- •Методические рекомендации для преподавателей
- •Тест (исходный уровень)
- •Тест (итоговый уровень)
- •7. Оснащение практического занятия:
- •7.1. Наглядные пособия:
- •7.2. Технические средства обучения:
- •8.Учебно-материальное обеспечение:
- •Критерии классификации вирусов
- •Методы культивирования вирусов
- •Методы индикации и идентификации вирусов
- •Культивирование вирусов в развивающихся куриных эмбрионах
Методы индикации и идентификации вирусов
Для индикации вирусов в инфекционном материале могут быть использованы следующие методы и критерии:
Микроскопический: обнаружение вирусных включений в препаратах, окрашенных но Муромцеву, Морозову, Романовскому, Пигаревскому, Павловскому, обработанные флюорохромами.
Вирусологическое выделение вирусов в культурах клеток, в развивающихся куриных эмбрионах, на лабораторных животных (состояние, симптомы).
В культуре тканей: реакция гемаглютинации (РГА), реакция гемадсорбции (РГадс), цитопатогенное действие (ЦПД), цветная проба, метод бляшек.
Идентификация вирусов осуществляется с помощью серологических (иммунологических) методов:
реакция торможения гемагглютинации (РТГА),
реакция торможения гемадсорбции (РТГадс),
реакция связывания комплемента (РСК),
реакция нейтрализации цитопатогенного действия (РН),
реакция иммунофлюоресценции прямая и непрямая (РИФ, РНИФ),
реакция преципитации в геле (РП),
реакция нейтрализации цветной пробы.
Приложение 4
Культивирование вирусов в развивающихся куриных эмбрионах
Берут 7-11 дневные куриные эмбрионы, проверяют их жизнеспособность на овоскопе, на нем же у эмбриона простым карандашом обводят воздушную камеру - главный ориентир для последующих манипуляций.Стерильным тампоном с йодом протирают верхнюю (тупую) часть яйца, затем 60° спиртом.
Заражение невскрытого эмбриона
А) В хорион аллантоисную полость: Делают по границе воздушной камеры яйца под углом 45° к его поверхности на глубине 0,3-0,5 см. После введения вирусного материала отверстие заливают расплавленным парафином, и эмбрион в специальных лотках помещают в термостат-инкубатор приt° +40; +42С° и влажности в 60 %.
Б) В амнион и куриный зародыш:Инфицируют толстой тупой иглой для спинномозговыхпункций. Манипуляцию выполняют в темной комнате под контролем глаза, осторожно упираясь в эмбрион.
После заражения отверстие парафинируют, а инкубацию эмбриона продолжают.
Заражение вскрытого эмбриона:
Выполняют после снятия изогнутыми ножницами крышки яйца над его воздушной камерой, которую снимают очень осторожно.
А) Заражение в амниотический мешок выполняют после его подтягивания стерильным пинцетом.
Б) Заражение в желточный мешок проводят также.
В) обоих случаях дефект в скорлупе яйца закрывают: либо возвращением снятого тупого конца скорлупы, либо крышечкой от стеклянного бюкса. Их края для приданиягерметичности заливают парафином. Помещают в термостат-инкубатор.
Контрольные наблюдения ведут по критериям:
подвижность эмбриона, как показатель жизнеспособности;
появление на оболочках эмбриона бляшек с просяное зерно из внутриклеточных вирусных включений;
общепринятая индикация и идентификация вируса (Приложение 3).
Приложение 5
РЕПРОДУКЦИЯ ВИРУСОВ С РАЗНЫМ ГЕНОМОМ
1.
|
ДНК- геномные цитоплазматические (вирус натуральной оспы) |
Адсорбция на клетке- виропексис |
Депротеинизация, освобождение генома |
Стратегия вирусного генома (СВГ) |
Репродукция ДНК |
Все этапы в цитоплазме клетки |
Репродукция ДНК (с участием эндорепликазы) |
Трансляция на рибосомы |
Сборка вириона | |||||||||||||
Выход из клетки | ||||||||||||||||||||||
Синтез вирусного белка |
Эндогенная (вирусная) транскриптаза |
Транскрипция |
Синтез вирусного белка на рибосомах клетки-хозяина | |||||||||||||||||||
И-РНК | ||||||||||||||||||||||
2. |
ДНК -геномные ядерные (вирус герпеса) |
Адсорбция на клетки -виропексис |
Депротеинизация. Освобождение генома |
СВГ |
Редупликация ДНК в ядре клетки хозяина |
Разобщенный (дизъюнктивный) синтез |
Репродукция ДНК в ядре клетки с участием экзорепликаз |
Сборка вириона в цитоплазме | ||||||||||||||
Синтез вирусного белка на рибосомах клетки |
Экзогенная транскрипция (клеточная) |
И-РНК транскрипция |
Трансляция на рибосомы | |||||||||||||||||||
|
Итак, синтез идёт по схеме: ДНК РНК белок | |||||||||||||||||||||
3. |
РНК-геномные минуснитевые (вирус гриппа) |
Адсорбция на клетке- виропексис |
Депротеинизация. Освобождение генома |
СВГ |
Редупликация ДНК |
И-РНК |
Экзогенная транскриптаза |
транскрипция |
М-РНК |
М-РНК + репликативная форма |
- Р «отштамовка» нитей с матрицы | |||||||||||
Синтез вирусного белка на рибосоме | ||||||||||||||||||||||
|
|
-РНК |
-РНК |
+РНК |
|
Сборка вириона |
| |||||||||||||||
+РНК выполняет функции И- РНК |
Трансляция на рибосомы |
Синтез вирусного белка | ||||||||||||||||||||
Итак, синтез идет по схеме РНК РНК белок | ||||||||||||||||||||||
4. |
РНК геномные + нитевые |
Адсорбция |
Депротеинизация |
СВГ |
РНК |
Функции И-РНК выполняет +РНК нить | ||||||||||||||||
Вирусный белок | ||||||||||||||||||||||
|
+РНК |
Экзотранскриптаза |
+РНК |
Трансляция на рибосомы |
Синтез вирусной репликазы (эндорепликазы) |
+РНК |
-РНК |
Матрица для образования +нитей ДНК |
Сборка вириона | |||||||||||||
Синтез вирусного белка |
Репликативная форма | |||||||||||||||||||||
Итак, синтез идет по схеме: РНК белок | ||||||||||||||||||||||
5. |
ДНК онкогенные вирусы |
Адсорбция |
депротеинизация |
Интеграция в геном ДНК клетки хозяина |
Редупликация ДНК |
Сборка вириона | ||||||||||||||||
И-РНК |
Белок вирусный | |||||||||||||||||||||
Итак, синтез идет по схеме: ДНК РНК белок | ||||||||||||||||||||||
6. |
РНК онкогенные вирусы (обратная транскрипция) |
Адсорбция- виропексис |
Депротенизация |
РНК (одна нить) |
В вирионе формируется РНК зависимая ДНК полимераза |
Синтез двунитчатой ДНК (провирус) |
СВГ |
Редупликация ДНК |
Сборка вириона созревание на мембранах клетки | |||||||||||||
Трансляция ДНК (провируса при участии РНК- полимеразы клетки) |
Синтез вирусного белка на рибосомах клетки |