dis_dovzhenko_nina_aleksandrovna

61

Скорость образования в реакции 5-амино-2-нитробензоата определяется по увеличению оптической плотности реакционной среды и пропорционально активности γ-глутамилтрансферазы [124].

Для определения активности щелочной фосфатазы использовали оптимизированный кинетический метод с диэтаноламиновым (ДЭА)

буфером. Его принцип основан на том, что скорость образования п-

нитрофенола, измеряемая фотометрически, пропорциональна активности фермента [76]:

ЩФ

п-нитрофенилфосфат + H2O п-нитрофенол + фосфат

Активность α-амилазы определяли оптимизированным энзиматическим кинетическим методом. Под действием α-амилазы синтетический субстрат

EPS [4,6-этиледен (G7) – п - нитрофенил – G1 - α, D - мальтогептаозид]

гидролизуется с образованием бесцветных нитрофенилмальтозидов. Под действием α-глюкозидазы нитрофенилмальтозиды гидролизуются до глюкозы и окрашенного п-нитрофенола. Скорость нарастания концентрации п-нитрофенола пропорциональна активности фермента [124].

Методика определения динамического поверхностного натяжения сыворотки крови животных

Определение динамического поверхностного натяжения (ДПН)

сыворотки крови проводили на тензиометре ВРА-1Р (Maximum Bubble Pressure Tensiometer) (ФРГ, Sinterface Technologies) (Рисунок 2а). Его принцип работы основан на методе максимального давления в пузырьке

(Рисунок 2б), который является наиболее удобным для исследования биологических систем [24, 28, 70, 71, 88, 159].

Перед каждым экспериментом вначале проводят измерение ПН дистиллированной воды для контроля чистоты капилляра. Если капилляр чистый, то тензиограмма для дистилированной воды представляет собой линию, расположенную параллельно оси абсцисс, то есть значения ПН при

62

изменении времени существования поверхности изменяются в пределах ошибки и находятся в области 72,0-72,3 мН/м (при нормальных условиях).

а

2а 2б

Рисунок 2 – Тензиометр ВРА-1Р: а) внешний вид б) принцип работы Измерение проб сыворотки крови проводилось стандартным методом,

при котором происходит постепенное увеличение времени существования поверхности. Этот метод позволяет получить значения ДПН при времени существования поверхности от t → 0 до t → ∞.

Для проведения измерений необходимо 2-3 мл сыворотки крови. Проба помещается в специальный стеклянный стаканчик. Затем задаются параметры измерения (частота образования пузырьков, время эксперимента,

метод проведения эксперимента (стандартный)). Начинается автоматическое тестирование капилляра, если капилляр успешно проходит воздушный тест,

то он автоматически опускается на глубину 3 мм в жидкость и проходит тестирование в жидкости, только после его окончания начинается измерение.

Во время измерения, которое продолжается около 30 минут прибор постоянно образует новые пузырьки с разным временем существования поверхности и в зависимости от давления, необходимого для отрыва пузырька воздуха от капиллярного кончика определяется значение поверхностного натяжения исследуемой жидкости. На экране компьютера полученные данные отображаются в виде графика-тензиограммы и таблицы.

Тензиограмма представляет собой график зависимости поверхностного

63

натяжения ( ) от времени (t). С помощью специальной компьютерной программы ADSA рассчитываются параметры ПН при разных временах

существования поверхности: 0 при t→ 0, 1 при t 0,02с, 2 при t 1 с, 3 при t → ∞, также подсчитываются углы наклона начального (λ0) и конечного (λ1)

участка кривой в координатах /(t-1/2) [24, 28, 60, 70, 159].

Статистическая обработка данных

Полученные данные были обработаны биометрически на ПК по

стандартным методикам. Определены критические значения критерия достоверности на основе t-распределения Стьюдента: *Р≤0,05; **Р≤0,01;

*** Р≤0,001[40, 53].

Между значениями физиолого-биохимических показателей и параметрами ДПН сыворотки крови рассчитаны коэффициенты корреляции

(r) по формуле [28, 40, 53]:

Коэффициент корреляции может принимать значения от 0 до ±1. Чем ближе значение r к 1, тем больше связи между данными признаками:

| r | от 0,01 до 0,29 - слабая положительная (отрицательная)

корреляционная связь; | r | от 0,3 до 0,69 - средняя положительная

(отрицательная) корреляционная связь; | r | больше 0,69 - сильная положительная (отрицательная) корреляционная связь.

Отрицательное значение r характеризует обратную корреляционную связь (уменьшение одной величины сопровождается увеличением другой),

положительное значение – прямую связь (увеличение значений одной переменной величины приводит к возрастанию значений другой) [28, 40, 53].

64

3. Результаты исследований и их обсуждение

3.1. Физиологические показатели у животных разных видов и

закономерности их изменения с возрастом

Для определения стояния организма в целом, так и отдельных его систем важными являются физиологические показатели, такие как температура тела, частота пульса и частота дыхательных движений. Данные параметры обязательны при наблюдении за животными, они также зависят от возраста животного и изменяются в процессе онтогенеза.

Поросята в ранние фазы постнатального онтогенеза активно растут. У

них происходит становление всех систем организма, в том числе дыхательной и сердечнососудистой, терморегуляции. В условиях свиноводческого хозяйства постоянно меняется кормление и содержание, что отражается на основных физиологических показателях организма.

Таблица 1. Основные физиологические показатели поросят разного возраста (М±m)

Физиологические показатели у поросят на ранних этапах развития находились в пределах нормы, что не противоречит данным других авторов

[112, 113] (Таблица 1). Для каждой группы имелись особенности, связанные с возрастом животных. Так, у поросят температура тела находилась примерно

66

Температура тела у животных с возрастом не изменялась и находилась в пределах от 38,27±1,5 0С до 38,60±0,20 0С.

Частота пульса у особей 6 месяцев находилась на верхней границе нормы, что характерно для животных в период роста. В дальнейшем частота пульса снижалась на 11%. У животных в возрасте 1-13 лет она находилась на постоянном уровне, в среднем 125,7±3,48 уд/мин.

Частота дыхания у котов в 6 месяцев была выше на 27% (Р≤0,05), по сравнению с особями в возрасте 1 года. В дальнейшем она практически не изменялась. Между молодыми и взрослыми животными разница составила

3,6%, а к преклонному возрасту данный показатель возрос на 0,56%.

Таким образом, у котов основные физиологические показатели находятся в пределах нормы, и их изменения в процессе постнатального онтогенеза согласуются с возрастными изменениями в их организме [112].

Температура тела у собак разного возраста находилась в пределах физиологической нормы (Таблица 3). Изменения между различными группами не наблюдались и были в пределах ошибки измерений. Средняя температура была 38,38±0,19 0С.

Таблица 3. Основные физиологические показатели собак разного возраста (М±m)

Частота пульса у собак всех возрастных групп находился в пределах нормы, характерной для данного вида. При этом у щенков 6 месяцев её значения выше на 11% (Р≤0,05), по сравнению с особями 1 года. У взрослых животных значения изменялись в пределах ошибки, при этом у

67

собак среднего возраста частота пульса была на 1,6% выше, чем у молодых животных (1 год), и на 0,3% выше, чем у пожилых.

Частота дыхания у собак соответствовала физиологической норме. При этом с возрастом наблюдалось снижение данного показателя. Самые большие изменения установлены между 6-месчными и годовалыми особями

(42% (Р≤0,01)). Разница между молодыми собаками и животными среднего возраста составляла только 3%, а в сравнении с особями преклонного возраста – 7,5%.

Таким образом, значения физиологических показателей у собак находятся в пределах нормы и изменяются в зависимости от возраста [112].

Определив основные физиологические показатели у свиней, котов и собак и проанализировав их, можно сказать, что они соответствуют норме,

имеющейся в литературе [112, 113] и различаются у разных видов. В

процессе онтогенеза данные параметры также претерпевают ряд изменений,

которые соотносятся с возрастными изменениями в организме животных и отражают определенную стадию их развития. Все полученные данные позволяют говорить о состоянии физиологических процессов в организме в целом и возможности использования данных групп животных для дальнейших исследований.

3.2. Закономерности изменения физиолого-биохимических параметров

биологически активных веществ в сыворотке крови свиней в раннем

постнатальном онтогенезе

В условиях современного животноводства чрезвычайно важно проследить за состоянием организма животного с самого раннего возраста для определения возможности его дальнейшего хозяйственного использования и предупреждения нарушений его физиологических процессов и функций. Свиньи, начиная с первой фазы постнатального онтогенеза (фазы новорожденности), подвергаются различным воздействиям со стороны внешней среды, особенно в условиях интенсивной технологии,

применяемой при их содержании в свиноводческих хозяйствах. Для контроля

68

за состоянием их обмена веществ, роста и развития организма свиней применяют различные отдельные показатели крови, которые не всегда могут дать полную информацию об определенном виде обмена (азотистом и белковом, липидном, углеводном, минеральном, водно-электролитном) в

организме, вот почему в качестве интегрального параметра состояния организма необходимо комплексное изучение биологически активных веществ и их взаимосвязи в крови (сыворотке), которые определяют её динамическое поверхностное натяжение (ДПН).

3.2.1. Закономерности изменения параметров состояния азотистого и

белкового обменов у свиней в раннем постнатальном онтогенезе

У свиней в начальные сроки постнатального онтогенеза были определены показатели азотистого и белкового обмена: общий белок,

альбумины, мочевина и мочевая кислота (Таблица 4).

Таблица 4.Физиолого-биохимические показатели азотистого и белкового обменов у свиней в раннем постнатальном онтогенезе (М±m)

Установлено, что у поросят с 5-суточного до 10-суточного возраста происходит снижение уровня общего белка крови на 23% (Р≤0,001). С 10 до

20 суток содержание общего белка не изменяется, а затем к 60 суткам наблюдается его увеличение на 25% (Р≤0,001) (до 65,5±1,4 г/л). Начиная с 3-

69

месячного возраста, количество общего белка постепенно стабилизируется и к возрасту 7 месяцев достигает 73,2±2,5 г/л. Увеличение уровня общего белка у свиней с возрастом объясняется активным ростом животных, увеличением биосинтеза белка в их организме, что согласуется с литературными данными

[108].

Закономерности изменения содержания альбуминов в сыворотке крови не настолько четкие, при этом для каждой возрастной группы животных наблюдался достаточно большой разброс данных. Так, в первые 10 суток показатель варьирует от 31,3±4,7 до 33,5±3,7 г/л, затем к 20-ти суткам несколько снижается (до 24,7±3,4 г/л). К возрасту 210 суток были зафиксированы максимальные значения данного показателя (38,0±8,4 г/л),

что на 52% выше по сравнению с его минимальным количеством у поросят

20-суточного возраста.

Минимальное количество мочевины в сыворотке крови у поросят наблюдалось в возрасте 5 суток (4,6±0,9 ммоль/л), затем её количество возрастает в 2,9 раза (Р≤0,05) к 10 суткам, а затем снижается на 53% к 20

суткам. Далее с возрастом значения мало изменялись. Установление к

60 суткам относительно постоянного значения данного компонента, говорит о становление мочевинообразовательной функции в организме.

Количество мочевой кислоты у всех исследуемых групп животных,

находилось примерно на одном уровне от 111,0±29,4 мкмоль/л до 201,1±52,9

мкмоль/л, только в 2-месячном возрасте наблюдалось достоверное увеличение в 3,2 раза (Р≤0,05).

Таким образом, у свиней в начальные фазы постнатального онтогенеза для большинства физиолого-биохимических показателей азотистого и белкового обмена прослеживается четкая связь между их содержанием в сыворотке крови и возрастом животных. Наиболее четкие достоверные различия были установлены для общего белка, что не противоречит литературным данным [67, 108].

70

3.2.2. Закономерности изменения параметров состояния липидного

обмена у свиней в раннем постнатальном онтогенезе

Изменение параметров липидного обмена тесно связано с состоянием организма растущих животных, в особенности поросят, которых в дальнейшем будут использовать для откорма или в качестве ремонтного молодняка. Данные, полученные в результате их определения у поросят в возрасте от 5 до 210 суток, представлены в таблице 5.

Максимальное количество общего холестерола обнаружено у 10-

суточных поросят (5,21±0,47 ммоль/л), что на 66% (Р≤0,05) выше по сравнению с 5-суточными животными. Далее с возрастом его значения снижаются: на 55,7% (Р≤0,01) в 20 суточном возрасте, а в 2-месячном – еще на 53%. Минимальное количество общего холестерола было в возрасте

120 суток (0,92±0,30 ммоль/л).

Таблица 5. Физиолого-биохимические показатели липидного обмена у свиней в раннем постнатальном онтогенезе (М±m)

У поросят в возрасте от 5 до 20 суток происходит постепенное увеличение уровня триглицеридов на 31% (Р≤0,001) (от 1,39±0,02 ммоль/л до

1,82±0,03 ммоль/л). У 20-суточных поросят были установлены максимальные значения данного показателя по сравнению с другими возрастными группами. К 60 суткам происходит резкое снижение уровня