Сокращенная схема дифференциации микобактерий с использованием биопробы
-
Полученная культура
-
Пигментная
(I, II, IVгруппы)
Беспигментная
(бычий, человечий, птичий вид, микобактерии III и IV групп)
-
А) Посев на агаровую среду (МПА):
I, II, III – не растут
IV – все растут
Б) Рост при 45 ºС:
I, II – не растут
III, IV - растут
В) Образование пигмента под воздействием света:
- I группа
Г) Образование пигмента в темноте
– II группа
Биопроба
Кролик
Морская
свинка
Вид
(Группа)
+
-
+
-
+
+
-
-
Бычий
Человеческий
Птичий
III группа
атипичные
микобактерии
Примечание: + наличие вирулентности к данному виду животного
(вызывает заболевание и гибель животных)
- отсутствие вирулентности (не вызывает гибели и
заметных изменений в органах)
Биологический способ (биопроба). В большинстве районных ветеринарных лабораториях специалисты основное внимание уделяют биологической пробе с патматериалом от животных. Причем именно на этот метод возлагаются их основные надежды в диагностике туберкулеза, не уделяя должного внимания культуральному методу. Биопроба на морских свинках дает положительные результаты при наличии в инъецируемом материале 5 микобактерий туберкулеза.
После посева взвеси материала на питательные среды проверяют рН среды, при необходимости доводят ее до нейтральной и заражают 2-х морских свинок подкожно в области паха в объеме 1-2 см3 в зависимости от их общего состояния, веса (300,0 – 350,0), времени года и т.д. Срок наблюдения за инфицированными животными 3 месяца. Допускается объединение материала при биопробе от 2-х животных одной фермы.
Срок биопробы с материалом, а следовательно бактериологического исследования, может быть сокращен при положительном исходе. Так, в случае если хотя бы у одной их морских свинок, реагировавших на туберкулин через 30-45 дней (или павших до окончания срока биопробы) обнаружены туберкулезные поражения, подтвержденные микроскопией мазков из органов (печень, селезенка, почки, легкие), диагноз считается установленным. Вторую морскую свинку убивают, аналогично проводят дополнительно осмотр и микроскопическое исследование внутренних органов. Дальнейшие исследования не проводят. Срочно сообщают об этом хозяйству и высылают заключение.
Положительные результаты биопробы с материалом от животных свидетельствуют о наличии в исследуемом материале микобактерий туберкулеза бычьего или человечьего видов. Поэтому целесообразно биопробу ставить одновременно на 2 морских свинках и 2 кроликах весом 2,0-2,5 кг (заражают 1-2 см3 взвеси материала внутривенно в краевую вену уха), что позволяет сразу определить вид возбудителя туберкулеза, вызвавшего гибель определенного вида лабораторных животных.
Биопроба с культурой или определение видовой принадлежности выделенной культуры микобактерий проводят на 2 морских свинках и 2 кроликах, заражая их взвесью выделенной культуры в дозе 1 мг (обычно в объеме 1 см). Интерпретируют результаты биопробы аналогично. При необходимости заражают еще и 2-х кур, гибель которых вызывает только возбудитель туберкулеза птичьего вида. Критерии оценки результатов биопробы представлены в ранее приведенной схеме. При заражении лабораторных животных материалом, в котором находятся атипичные микобактерии, они остаются живы в течение 3-х месяцев (срок биопробы) и даже набирают в весе.
Исходя из выше изложенного, бактериологическая диагностика туберкулеза хотя и является в настоящее время обязательной, но имеет ряд существенных недостатков. Во-первых - это посмертная диагностика и ее результаты чаще всего касаются только группы убитых животных. Во-вторых, исследования растягиваются до 3 месяцев. В-третьих, используемые в настоящее время бактериологические методы исследования не позволяют выявить Л-формы возбудителя. Все это снижает ценность данного метода и заставляет искать более быстрые методы диагностики туберкулеза.
Кратность и порядок бактериологических исследований. Если на ферме (в стаде) выделилось до 10 реагирующих на туберкулин животных, то их подвергают контрольному диагностическому убою. При условии выделения более 10-и реагировавших животных убою подвергают 5 голов с наиболее выраженными реакциями по аллергии (можно и по серологии). Если при убое хотя бы у одного из реагировавших на туберкулин животных обнаружены изменения, характерные для туберкулеза, диагноз по данной ферме (стаду) считается установленным. Накладывается карантин и проводится оздоровление хозяйства от заболевания.
При не четко выраженных изменениях отбирают материал для лабораторного исследования с целью подтверждения диагноза. В данном случае, как уже отмечалось выше, положительное заключение микроскопического или гистологического исследования по подтверждению этиологии этих изменений, т.е. что они туберкулезной природы, имеет юридическую силу. Диагноз установлен, причем это проводится в более краткие сроки, выигрывается время:
Бактериоскопическое исследование мазков-отпечатков из пораженных органов или лимфатических узлов – 1-2 дня.
Гистологическое исследование – в течение 5-7 дней.
Бактериологическое исследование (при отрицательных результатах бактериоскопического и гистологического исследований) – в сроки до 3 месяцев.
Особенно тщательно необходимо проводить экспертизу гранулематозных поражений, обнаруживаемых только в брыжеечных лимфатических узлах, так как они в большинстве случаев бывают обусловлены другими микроорганизмами (плесени, кандиды, нокардии), паразитами и т.д. В чистом виде «кишечная форма» туберкулеза на практике встречается крайне редко. Поэтому изменения, обнаруженные только в брыжеечных лимфоузлах необходимо подтверждать лабораторными исследованиями этого материала.
Если при проведении контрольного убоя с диагностической целью изменения у животных отсутствуют, то обязательно отбирают материал для лабораторного исследования от каждой туши животного отдельно по утвержденной схеме, упаковывают, этикетируют и доставляют в районную (или другие) лабораторию.
Если же у реагировавших животных при проведении вторичного контрольного убоя туберкулезные изменения отсутствуют, а в лаборатории получены предварительные положительные результаты бактериологического исследования материала от ранее убитых животных данной фермы (т.е. через 45-50 дней уже может быть получен рост колоний микобактерий на питательной среде), то отбирать во второй раз материал для бактериологического исследования не обязательно. И наоборот, если предварительного положительного результата по лабораторному исследованию ране взятого материала нет, то опять отбирают материал для повторного бактериологического исследования.
Очередные аллергические исследования скота на данной ферме проводят через 3 мес., симультанной пробой с применением туберкулина для млекопитающих и КАМ (или для птиц), применяют другие методы дифференциальной диагностики туберкулеза.
На основании результатов аллергических, патологоанатомических и бактериологических исследований с учетом клинических и эпизоотических данных устанавливают дифференцированный диагноз.
Профилактика туберкулеза. Основа профилактики туберкулеза – недопущение заноса инфекции в стадо. Молочно-товарные фермы должны быть огорожены и снабжены на входе дезобарьерами и дезоподушками. Комплектация стад должна осуществляться здоровыми животными из длительно благополучных стад и только после прохождения карантина под контролем ветеринарной службы.
Поголовье молочно-товарных ферм должно быть пронумеровано и учтено.
В пастбищный период целесообразно содержать животных в летних лагерях, а в животноводческих помещениях проводить санитарный ремонт и дезинфекцию.
При обнаружении больных животных на стадо решением райисполкома накладывают карантин. Ликвидацию болезни ведут по утвержденному плану оздоровления, за выполнение которого несет ответственность руководитель и зооветспециалисты хозяйства.
Если реагирующих животных обнаруживают в личном пользовании у граждан, на двор (ферму) накладывают ограничения (запрещают общий выпас, водопой, реализацию молочных продуктов). Молоко от таких животных необходимо пастеризовать или кипятить.
Оздоровление стад от туберкулеза. Наиболее эффективным способом оздоровления от туберкулеза является одновременная и полная сдача на убой неблагополучного стада.
При поражении туберкулезом менее 25% поголовья оздоровление проводят путем систематических исследований, изоляции и сдачи на убой реагирующих на туберкулин животных.
В обязательном порядке проводят организационно-хозяйственные мероприятия:
- дезинфекция помещений (после удаления реагирующих животных);
- благоустройство прифермской территории (уборка навоза, замена грунта, планировка, организация биотермического обеззараживания навоза и выдерживание его в буртах не менее 2 лет);
- организация пастеризации молока (при режимах нагрева до 850С в течении 30 мин или 900С 5 мин.);
- изолированное выращивание молодняка и подготовка нетелей для замены стада;
-улучшение кормления и условий содержания животных;
- текущий и капитальный ремонт помещений, строительство профилакториев, родильных отделений, навозохранилищ, летних лагерей;
Дезинфекция при туберкулезе. Для повышения эффективности дезинфекции важно провести тщательную механическую очистку поверхностей.
Дезинфекцию проводят горячим 3% раствором формальдегида в 3% каустической соде.
Эффективно убивает возбудитель туберкулеза малотоксичный дезинфектант Белстерил (0,4%), представляющий раствор надуксусной кислоты.
Использование новых нетоксичных дезинфектантов: Витана (3%), Комбинированного дезинфектанта поверхностей (2%), Дезавита П (3%), Демоса (3%), обладающих хорошими моющими свойствами, позволяет одновременно проводить механическую очистку и дезинфекцию поверхностей.
Дезинфектанты наносят на поверхности из расчета 0,75-1 л /м2 и выдерживают, как минимум 2ч. После применения малотоксичных дезинфектантов мойку поверхностей можно не проводить.
Меры личной профилактики. К работе на животноводческих фермах допускаются здоровые лица, после медицинского обследования. Ежегодно животноводы обязаны проходить флюорографию, а при необходимости и другие методы диагностики.
Животноводы должны быть обеспечены спецодежой и местами ее хранения.
Руководству хозяйств необходимо принимать меры для обеспечения персонала моющими и дезинфицирующими средствами, аптечками первой помощи, полотенцами.