Капельный метод

В качестве отрицательного контроля используют пробирку со средой Левенштейна-Йенсена без инокуляции культурой микобактерий, а в качестве положительного контроля - пробирку с референс-штаммом М.tuberculosis H37Rv, выращенным на среде Левенштейна-Йенсена.

Полуколичественный метод и тест на термостабильность каталазы при 68°с

В качестве отрицательного контроля используют пробирку со средой Левенштейна-Йенсена без инокуляции культурой микобактерий, а в качестве положительного контроля - пробирку с референс-штаммом М.terrae, выращенным на среде Левенштейна-Йенсена.

Процедура исследования:

Капельный метод

Для постановки теста использовать двухнедельную культуру микобактерий на среде Левенштейна-Йенсена, заранее убедившись в наличии роста микобактерий. В пробирку с ростом микобактерий добавить 1-2 капли свежеприготовленной смеси твина 80 с перекисью водорода (готовый каталазный реагент). Наблюдать в течение 5 минут, происходит ли образование пузырьков газа.

Результаты и их интерпретация:

┌───────────────────┬───────────────────────────────────────────────────┐

│ Отрицательный │ Пузырьки газа не образуются │

├───────────────────┼───────────────────────────────────────────────────┤

│ Положительный │Несколько медленно образующихся пузырьков (1-3 мин)│

│ (медленный) │ │

├───────────────────┼───────────────────────────────────────────────────┤

│ Положительный │Немедленное бурное образование пузырьков │

│ (быстрый) │ │

└───────────────────┴───────────────────────────────────────────────────┘

Полуколичественный метод

Для постановки теста использовать двухнедельную культуру микобактерий на среде Левенштейна-Йенсена, заранее убедившись в наличии роста микобактерий. В пробирку с ростом микобактерий добавить 1 мл свежеприготовленной смеси твина-80 с перекисью водорода, плотно закрыть пробирку и оставить на 5 минут при комнатной температуре. В пробирке образуется столбик пены.

Измерить высоту этого столбика от уровня жидкости в пробирке до верхнего края пены

Результаты и их интерпретация:

Каталазная активность слабая или Высота столбика пены менее 31 мм

отсутствует

Неопределенный результат Высота столбика пены от 31 мм до 45

мм

Высокая каталазная активность Высота столбика пены более 45 мм

Тест на термостабильность каталазы при 68°С и рН = 7,0

Процедура исследования

┌───────────────────────────────────────────────────────────────────────┐

│ С помощью стерильной пипетки внести с соблюдением правил асептики │

│ 0,5 мл 0,067 М фосфатного буферного раствора (рН = 7,0) в пробирку │

│ размерами 16 х 125 мм с завинчивающейся крышкой; │

└─────────────────────────────────┬─────────────────────────────────────┘

▼

┌─────────────────────────────────┴─────────────────────────────────────┐

│ С помощью стерильной бактериологической петли или лопатки │

│ суспендировать в этом растворе исследуемую культуру микобактерий │

│ (использовать несколько петель биомассы); │

└─────────────────────────────────┬─────────────────────────────────────┘

▼

┌─────────────────────────────────┴─────────────────────────────────────┐

│ Поставить пробирки с бактериальными суспензиями в предварительно │

│ нагретую водяную баню на 2 часа при температуре 68°С; │

│ Температура и продолжительность инкубации имеют чрезвычайно важное │

│ значение; │

└─────────────────────────────────┬─────────────────────────────────────┘

▼

┌─────────────────────────────────┴─────────────────────────────────────┐

│ Вынуть пробирки из водяной бани и оставить при комнатной температуре │

│ до полного остывания; │

└─────────────────────────────────┬─────────────────────────────────────┘

▼

┌─────────────────────────────────┴─────────────────────────────────────┐

│ Внести в каждую пробирку 0,5 мл свежеприготовленной смеси твина 80 │

│ с перекисью водорода и плотно закрыть пробки; │

└─────────────────────────────────┬─────────────────────────────────────┘

▼

┌─────────────────────────────────┴─────────────────────────────────────┐

│ Наблюдать за образованием пузырьков, появляющихся на поверхности │

│ жидкости. Не встряхивать пробирку, так как при этом твин 80 может │

│ спонтанно образовывать пузырьки, что станет причиной │

│ ложноположительного результата; │

└─────────────────────────────────┬─────────────────────────────────────┘

▼

┌─────────────────────────────────┴─────────────────────────────────────┐

│ Пробирки с отрицательными результатами не выбрасывать раньше, чем │

│ через 20 минут. │

└───────────────────────────────────────────────────────────────────────┘