специализация лаборатории; цели, задачи лабораторий
Микробиологические лаборатории организуются при больницах и санитарно-эпидемиологических станциях (СЭС). Существуют также специальные лаборатории, в которых работают с возбудителями особо опасных инфекций, вирусологические лаборатории и др. Микробиологические лаборатории занимаются бактериологической диагностикой инфекционных заболеваний, исследуя испражнения, мочу, кровь, мокроту больных с целью обнаружения патогенных микроорганизмов — возбудителей заболевания. Помимо этого, в микробиологических лабораториях проводят санитарно-бактериологические исследования воды, воздуха, смывов с окружающих предметов, рук, пищевых продуктов для обнаружения санитарно-показательных микроорганизмов, указывающих на загрязнение патогенными микробами. При необходимости в объектах внешней среды определяют наличие патогенных микробов.
15.2. Оснащение микробиологических и иммунологических лабораторий
В связи с тем что в микробиологических лабораториях работают с заразным материалом, помещение их должно быть изолировано от других больничных помещений, пищеблоков, жилых комнат. В состав лаборатории входят:
1) лабораторные комнаты для проведения микробиологических исследований;
2) моечная;
3) препараторская для подготовки лабораторной посуды, приготовления питательных сред и других вспомогательных работ;
4) автоклавная;
5) комната, где производят прием материала и выдачу результатов исследования. Лабораторных животных, необходимых для постановки биологических проб, содержат в специальном изолированном помещении — виварии. В лабораториях, где объем работ невелик, можно объединить моечную и препараторскую, исключить комнату для приема анализов и т. д.
Лабораторные комнаты должны быть просторными и светлыми, желательно с ориентацией окон на север или северо-запад, так как для работы необходим рассеянный свет. Стены окрашивают светлой масляной краской, пол покрывают линолеумом, лабораторные столы — пластиком или стеклом, что позволяет их легко дезинфицировать. В лабораторной комнате оборудуют застекленный бокс с предбоксником для проведения работ в стерильных условиях.. В боксе помещают бактерицидную лампу, стол, табуретку. В лабораторных комнатах находится специальное оборудование: термостат (рис. 23), холодильник, шкафы, центрифуга и др. Большое значение имеет правильная организация рабочего места. Рабочий стол устанавливают у окна таким образом, чтобы свет падал сбоку или прямо. На столе должны находиться только необходимые для работы предметы: спиртовка или газовая горелка, штативы, бактериологические петли, банка с дезинфицирующим раствором.
режим работы в лаборатории
Персонал во время работы должен строго соблюдать следующие правила:
1) находиться в лаборатории можно только в специальном халате и шапочке;
2) в лабораторию нельзя вносить посторонние вещи, хранить там продукты, принимать пищу;
3) исследуемый материал поступающий в лабораторию, рассматривается как заразный; его ставят на специальный поднос и обрабатывают снаружи дезинфицирующим раствором;
4) во время работы необходимо соблюдать осторожность, следить за чистотой рук, применять технические приемы, исключающие контакт с заразным материалом;
5) исследуемый материал, отработанные культуры подлежат уничтожению;
6) по окончании работы руки, инструменты, рабочее место обрабатывают дезинфицирующим раствором. Культуры микробов, необходимые для дальнейшей работы, ставят в холодильник или сейф и опечатывают.
Уборка помещений лаборатории. Уборку проводят ежедневно до и после работы влажным способом с применением дезинфицирующих средств. Пол протирают 2— 5% раствором карболовой кислоты или хлорамина. Стены, инвентарь и полы один раз в неделю моют горячей водой с мылом. Бокс убирают в конце рабочего дня, а утром перед работой облучают бактерицидными лампами.
Мытье лабораторной посуды. Посуду, содержащую заразный материал и культуры микробов, обеззараживают в автоклаве
Нельзя обрабатывать посуду дезинфицирующим раствором, так как даже следы его задерживают рост микробов. Стеклянную посуду моют ершами с применением бикарбоната натрия, полужидкого мыла или стирального порошка. Для устранения белого налета стеклянную посуду помещают на 30— 40 мин в 5—10% раствор хлористоводородной кислоты. Сильно загрязненную посуду опускают в слегка подогретую хромовую смесь. Новую лабораторную посуду кипятят 15 мин в воде с мылом, прополаскивают, погружают в теплый 1—2% раствор хлористоводородной кислоты и кипятят 10—15 мин. В пипетки вводят кусок проволоки, на конец которой плотно накручивают кусок ваты, и тщательно протирают их. Предметные и покровные стекла должны быть хорошо обезжирены (нанесенная на стекло капля воды должна растекаться). Стекла, бывшие в употреблении, загрязненные краской и маслом, опускают на 2 ч в концентрированную серную кислоту или хромовую смесь, затем промывают проточной водой и кипятят в 5% растворе бикарбоната натрия 30—40 мин. Вымытую посуду ставят в сушильный шкаф или сушат на воздухе, пробирки закрывают пробками из ваты, заворачивают в бумагу и стерилизуют в сушильном шкафу или печи Пастера.
Методы микробиологической диагностики
Аналитический этап включает микроскопический, культуральный, биологический, серологический и аллергологический методы микробиологической диагностики.
Микроскопический метод заключается в приготовлении препаратов (нативных или окрашенных простыми или сложными методами) из исследуемого материала и их микроскопии с применением различных видов микроскопической техники (световая, темнопольная, фазово-контрастная, люминесцентная, электронная и др.). В бактериологии микроскопический метод получил название бактериоскопического, в вирусологии - вирусоскопического.
Культуральный метод заключается в посеве исследуемого материала на искусственные питательные среды, культуры клеток или куриные эмбрионы с целью выделения и идентификации чистой культуры возбудителя или возбудителей. В бактериологии культуральный метод получил название бактериологического, в микологии - микологического, в протозоологии - протозоологического, в вирусологии - вирусологического.
Биологический метод (экспериментальный или биопроба) заключается в заражении исследуемым материалом чувствительных лабораторных животных или других биологических объектов (куриные эмбрионы, культуры клеток). Его используют для выделения чистой культуры возбудителя, определения типа токсина, активности антимикробных химиотерапевтических препаратов и т.д.
Серологический метод заключается в определении титра специфических антител в сыворотке крови больного, реже - в обнаружении микробного антигена в исследуемом материале. С этой целью используются иммунные реакции.
Аллергологический метод заключается в выявлении инфекционной аллергии (ГЗТ) на диагностический микробный препараталлерген. С этой целью ставят кожные аллергические пробы с соответствующими аллергенами.
Постаналитический этап микробиологической диагностики заключается в клинической интерпретации результатов лабораторных исследований. При этом лечащий врач должен оценить этиологическое значение выделенных от больного микробов, скорректировать на основании данных микробиологического мониторинга проводимую больному эмпирическую антимикробную химиотерапию и др.
Диагностическая ценность этих методов неравнозначна. Ведущим методом микробиологической диагностики является бак- териологический метод, так как он позволяет выделять и иден- тифицировать микроб-возбудитель, т.е. первопричину болезни.
2. Микроскопический метод исследования:
ОБЕЗЖИРИВАНИЕ СТЁКОЛ проводят одним из приведённых способов:
1) Новые стёкла кипятят 15 минут в 1 % растворе соды (или в мыльной воде), затем промывают водой, кладут в слабый раствор соляной кислоты, вновь тщательно промывают водой.
2) Стёкла, бывшие в употреблении, сначала помещают в концентрированную серную кислоту или в смесь из 100 частей серной кислоты и 50 частей двухромовокислого калия и 1000 частей воды на 2 часа, после чего кипятят в щёлочи, тщательно промывают водой.
3) Погрузить стёкла в смесь 6 % хромовокислого калия и серной кислоты на 24 часа, после чего тщательно промывают водой. Хранят стёкла в 96 % растворе спирта.
4) Стекла можно также обрабатывать жидкостью следующего состава (по Цеттнову (Zettnow), 1899): Kalii bichromici - 20 г, Acidi sulfuric crudi – 20 г, воды – 200,0 мл. После 10 минут кипячения в этой смеси промывают стекло 5 минут в слабом растворе щелочи, а затем промывают водой и, наконец, спиртом.
Перед работой стёкла протереть кусочком сухого мыла, затем тщательно до блеска протереть кусочком марли.
Для продолжительного хранения чистые обезжиренные стекла помещают в банки с притертыми пробками со смесью Никифорова (смесь равных объемов этилового 96% спирта и серно-кислого (наркозного) эфира) или в 960 спирте или промытыми и вытертыми досуха.
Оценка результата. На чистом стекле капля водопроводной воды или изотонического раствора натрия хлорида (NaCl) свободно растекается по всей поверхности, на жирном – дробится на множество мелких капель.
Приготовление и окраска микропрепаратов:
1. Подготовить для микроскопии 4 предметных стекла:
- обезжирить предметные стёкла, тщательно протерев их мылом и марлей;
- стёкла с помощью пинцета внести в пламя спиртовки, прогреть, охладить;
- тщательно протереть сухим ватным тампоном.
2. Приготовить 3 мазка из микробов, выросших на жидкой среде (обратить внимание на правильное положение рук: правой - держащей пробирку с ростом микробов в МПБ и левой - бактериальную петлю и ватную пробку);
- обжечь петлю в пламени спиртовки;
- охладить;
- открыть пробку пробирки левой рукой (мизинцем), обжечь её края над пламенем спиртовки;
- внести в МПБ петлю, взять 1 каплю культуры;
- обжечь края пробирки, пробку, закрыть пробирку, поставив её в штатив (не выпуская из правой руки петлю с материалом);
- обезжиренное, обожжённое в пламени спиртовки и охлаждённое предметное стекло взять большим и указательным пальцами в левую руку;
- петлёй материал нанести на стекло, равномерно растирая круговыми движениями по поверхности в виде круга;
- препарат высушить на воздухе и затем фиксировать методом фламбирования или прогрева, трижды внося в пламя спиртовки, охладить;
- пипеткой налить на мазок 3-4 капли красителя (метиленовый синий) на 3-4 мин.;
- промыть препарат водой, высушить на воздухе. Мазок готов для микроскопии:
3. Приготовить мазок из микробной культуры, выросшей на плотной среде - МПА:
- на обезжиренное стекло нанести каплю воды или физиологического раствора;
- с поверхности среды (обратить внимание на правильность положения пробирки с ростом скошенной поверхностью кверху), петлёй осторожно взять материал;
- обжечь края пробирки, пробку закрыть, поставить в штатив, не выпуская из рук петлю с культурой;
- внести материал петлёй в каплю воды на предметном стекле, равномерно растереть, на стекле с обратной стороны обозначить овалом или квадратом место нанесения материала;
- высушить на воздухе;
- фиксировать фламбированием, внося в пламя спиртовки трижды, охладить.