- •Современныеметоды иммунодиагностики
- •Современные методы иммунодиагностики
- •В современной практике клинико- иммунологических исследований
- •Цитофлуориметрический
- ••При лабораторной оценке
- •Определение показателей фагоцитоза
- •Выделение популяций лимфоцитов
- •Розеткообразование и пэннинг используют для выделения субпопуляций лимфоцитов
- •Пэннинг - разновидность аффинной хроматографии применительно к лимфоцитам
- •На сходном с пэннингом принципе основан способ разделения с помощью магнитных гранул,
- •Методы определения эффекторных клеток
- •Оценка гуморального звена
- •Изотипы IgG определяют исключительно с помощью иммуноферментных тест- систем и моноклональных антител
- •Оценка клеточного звена
- •Определение цитокинов в биологических жидкостях
- •Иммуноэлектрофорез и иммуноблоттинг
- •Иммуноблоттинг
- •Иммуногистохимия, иммуноцитохимия
- •Определение
- •ИГХ основана на твердофазном ИФА, который проводится in situ, т.е. на
- •История метода
- •История метода
- •Иммуногистохимические методики исследования на сегодняшний день
- •Иммуногистохимия - метод идентификации
- •Постановка ИГХ
- •Визуализация
- •Визуализация
- •Метод прямой иммунофлуоресценции
- •Почечное тельце. Иммунофлюоресцентным методом при помощиантител, меченных флюоресцеином против нефрина выявлены
- •Ферментные метки
- •Использование полимерных
- •Использование полимерных макромолекул
- •Использованием антител против пероксидазы и щелочной фосфатазы
- •ABC-метод
- •Методы с применением полимеров
- •Системы с амплификацией,
- •Практическое значение
- •ИГХ позволяет существенно улучшить
- •Примеры применения иммуногистохимии для диагностики злокачественных опухолей
- •Примеры применения иммуногистохимии для диагностики злокачественных опухолей
- •Принципиальным отличием иммуногистохимии от других методов иммунологической диагностики является
- •Методы генного зондирования
- •Полимеразная цепная реакция
- •Полимеразно-цепная реакция (ПЦР)
- •ДНК-чипы
- •ДНК-чипы
- •ДНК-чипы
- •ДНК-чипы
- •ДНК-чипы
- •ДНК-чипы
- •Трансгенные животные
- •Саузернблоттинг
- •Саузернблоттинг
- •Нозернблоттинг
- •Типы блоттингов
- •ДНК-ДНК-гибридизация
- •Риботипирование
- •Рестрикционный анализ
Современныеметоды иммунодиагностики
Профессор Бажукова Т.А.
зав.каф.микробиологии, вирусологии и иммунологии
Современные методы иммунодиагностики
В иммунологии применяется целый ряд экспериментальных методов из других
областей биологии. Выделение антигенов и антител производят с помощью биохимических методов фракционирования белков.
Гены иммунологически важных молекул секвенируют обычными молекулярно-
генетическими методами. В иммунологии разработаны и свои специальные методы исследования, основанные на взаимодействии антиген –
антитело.
В современной практике клинико- иммунологических исследований
основным объектом анализа является кровь – как ее клеточные компоненты, так и сыворотка.
В настоящее время в поле
вниманияиммунологов наряду с мононуклерной фракцией все чаще оказывается фракция
гранулоцитов.
Цитофлуориметрический
анализ
Современный цитометр -это сложнейший лазерный прибор,
управляемый компьютером,
позволяющий оценить распределения интересующих
нас молекул на мембране заданного типа клеток.
Результаты компьютерного анализа
выражаются в виде одно- и двухпараметрических
гистограмм, отражающих распределение клеток по интенсивности свечения одного или двух флуорохромов. Результаты выражают в процентах меченых клеток и средней интенсивностью свечения.
Трехмерная диаграмма
s-размеры; n-
количество; f- флюоресценция
•При лабораторной оценке
нарушений естественного
иммунитета определяют
фагоцитарную активность или
генерацию метаболически
активных радикалов и оценивают состояние системы
комплемента.
Определение показателей фагоцитоза
фагоцитоз частиц латекса, меченных флуорохромом, дает возможность регистрировать результаты цитофлуориметрически
метод оценки активности фагоцитирующих клеток по восстановлению нитросинего тетразолия
люминесцентные методы регистрации образования метаболически активных форм кислорода и свободных радикалов методами регистрации хемилюминесценции, усиливаемой люминофорами (люминолом и люцигенином)
Выделение популяций лимфоцитов
Центрифугирование в градиенте
плотности.
Основано на том, что лимфоциты
имеют меньшую плотность, чем эритроциты и гранулоциты