- •Современныеметоды иммунодиагностики
- •Современные методы иммунодиагностики
- •В современной практике клинико- иммунологических исследований
- •Цитофлуориметрический
- ••При лабораторной оценке
- •Определение показателей фагоцитоза
- •Выделение популяций лимфоцитов
- •Розеткообразование и пэннинг используют для выделения субпопуляций лимфоцитов
- •Пэннинг - разновидность аффинной хроматографии применительно к лимфоцитам
- •На сходном с пэннингом принципе основан способ разделения с помощью магнитных гранул,
- •Методы определения эффекторных клеток
- •Оценка гуморального звена
- •Изотипы IgG определяют исключительно с помощью иммуноферментных тест- систем и моноклональных антител
- •Оценка клеточного звена
- •Определение цитокинов в биологических жидкостях
- •Иммуноэлектрофорез и иммуноблоттинг
- •Иммуноблоттинг
- •Иммуногистохимия, иммуноцитохимия
- •Определение
- •ИГХ основана на твердофазном ИФА, который проводится in situ, т.е. на
- •История метода
- •История метода
- •Иммуногистохимические методики исследования на сегодняшний день
- •Иммуногистохимия - метод идентификации
- •Постановка ИГХ
- •Визуализация
- •Визуализация
- •Метод прямой иммунофлуоресценции
- •Почечное тельце. Иммунофлюоресцентным методом при помощиантител, меченных флюоресцеином против нефрина выявлены
- •Ферментные метки
- •Использование полимерных
- •Использование полимерных макромолекул
- •Использованием антител против пероксидазы и щелочной фосфатазы
- •ABC-метод
- •Методы с применением полимеров
- •Системы с амплификацией,
- •Практическое значение
- •ИГХ позволяет существенно улучшить
- •Примеры применения иммуногистохимии для диагностики злокачественных опухолей
- •Примеры применения иммуногистохимии для диагностики злокачественных опухолей
- •Принципиальным отличием иммуногистохимии от других методов иммунологической диагностики является
- •Методы генного зондирования
- •Полимеразная цепная реакция
- •Полимеразно-цепная реакция (ПЦР)
- •ДНК-чипы
- •ДНК-чипы
- •ДНК-чипы
- •ДНК-чипы
- •ДНК-чипы
- •ДНК-чипы
- •Трансгенные животные
- •Саузернблоттинг
- •Саузернблоттинг
- •Нозернблоттинг
- •Типы блоттингов
- •ДНК-ДНК-гибридизация
- •Риботипирование
- •Рестрикционный анализ
Использование полимерных макромолекул
EnVision –
двухэтапный метод, полимер
конъюгирован со вторым антителом и ферментом
Использованием антител против пероксидазы и щелочной фосфатазы
Конечный комплекс, образующийся при PAP-методе
ABC-метод
Конечный комплекс при ABC-методе
Методы с применением полимеров
Конечный комплекс при методах с применением полимеров
Системы с амплификацией,
основанные на тирамиде
Конечный комплекс при методах визуализации с амплификацией
Практическое значение
иммуногистохимического исследования
Уточнение гистогенеза опухолей
Уточнение вероятного источника
метастазирования
Определение чувствительности опухоли к
гормональному лечению
Диагностика аутоиммунных заболеваний
Поиск инфекционных агентов. Оценка функционального состояния клеток.
ИГХ позволяет существенно улучшить
специфичность и чувствительность
патоморфологического метода исследования, что весьма актуально для диагностики
опухолей (метастазов), их тканевого
происхождения, степени дифференцировки и
т.д.
Помимо онкологии, ИГХ находит применение
для диагностики аутоиммунной патологии, некоторых инфекционных заболеваний, фенотипирования клеток крови и костного мозга и научных целей.
Примеры применения иммуногистохимии для диагностики злокачественных опухолей
Клетки, экспрессирующие антиген
Гистологический срез опухолевой ткани молочной железы, окрашенный антителами к PCNA – антигену, ассоциированному с клеточной пролиферацией. Антиген локализуется в ядрах клеток
Примеры применения иммуногистохимии для диагностики злокачественных опухолей
Клетки, экспрессирующие антиген
Гистологический срез метастаза меланомы в лимфоузел, окрашенный антителами против антигена S-100. Антиген локализуется в цитоплазме.
Принципиальным отличием иммуногистохимии от других методов иммунологической диагностики является
структурная специфичность исследования: возможность
оценить не только наличие
исследуемого антигена в образце, но и его количество, распределение в гистологи-
ческом препарате (окрашива- ние плазматической мембраны, ядра или других ультраструктур клетки).