Посев исследуемого материала

Так как гнойные менингиты имеют различную этиологию, то при исследовании СМЖ с неопределённым возбудителем необходимо производить посев ликвора на несколько питательных сред с целью выделения более широкого спектра возбудителей.

Питательные среды для первичного посева.

1. Сывороточный агар

2. 5% кровяной агар

3. Среда для контроля стерильности

4. Агар с гретой кровью (шоколадный агар)

5. Простой агар

6. Полужидкий агар для обогащения ликвора, приготовленный на бульоне из перевара Хоттингера или рыбного гидролизата.

Культивирование

Проводят посев гнойного ликвора или ресуспензированного осадка на чашку со свежеприготовленными средами. Капли материала слегка растирают подогретым шпателем на поверхности агара. После этого одну чашку с простым агаром помещают в термостат в обычной атмосфере при 37°С, а две другие инкубируют при повышенной концентрации СО₂. Инкубация при повышенных концентрациях СО₂ способствует выявлению патогенных нейсерий, пневмококков, листерий и др. При подозрении на H. influenzae производят посев на чашку с шоколадным агаром. Пробирки с полужидким агаром инкубируют при 37ºС в аэробных условиях.

На второй день просматривают сделанные накануне посевы СМЖ. При появлении роста на плотных питательных средах изучают характер роста, морфологию выросших бактерий при окраске по Граму.

У бактерий, выросших на плотных питательных средах, определяют чувствительность к антибиотикам, а также проводят отсевы на элективные среды для получения чистой культуры с последующей их идентификацией.

При отсутствии роста колоний на твёрдых питательных средах делают высев из среды накопления на чашку с сывороточным агаром и КА.

Твёрдые среды с посевами ликвора при отсутствии роста на протяжении 24 часов надо инкубировать в течение 3-6 дней. При отрицательных результатах высевы повторяют через 8-10 дней.

При необходимости проводят специальные исследования на грибы, микобактерии, паразиты и вирусы.

Оценка результатов исследования.

СМЖ является стерильной средой, поэтому выделение любого микроорганизма должно расцениваться как положительный результат. Редко нахождение условно-патогенных микроорганизмов и сапрофитов, которые ранее никогда не выявлялись, может вызвать сомнение и расцениваться как загрязнение или в момент взятия пробы, или при повторных высевах со среды обогащения. В таких случаях большое значение имеют клинические данные.

При вторичных менингитах, обусловленных инфекцией гнойно-воспалительных процессов различной локализации необходимо провести микробиологическое исследование отделяемого из этого очага, потому что возможна вероятность обнаружения идентичных микроорганизмов и в СМЖ.

У детей параллельно с исследованием СМЖ необходимо проводить исследование гемокультур, так как менингиты часто связаны с бактериемией, и она предшествует появлению микроорганизмов в СМЖ. При хронических процессах с временным улучшением желательно провести микробиологическое исследование ликвора после окончания антибактериального лечения.

Для экспресс-диагностики используют иммунологические методы (чаще латекс-агглютинацию), основанные на выявлении специфических поверхностных полисахаридных антигенов бактерий непосредственно в ликворе. Прежде всего это относится к обнаружению антигенов H.lnfluenzae, N.meningitidis, S.pneumoniae, S.agalactiae.

Подготовка образца к проведению анализа зависит от характера используемого набора реагентов (Bactigen, Directogen, Wellcogen). Как правило, ликвор прогревают в кипящей воде 5 мин., остужают до комнатной температуры и, если есть осадок, центрифугируют при 3000g 10 мин. Затем проводят реакцию надосадочной жидкости с латексными реагентами, обязательно используя положительный и отрицательный контроль реакции.

Оценка результатов. Необходимо помнить, что чувствительность тестов латекс-агглютинации для обнаружения антигенов составляет около 65% для S.pneumoniae и N. meningitidis, и до 95% для Н. influenzae, a сам метод является скрининговым и не заменяет бактериологическое исследование ликвора.

Иногда для обнаружения антигенов менингококков в надосадочной жидкости используют реакцию кольцепреципитации с диагностическими сыворотками.