6-12%),
β-глобулины (8-12%),
γ-глобулины (12-22%).
52. Принципы энзимодиагностики.
Энзимодиагностика заключается в постановке диагноза заболевания (или синдрома) на основе определения активности ферментов в биологических жидкостях.
Принципы энзимодиагностики основаны на следующих закономерностях:
в норме в сыворотке крови содержатся ферменты, выполняющие специализированные функции, например, участвующие в свертывающей системе крови. Клеточные ферменты практически не проникают из неповрежденных клеток в кровь. В минимальных количествах некоторые ферменты клеток могут определяться в крови;
при повреждении мембран клеток (воспаление, некроз) в крови или других биологических жидкостях (например, в моче) увеличивается количество внутриклеточных ферментов поврежденных клеток, активность которых можно зарегистрировать специальными биохимическими тестами;
для энзимодиагностики используют ферменты, имеющие преимущественную или абсолютную локализацию в определенных органах (органоспецифичность);
количество высвобождаемого фермента должно быть пропорционально степени повреждения ткани и достаточно для определения его активности;
активность ферментов в биологических жидкостях, обнаруживаемых при повреждении клеток, отличается от нормальных значений и стабильна в течение достаточно длительного времени (сутки);
появление в плазме крови ферментов, имеющих только цитозольную локализацию, свидетельствует о воспалительном процессе; при обнаружении митохондриальных или ядерных ферментов можно говорить о более глубоких повреждениях клетки, например некрозе.