Петровский Б.В., Перельман М.И. - Аутотрансплантация лёгкого в эксперименте

282 Глава девятая

После отсроченной аутотрансплантации с консервацией в те­ чение 2 часов ткань аутотрансплантированного легкого воздушна, местами альвеолы неравномерно расширены и неравномерной ве­ личины, альвеолярные перегородки тонкие (рис. 133). Следова­ тельно, после отсроченной аутотрансплантации с консервацией легкого в течение 2 часов существенных изменений в ткани лег­ кого также не наблюдалось и она не отличалась от ткани интактного легкого.

При гистологическом исследовании легкого после консервации в течение 24 часов отмечались участки дистелектазов и очаговых ателектазов, которые чередовались с воздушной легочной тканью. Альвеолярные перегородки были утолщены, местами наблюдалась их гомогенизация. Сосуды и бронхи спавшиеся, имели гофриро­ ванный вид. После отсроченной аутотрансплантации с консерва­ цией в течение 24 часов ткань аутотрансплантированного легкого воздушная, местами сохранялись мелкие участки дистелектазов. Наблюдались отек и утолщение стенок альвеолярных перегородок, местами кровоизлияния в альвеолярные перегородки, что могло свидетельствовать о нарушении проницаемости сосудистой стенки после консервации в течение 24 часов (рис. 134).

При гистологическом исследовании ткани легкого после кон­ сервации в течение 48 часов были обнаружены очаговые ателекта­ зы, спавшиеся сосуды и бронхи с гофрированной стенкой.

Через 72 часа консервации отмечались обширные ателектазы с наличием спавшихся альвеолярных ходов, спавшиеся и гофри­ рованные бронхи и сосуды.

Через 96 часов консервации легкое было в состоянии сплошного ателектаза, альвеолы прилегали одна к другой, просветы альвеол гцелевидной формы, бронхи спавшиеся, с гофрированной слизи­ стой оболочкой.

Следовательно, при длительной консервации при температуре

спавшихся альвеол, бронхов и сосудов.

После отсроченной аутотрансплантации с консервацией легких в течение 2 и 24 часов наблюдалось увеличение летальности животных после операции. Основная причина смерти животных была связана с развитием отека легких, а в некоторых случаях —

в первые 3 суток после операции отсроченной аутотрансплантации легкого с консервацией в течение 2 часов в аутотрансплантированном легком отмечались дистелектазы, умеренное утолщение аль­ веолярных перегородок за счет набухания, периваскулярный отек

и кровоизлияния, резкое полнокровие капилляров. В 3 случаях отмечалась картина геморрагического инфаркта без тромбоза сосу­ дистых анастомозов.

При гистологическом исследовании животных, погибших в те­ чение первых 3 суток после отсроченной аутотрансплантации легкого с консервацией в течение 24 часов, в основном от развития отека легких, в аутотрансплантироваяном легком наблюдались дистелектазы и участки очаговых ателектазов, отек интерстиция и стенки альвеол. В просвете альвеол и части бронхиол отмечалась белковая жидкость, местами с примесью эритроцитов, периваскулярный отек, местами кровоизлияния в альвеолярные перегородки, резкое полнокровие капилляров и расширение лимфатических щелей в адвентиции сосудов.

Аналогичную гистологическую картину наблюдали F. Largiader et al. (1965) у животных, погибших после трансплантации легких с консервацией в течение 24 часов.

При исследовании лимфатической системы аутотрансплантированного легкого после консервации в течение 24 часов у животных, погибших в первые дни после операции, обнаружено, что поверх­ ностная и глубокая лимфатическая сети и сплетения висцеральной плевры образованы резко расширенными лимфатическими капил­ лярами и сосудами. Лимфатические капилляры, сопровождавшие мельчайшие разветвления бронхиального дерева и легочных сосу­ дов, резко расширены, и в местах их соединения с лимфатическими капиллярами мелкопетлистой и крупнопетлистой сетей глубоких слоев висцеральной плевры наблюдался массивный выход инъек­ ционной массы. Перибронхиальные и периваскулярные лимфати­ ческие сети и сплетения образованы также резко расширенными лимфатическими капиллярами и сосудами. Из лимфатических капилляров и сосудов всех сетей и сплетений легкого наблюдался массивный выход инъекционной массы.

Гистологические данные и результаты исследования лимфати­ ческой системы указывали на нарушение проницаемости стенки кровеносных и лимфатических сосудов, которое играло важную роль в развитии отека легкого и в гибели животных после отсро­ ченной аутотрансплантации с консервацией в течение 24 часов.

Исследование легкого животных, выживших после отсроченной аутотрансплантации с консервацией в течение 24 часов, в отдален­ ные сроки (через 6 и 10 месяцев) показало, что в легком отмеча­ лись мелкие очаговые участки дистелектазов, структура паренхимы легкого была не изменена, утолщения стенки альвеол и бронхиол не наблюдалось (рис. 135).

Исследование лимфатической системы аутотрансплантированного легкого через 6 месяцев после этих же операций показало, что поверхностная сеть висцеральной плевры образована очень

широкими лимфатическими капиллярами. В глубоких слоях вис­ церальной плевры располагались мощные мелкопетлистые и круп­ нопетлистые сплетения лимфатических сосудов, которые имели изрезанные контуры, на стенках их было много слепых выростов различной формы. Эти данные указывали на то, что в отдаленные сроки после отсроченной аутотрансплантации с консервацией в течение 24 часов наблюдалось восстановление структуры легкого.

Таким образом, в ткани легкого после немедленной аутотранс­ плантации и отсроченной аутотрансплантации с консервацией в течение 2 часов не отмечено существенных изменений. После отсроченной аутотрансплантации с консервацией в течение 24 ча­ сов наблюдались отек и кровоизлияния в стенку альвеолярных перегородок, что могло свидетельствовать о нарушении проницае­ мости сосудистой стенки.

порта электронов, осуществляемый с помощью цитохромной системы. С точ­ ки зрения энергетического обмена реакции первой фазы и в значительной степени второй и третьей являются подготовительными. Основное количе­ ство энергии выделяется в реакциях четвертой фазы окисления.

С биологическим окислением тесно связаны клеточные органеллы митохондрии, которые представляют собой многоферментные системы. Митохондрии способны окислять большое число субстра­ тов, в том числе различные промежуточные продукты цикла Кребса. Митохондрию можно рассматривать как самостоятельную биохимическую единицу, содержащую ферменты, кофакторы и вспомогательные вещества, необходимые для осуществления био­ химических реакций каталитического типа.

Однако действие ферментов не может осуществляться без промежуточных термостабильных веществ, так называемых коферментов, которые при тканевом дыхании играют роль своего рода коллекторов — собирателей электронов и протонов, окисляющихся от различных субстратов тканевого дыхания под действием дегидрогеназ. В настоящее время известны 2 химических вещества, играющих в окислительно-восстановительных процессах роль

Э. Пирс (1962) считает, что гистохимическое определение митохондриально расположенных дегидрогеназ является индикатором физического состояния митохондрий клетки. С помощью реакций на эти дегидрогеназы можно обнаружить самые начальные изме­ нения физиологического состояния митохондрий.

В соответствии с интерпретацией гистохимических данных, предложенной Пирсом (1962), в ткани легкого при консервации производилось изучение ферментов НАД-диафоразы и НАДФ-диа- форазы. Эти ферменты связаны с общей активностью систем де­ гидрогеназ.

Активность цикла Кребса определяли по сукцинатдегидрогеназе, малатдегидрогеназе и глютаматдегидрогеназе, которые явля­ ются важными компонентами цикла Кребса.

Активность ферментов пентозного цикла определяли по глюко- зо-6-фосфатдегидрогеназе, которая обеспечивает альтернативный путь окисления глюкозы и создание исходных продуктов для син­ теза пентозонуклеотидов, идущих на построение нуклеопротеидов.

Активность ферментов гликолитического цикла определяли по алкогольдегидрогеназе и лактатдегидрогеназе, а также по а-глице- рофосфатдегидрогеназе. Алкогольдегидрогеназа обусловливает либо окисление спирта, либо образование его из ацетальдегида. Лактатдегидрогеназа служит индикатором той части гликолитического

цикла, в котором потребляется глюкоза и вырабатывается лактат; ос-глицерофосфатдегидрогеназа принимает участие в метаболизме триозофосфата. Эта реакция образования АТФ из АДФ обеспечи­ вает наличие источника энергии в клетке.

С помощью применения гистохимических методов в настоящее время представляется возможным изучить локализацию и актив­ ность ферментов непосредственно в гистологическом срезе легочной ткани, которая подвергается консервации. Гистохимические мето­ ды позволяют, таким образом, выявить некоторые стороны обмен­ ных процессов в ткани легкого при консервации и различные изменения активности обменных процессов в различные сроки прс^ ле операции. С помощью гистохимических методик можно обнару­ жить изменения окислительно-восстановительных процессов в от­ дельных клетках и в группах клеток в ткани легкого. Эти исследо­ вания позволяют косвенно судить о жизнеспособности ткани легкого при консервации и — в сочетании с данными гистологиче­ ских, биохимических и электронно-микроскопических исследова­ ний — оценивать результаты последующих пересадок консервиро­ ванного легкого.

Гистохимические исследования активности ферментов при аутотрансплантации и консервации легкого проводились мало. И. Г. Вазина (1969) не обнаружила изменения активности фер­ ментов при немедленной аутотрансплантации легкого. В отдален­ ные сроки после операции (до 2 лет) активность дегидрогеназ аутотрансплантированного легкого не отличалась от интактного (Диденко, 1967).

По данным И. Р. Вазиной (1969), при сохранении легкого в условиях нормотермии в течение 4 часов уменьшалась активность сукцинатдегидрогеназы. J. Takeda (1968) при консервации легкого

исчезает после 2 суток консервации легкого. Специальных гистохи­ мических исследований при консервации легкого не проводилось.

Для определения активности ферментов применялся нитротетразолий синий, дающий окрашенный нерастворимый осадок зерен диформазана в местах активности ферментов.

Активность и локализацию ферментов определяли в эпителии бронхов, эпителии слизистых желез, мышечных пучков бронхов, в клеточных элементах стенки бронхов, альвеолярных перегородок и в альвеолярных макрофагах.

Исследование активности и локализации ферментов в ткани легкого при различных сроках консервации (табл. 16). НАД-диа-

Обозначения активности: + + + + очень высокая, +++- высокая, 4~Ь умеренная, + низ­ кая, — отрицательная.

фораза. Исследования ткани легкого до консервации (исходные данные) показали высокую активность фермента. Зерна диформа­ зана отмечались в большом количестве в эпителии бронхов и в кле­ точных элементах стенки бронха, меньше зерен определялось в клетках альвеолярных перегородок и в альвеолярных макробрагах.

Через 24 часа консервации активность и локализация фермента в ткани легкого существенно не изменялась. Через 48 часов кон­ сервации активность фермента в ткани легкого уменьшалась. Зер­ на диформазана отмечались в эпителии мелких бронхов и в клет­ ках альвеолярных перегородок. Через 72 часа определялась низ­ кая активность в эпителии бронхов в виде мелкой диффузной зернистости. Через 96 часов зерна диформазана почти полностью отсутствовали.

НАДФ-диафораза. До консервации легкого высокая активность фермента определялась в виде мелких гранул диформазана в ци­ линдрическом эпителии бронхов и слизистых желез, в клетках альвеолярных перегородок зерен диформазана было мало.