- •Гидролиз солей
- •1 Материалы, реактивы, оборудование:
- •2 Основные теоретические положения
- •3 Методика эксперимента и порядок выполнения работы
- •2.3 Влияние температуры на степень гидролиза соли
- •Опыт 3. Смещение равновесия гидролиза
- •Физико-химические свойства белков
- •2 Общие положения
- •2.1 Определение изоэлектрической точки белков
- •2.2 Высаливание белков сульфатом аммония
- •2.3 Денатурация белков при нагревании
- •2.4 Разделение и очистка белков методом диализа
- •Определение показателей качества жиров
- •1 Материалы, реактивы и оборудование
- •2 Общие положения
- •2.1 Определение кислотного числа
- •2.2 Определение йодного числа жиров
- •2.3 Определение перекисного числа
2 Общие положения
2.1 Определение изоэлектрической точки белков
Белки, благодаря присутствию в их составе аминных и карбоксильных групп, существуют в растворах в виде заряженных частиц.
В зависимости от количества в белке аминных и карбоксильных групп его молекула в водном растворе приобретает положительный или отрицательный заряд. Большинство белков животного происхождения содержат в своем составе больше дикарбоновых аминокислот и поэтому они заряжаются отрицательно (белки-анионы). Некоторые белки содержат в своем составе значительные количества диаминокислот и поэтому заряжаются положительно (белки-катионы). Одноименный заряд молекул способствует взаимному отталкиванию частиц, что обеспечивает устойчивость их в водном растворе.
Число ионизированных групп в белке может быть увеличено или уменьшено при изменении рН среды. В кислой среде подавляется диссоциация карбоксильных групп, и отрицательный суммарный заряд белковой молекулы уменьшается. Наоборот, в щелочной среде подавляется ионизация аминных групп, и положительный суммарный заряд белка уменьшается. При определенном значении рН число положительных зарядов на поверхности белковой молекулы будет равным числу отрицательных зарядов, и в целом заряд частицы белка станет равным нулю. Состояние белка, при котором суммарный заряд его равен нулю, называется изоэлектрическим состоянием. рН, при котором белок находится в изоэлектрическом состоянии, обозначается рl. В изоэлектрической точке за счет равенства зарядов ослабляются силы отталкивания между белковыми частицами, что благоприятствует агрегации белковых молекул и выпадению белка в осадок, т.е в изоэлектрической точке раствор белка неустойчив, белок теряет один из факторов стабилизации - заряд.
При добавлении щелочи или кислоты к белку, выпавшему в осадок в изоэлектрическом состоянии, наступает перезарядка его молекул, и белок вновь растворяется.
Принцип метода.В нескольких пробирках с помощью ацетатных буферов создают растворы с различными значениями рН среды. Затем во все пробирки добавляют гидрофильное соединение, отнимающее у белка гидратную оболочку, удерживающую его в растворе. По пробирке с наиболее обильным осадком белка определяют значение рН, соответствующее изоэлектрической точке.
Ход работы.Для определения изоэлектрической точки желатина в пять пробирок наливают растворы уксусной кислоты, уксуснокислого натрия, раствора желатина и этилового спирта в соотношениях, указанных в таблице 1. После перемешивания в каждой пробирке раствор имеет определенное значение рН и степень мутности. рН наиболее мутной смеси соответствует изоэлектрической точке желатина. Результаты опыта записывают в таблицу1.
Таблица 1 Основные параметры опыта и его результаты
№ проб. |
Состав буферной смеси, мл |
рН смеси |
0,5% р-р желатина,мл |
Этиловый спирт,мл |
Степень мутности | |
0,1 н СН3СООН, мл |
0,1н Н3СООNa мл | |||||
1 |
1,8 |
0,2 |
3,8 |
1,0 |
4,0 |
|
2 |
1,4 |
0,6 |
4,4 |
1,0 |
4,0 |
|
3 |
1,0 |
1,0 |
4,7 |
1,0 |
4,0 |
|
4 |
0,6 |
1,4 |
5,1 |
1,0 |
4,0 |
|
5 |
0,2 |
1,8 |
5,7 |
1,0 |
4,0 |
|
В графике «степень мутности» отсутствие осадка обозначают знаком (-), наличие осадка – знаком (+), значительное помутнение – несколькими плюсами.
ВЫВОДЫ