Ход работы:
А. Опытная проба - 1) в центрифужную пробирку внести 1.25 мл фильтрата мочи и добавить до 5 мл раствора сульфосалициловой кислоты; 2) экспонировать 5 мин; 3) внести пробу после экспозиции в кювету (10 мм) фотоэлектроколориметра и определить (против воды) плотность образовавшейся мути, используя оранжевый фильтр.
Б. Контрольная проба: внести в центрифужную пробирку вместо сульфосалициловой кислоты 1,25 мл дистиллированной воды и далее воспроизвести пункты 2- и 3 основного опыта.
Найти разницу между оптической плотностью опытной и контрольной проб и учесть результат по калибровочному графику.
Представленный график (см. следующую страницу) построен по результатам определения оптической плотности растворов альбумина с известной концентрацией при добавлении к ним сульфосалициловой кислоты: на оси абсцисс отложены значения концентраций белка (в %), на оси ординат – значения оптической плотности (единица измерений - экстинкции).
0
.4
0.20
0.12
0.04
0.1 0.25 0.50 1.0 С, %
График зависимости оптической плотности растворов белка в пробах с сульфосалициловой кислотой от концентрации белка
Дайте обоснованные ответы на следующее:
1. Как узнать, осажден ли полностью белок из биологической жидкости после 50% насыщения её сульфатом аммония?
Дополнительные сведения: жидкость после 50% насыщения сульфатом аммония и фильтрования прозрачна.
2. Изоэлектрическая точка исследуемого белка равна 5.3.
Назвать аминокислоты, преобладающие в составе белка.
3. Плазма крови насыщена сульфатом аммония. При этом выпали в осадок белки.
Как разделить белки на глобулины и альбумины, если у Вас имеется только центрифуга и дистиллированная вода?
4. Как изменится электрический заряд растворенной в воде аминокислоты при изменении реакции среды в кислую и основную сторону?
5. Перечислить химические связи в белковой молекуле в последовательности от прочных к слабым.
6.Какие связи участвуют в образовании белков-сополимеров?
7. Назвать связь, обеспечивающую образование первичной структуры полипептида.
8. Назвать связи, поддерживающие вторичный и третичный уровни организации белковой молекулы,назвать процессы, которые могут вызвать их разрушение.
9. Что представляет собой водородная связь, какие химические элементы способны участвовать в её образовании ?
10. В чем заключается доля доменной структуры в функционировании белков?
11. На каком этапе формировании белковой молекулы необходимы шапероны? Что может произойти с молекулой белка при их отсутствии в клетке?
12. В каком участке представленного ниже полипептида могут находиться точки изгибов, какие участки могли бы иметь спиралевидную конфигурацию?
ала-гли-тир-про-мет-фен-цис-ала-цис-ала-гис-ала-цис-фен-гис-про-гис-ала.
13.. За счет каких связей может образоваться сополимер из двух нижепредставленных пептидов?
а) ала-мет-арг-цис-ала-гли-сер-гли-цис-тре;
б) лиз-глу-арг-цис-арг-гли-тре-сер-лиз-тре-глу-сер.
14. Как, используя биуретовый метод определения белка и сульфат аммония, установить соотношение между альбуминами и глобулинами сыворотки крови?
15. Отношение количества альбуминов к количеству глобулинов в сыворотке крови больного равно 1,5. Рассчитайте содержание глобулинов, если концентрация альбуминов равна 5,0 г%.
16. Назовите две основные конфигурации белковой молекулы и укажите различия между ними.
17. На каком уровне пространственной организации различают белки глобулярные и фибриллярные?
18. Назвать важнейшие группы основных белков.
19. Почему протамины и гистоны отличаются основным характером ?
20. Почему протамины и гистоны коагулируют при сильном нагревании только в сильно щелочной среде ?