ЗАНЯТИЕ № 20 ТЕМА: ВОЗБУДИТЕЛИ ОСОБО-ОПАСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

1. Особо опасные инфекции. Таксономия и биологические свойства возбудителей. Особенности микробиологической диагностики. Противоэпидемический режим в лабораториях.

2. Патогенные вибрионы. Таксономия. Антигенная структура. Принципы серологической классификации. Биовары. Ферментовары. Факторы патогенности. Токсины холерного вибриона, свойства. Эпидемиология, патогенез и клинические проявления холеры.

3. Методы лабораторной диагностики холеры: бактериологическая диагностика (классическое исследование); экспресс-диагностика больных и контактировавших; методы массового обследования на носительство и обнаружение холерного вибриона во внешней среде. Серологические методы диагностики холеры. Иммунитет. Общая и специфическая профилактика и лечение холеры.

4. Парагемолитический вибрион. Роль нехолерных вибрионов в этиологии пищевых токсикоинфекций.

5. Бруцеллы. Таксономия. Виды бруцелл и признаки их дифференциации. Патогенность бруцелл для человека и животных. Факторы патогенности. Локализация возбудителя в организме. Методы лабораторной диагностики: а)бактериологический; б)биологический; в)серологический; г)аллергодиагностика. Особенности иммунитета при бруцеллезе. Специфическая профилактика и терапия. Антибиотикотерапия.

6. Франциселлы. Классификация, свойства, роль в патологии человека. Возбудитель туляремии. Биологические особенности. Географические варианты. Эпидемиология, клиника и методы лабораторной диагностики туляремии. Иммунитет, специфическая профилактика и терапия заболевания.

7. Возбудитель чумы: классификация, морфологические свойства, культуральные свойства, биохимические свойства. Возбудитель чумы: серологические свойства, факторы патогенности, резистентность во внешней среде.

8. Чума: источник инфекции и механизм (пути) передачи, общая характеристика болезни, взаимодействие возбудителя с организмом человека. Микробиологическая диагностика чумы.

9. Возбудитель сибирской язвы. Таксономия. Биологические свойства. Отличие от антракоидов. Факторы патогенности. Сибирская язва у человека. Микробиологические методы диагностики. Реакция термопреципитации по Асколи. Иммунопрофилактика. Препараты для химиотерапии.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ

Возбудитель Домен (царство): Procaryota , Отдел: Gracilicutes, Семейство: Vibrionaceae, род Vibrio, биовар choierae classic, серогруппа О1( в зависимостиот сочетания А-, В- и С-субъединиц О-антигена различают серовары: Огава (АВ), Инаба (АС) и Гикошима (ABC) открыты Р. Кохом в 1883 г. Биовар ETor, серогруппа О139 Bengal (агглютинируются сывороткой О139) выделенны в 1906 г. в Египте Ф. и Е. Готшлихами на карантинной станции Эль-Тор. Всего различают более 200 О серогрупп, Н-антиген является общеродовым антигеном.

Исследуемый материал: испражнения ,рвотные массы,

Бактериоскопический метод

V.chоlerae Окраска по Граму Увеличение x1000

Бактериологический метод.

Питательные среды и характер роста:

Оптимальная температура роста 37 С и рН 8,5—9,0 с 0,5% натрия хлорида. Среда накопления 1% щелочная пептонная вода, на которой бразуется пленка течение 6—8 ч. Элективной средой щелочной агар (мелкие голубоватые в проходящем свете колонии) и TCSBS

-среда (тиосульфат-цитратный сахарозо-желчесодержащий агар), на котором образует колонии желтого цвета.

Учет гликозидазной активности холерного и нехолерного вибрионов на средах Гисса (триада Хейберга)

Группа	Ферментация
	Манноза	Сахароза	Арабиноза
I (холерный вибрион) Vibrio cholerae	+	+	-
II (нехолерный вибрион) Vibrio metschikovi	-	-	+

Отличие холерного вибриона от холероподобных вибрионов проводится по следующим свойствам:

1) САхароза, МАНноза, РАМноза – СА+МА+АРА-; 2) Агглютинация О1 и О139 сыворотками;

3)Лизис холерным или эльтор фагами;4)наличие холерогена –энтеротоксина (ПЦР, эти штаммы не лизируют эритроциты барана).

Учет результата постановки нитрозоиндоловой пробы: Vibrio cholerae образует индол на среде Клиглера, пептонной воде (ПВ + 20% H₂SO₄ →красное окрашивание).

Серовары возбудителя холеры:О1 и О139 из более чем 200 О серогрупп, Н- общеродовой антиген.

Ускоренная диагностика холеры по методу Ермольевой-Полева (заполнить таблицу):

1% пептонная вода	1% пептонная вода + О1-сыворотка	1% пептонная вода + крахмал + реактив Андреде
Пленка на поверхности	Осадок (агглютинат на дне), «снег идет»	Пленка на поверхности, покраснение среды (крахмал разлагается до кислоты)

Определение биовара холерного вибриона

Признак		Биовары		Серовар О139
		Vibrio cholerae var. cholerae	Vibrio cholerae var. eltor
Лизабельность фагами:	холерный "С"	+	-	-
	"Эль-Тор 2"	-	+	-
Агглютинация куриных эритроцитов		-	+	+/-
Гемолиз бараньих эритроцитов		-	+	-
Чувствительность к полимиксину		+	-	-

Серологическая диагностика холеры

РА в серодиагностике холеры : исслед сыворотку крови ( ищут антитела), используют диагностикум -3 часовая бульонная культура. Положительным считают титр 1/40, диагностическим не менее чем ; кратное увеличение.

Разведение сыворотки	1/40	1/80	1/160	1/320	1/640	КД	КС
Результат	+ хлопья	+ хлопья	+ хлопья	+ хлопья	- муть	Муть или осадок	Прозрачная

Вывод: Обследуемый болен холерой

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА Домен: Procaryota , Отдел: Gracilicutes, Сем-во: Brucelaceaceae

Возбудители B.melitensis – от овец, B.abortus – от коров, B.suis – от свиней

Морфология грамотрицательные коккобактерии

Клинические формы____________________________________________________________________________

Исследуемый материал:________________________________________________________________________

Вакцинный штамм бруцелл Окраска по Граму Увеличение х 630

Бактериологический метод

Питательные среды для культивирования бруцелл: печеночный МПБ, печеночный МПА и другие специальные среды (2 посева). Инкубация одного из посевов в атмосфере с 10% СО₂ для выделения Br. abortus в течение 1-4 недель

Учет ферментативных свойств и других признаков дифференциации бруцелл на виды и биовары (заполнить таблицу):

Вид бруцелл	Потребность в СО2	Рост в присутствии		Образование Н2S	Уреаза
		фуксина 1:25000	тионина 1:50000
B.melitensis	аэробные	+	+	-	+
B.abortus	5-10% СО2	+	-	+	+
B.suis	аэробные	-	+	+	+

Серологическая диагностика бруцеллеза (с 10-12 дня болезни).1. Постановка пластинчатой реакции агглютинации Хаддлсона с концентрированным диагностикумом, окрашенным синькой: из убитых бруцелл, окрашены для лучшей видимости мелкого агглютината

Ингредиенты	Квадраты
	1-й разв. 1/50	2-й разв. 1/100	3-й разв. 1/200	4-й разв. 1/400
Сыворотка больного из пальца 2мл	0,08	0,04	0,02	0,01
Диагностикум	0,03	0,03	0,03	0,03
Результат	+ агглютинат	+ агглютинат	+ агглютинат	+ агглютинат

2. Реакции Райта в серодиагностике бруцеллеза

Разведения сыворотки	1/50	1/100	1/200	1/400	1/800	1/1600	КД	КС
Результат	+ хлопья	+хлопья	+хлопья	+ хлопья	- муть	- муть	Муть или осадок	Прозрачная

Диагностический титр для взрослых равен 1/200; для детей - 1/100.

Вывод: титр равен 1/400, обследуемый болен бруцеллезом

3. Опсоно-фагоцитарная реакция (принцип метода) при болезни антитела –опсонины способствуют фагоцитозу Аллергодиагностика - проба Бюрне: Аллерген, сроки введения, результат:

Внутрикожно в ладонную поверхность предплечья вводят 0,1 мл бруцеллина. Результат реакции учитывают через 24 – 48 часов. Положительная ракция характеризуется отеком и гиперемией размером 4 (6 см.

и фагоцитарная активность увеличивается у больного увеличивается в средем на 30%;

4. Реакция Кумбса (принцип метода) выявление неполных антител:сыворотка = взвесь бруцелл +антиглобулиновая сыворотка →агглютинация по сравнению с кровью здорового не содержащего неполные антитела.

Аллергодиагностика

Аллерген, сроки введения, результат: накожный метод: тулярин (1 мл – 10 млрд. убитых микробных клеток). Пробу ставят на наружной поверхности плеча. Положительная реакция – гиперемия и отечность вокруг насечки диаметром 1–2 см через 48–72 часа.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ТУЛЯРЕМИИ

Возбудитель Домен: Procaryota , Отдел: Gracilicutes, Francisella tularensis

Морфологические свойстваГрамотрицательная коккобактерия

Исследуемый материал: мокрота (при пневмонии), пунктат лимфоузлов при бубонной форме.

Бактериологический метод Особенности выделения чистой культуры требует сложных питательных сред с добавлением яичного желтка, крови и цистеина,: Питательные среды

Серодиагностика

Кровяно-капельная реакция (принцип постановки) каплю крови обследуемого вносят в физ.раствор и в тулярин (1 мрд.клеток) → наблюдают агглютинацию

РА в серодиагностике туляремии

Разведения сыворотки	1/50	1/100	1/200	1/400	1/800	1/1600	КД	КС
Результат	+ хлопья	+хлопья	+хлопья	+ хлопья	- муть	- муть	Муть или осадок	Прозрачная

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЧУМЫ

Возбудитель Домен Procaryota , Отдел: Gracilicutes, Семейство: Enterobacteriaceae, Род: Yersinia вид Yersinia pestis

Клинические формы легочная, кишечная, бубонная

Исследумый материал: мокрота, кровь,пунктат лимфоузлов, испражнения

Бактериоскопический метод

Yersinia pestis Окраска метиленовым синим Увеличение Х1000

Yersinia pestis Окраска по Граму Увеличение Х1000

Характер роста Y. pestis на плотных ПС: МПА – через 48 часов «кружевной платочек», скошенный агар – вязкий серый налет

жидких ПСМПБ – «сталактитовый рост»

Дифференциально-диагностические признаки возбудителей чумы и псевдотуберкулеза

Признаки	Y.pestis	Y.pseudotuberculosis
Подвижность	-	+ (при 20ºС)
Рост на голодном (без пептона) 3% агаре	-	+
Ферментация: -рамнозы	-	+
-адонита	-	+
Уреазная активность	-	+
Лизис фагами: - чумным -псевдотуберкулезным	+ -	- +

Обозначения: (+) - наличие признака; (-) – отсутствие признака.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

Возбудитель Bаcillus anthracis грамположительная,споровая палочка

Клинические формы локализованная-кожная, генералиованная - пневмония или поражения кишечника.

Исследуемый материал при локализованной отделяемое карбункула, при генерализованной мокрота, кровь,испражнения.

Бактериоскопический метод

Bаcillus anthracis, споры Окраска по Цилю-Нельсену Увеличение х1000 Споры красного цвета

Бактериологический метод диагностики

Питательные среды и условия культивирования: неприхотлив хорошо растет на простых питательных средах;

Культуральные признаки: МПА – «голова медузы» или «львиная грива», МПБ – придонный рост в виде «комка ваты», Желатин – «перевернутая елочка»

Признаки дифференциации B.anthracis от антракоидов:

Признаки	B.anthracis	Антракоиды
Подвижность	-	+
Наличие капсулы	+	-
Гемолиз	-	+
Разжижение желатина	+	-
Рост на среде с пенициллином	-	+
Лизис сибиреязвенным фагом	+	-
Патогенность для белых мышей	+	-

Постановка реакции Асколи: Тип реакции реакция преципитации

Исследуемый материал: термоэкстракт из кожи, шерсти, мяса животных, почвы, выделеннойя культуры

Диагностический препарат преципитирующая сибиреязвеннаяю сыворотка, содержащая антитела

Результат в положительном случае образуется преципитационное кольцо

ДЕМОНСТРАЦИИ

Бруцеллезный диагностикум, бруцеллин, бруцеллезная лечебная вакцина; туляремийная вакцина, туляремийный диагностикум, тулярин, агглютинирующая О-холерная и флюоресцирующая сыворотка, холерный бактериофаг, гретая холерная вакцина, холероген-анатоксин; вакцина СТИ, люминесцирующая сибиреязвенная сыворотка, антраксин.