Методы генного зондирования

В основе подобных методик лежит способность нуклеиновых кислот к гибридизации -

образованию двухцепочных структур за счет

взаимодействия комплементарных нуклеотидов (А-Т, Г-Ц).

Полимеразная цепная реакция

ДНК-чипы

Трансгенные животные

Саузерн-блот анализ

Нозерн-блот анализ Секвенирование

Полимеразная цепная реакция

Этот метод позволяет увеличить концентрацию определенной (заранее известной) последовательности

ДНК в пробе за счет синтеза многочисленных копий in vitro.

Для проведения реакции к исследуемому образцу ДНК добавляют препарат фермента ДНК-полимеразы, избыток дезоксинуклеотидов для синтеза и, так называемые, праймеры - два типа олигонуклеотидов величиной 20-25 оснований, соответствующих концевым участкам интересующей последовательности ДНК.

Для проведения реакции сконструированы программируемые инкубаторы микропроб, позволяющие

легко чередовать изменения температуры, оптимальной для каждого этапа реакции.

Реакция амплификации позволяет существенно повысить чувствительность анализа при генном зондировании, что особенно важно при низкой концентрации инфекционного агента.

Полимеразно-цепная реакция (ПЦР)

ДНК-чипы

Создание ДНК-чипов базируется на принципе комплементарной гибридизации одноцепочечных полинуклеотидных цепей, то

есть ДНК-чипы – это наборы из большого числа олигонуклеотидов на магнитных твердых

подложках,предназначенные для анализа

последовательности ДНК.

ДНК-чип – пластина S=1см2, на которую

нанесены ячейки в определенном порядке, каждая содержит одноцепочечные полинуклеотиды с определенной последовательностью оснований.

Количество ячеек может превышать 1млн/см2

ДНК-чипы

ДНК-чипы

ДНК-чипы

ДНК-чипы