- •Кафедра клинической лабораторной диагностики
- •Утверждено на заседании кафедры
- •Протокол №…. От…. 2005 года
- •Заведующий кафедрой, д.М.Н.
- •Вспомогательные материалы по теме.
- •Минимальные объемы ликвора, необходимые для анализа.
- •Посев исследуемого материала
- •Культивирование
- •Оценка результатов исследования.
Минимальные объемы ликвора, необходимые для анализа.
Микробы |
Объем (мл)* |
Примечание |
Бактерии |
1 |
Присылают наиболее мутную порцию СМЖ в наикратчайшие сроки; пробирка №2 предпочтительней. |
Грибы |
2 |
Необходимо исключить Cryptococcus spp., Coccidioides immitis |
Микобактерии |
2 |
M.tuberculosis, M.avium, M.intracellulare |
Анаэробы |
>2 |
При абсцессах мозга или при биопсиях ЦНС |
Паразиты |
>2 |
При абсцессах мозга или при биопсиях ЦНС на Entamoeba histolytica, Toxoplasma gondii и др. |
Вирусы |
1-2 |
СМЖ присылают во льду |
*Большие объемы материала увеличивают вероятность обнаружения возбудителей.
Проведение исследования.
Исследование ликвора предусматривает следующие этапы:
• Центрифугируют образец при 2500-3000 об/мин (1500 х g) 15-20 мин., если позволяет объем материала (>1мл).
• Стерильной пастеровской пипеткой собирают надосадочную жидкость, оставляя в пробирке 0,5-1 мл осадочного материала.
• Надосадочную жидкость используют для обнаружения антигена серологическими методами (в реакции встречного иммуноэлектрофореза, в латекс-агглютинации) и сохраняют ее в холодильнике до 1 недели на случай необходимости проведения дополнительных исследований.
• Осадок тщательно перемешивают вращением пробирки не менее 30 сек; не следует для этих целей использовать пипетку, так как бактерии и клетки могут осесть на стенках пробирки, что может привести к получению ложно отрицательного результата.
• Стерильной пипеткой засевают по 1 -2 капли ликвора на предварительно прогретые в термостате плотные питательные среды, а оставшийся в пробирке материал - в 0,1% питательный полужидкий агар (среда обогащения). Если ликвора мало, то его засевают только на среду обогащения.
• Из оставшегося после посевов материала готовят мазок на обезжиренном в спирте стекле, позволяя капле свободно растечься до большого размера; высушивают на воздухе в биологически защищенном боксе. При исследовании ликвора с неопределённым возбудителем или на менингококк мазки после высушивания фиксируют спиртом или на пламени и окрашивают метиленовым синим или по Граму в модификации Калины. Результаты микроскопии оценивают сразу же и сообщают клиницисту.
Если пробирка с ликвором выглядит пустой или содержит всего 1-5 капель жидкости, а дополнительно получить образец не удается, предпринимают следующее:
При наличии всего 1 капли ликвора стерильной пастеровской пипеткой берут частичку материала для приготовления мазков в окраске по Граму.
Стерильной пастеровской пипеткой вносят около 1 мл бульона в пробирку, закупоривают ее и переворачивают несколько раз для перемешивания содержимого, а затем уже производят посевы как указано выше.
Если ликвор прозрачный, то центрифугирование не производится, мазок не делается, и вся его часть, оставшаяся после посева в чашки и серологических проб, засевается в среду обогащения. При необходимости проводят специальные исследования на грибы, микобактерии, паразиты и вирусы.