ЗАНЯТИЕ № 10
ТЕМА: МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ СИСТЕМЫ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ МАКРООРГАНИЗМА. АНТИГЕНЫ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
-
Факторы и механизмы неспецифической резистентности. Барьерные и противомикробные свойства кожи, слизистых оболочек, лимфатических узлов, ареактивность тканей, нормальная микрофлора.
-
Гуморальные факторы неспецифической защиты: эндогенные пептиды-антибиотики, пропердин, лизоцим, b-лизины, фибронектин, белки острой фазы воспаления.
-
Интерфероны. Группы интерферонов по продуцентам, типы ИФН по способу образования. Механизм действия интерферонов
-
Система комплемента. Структура. Пути активации (классический, альтернативный). Активаторы системы комплемента. Ингибиторы и инактиваторы комплементарного каскада. Биологические функции активированных компанентов комплемента. Биологически активные фрагменты, их функции. Анафилатоксины, их биологическая роль. Мембраноатакующий комплекс. Методы определения активности системы комплемента.
-
Полиморфноядерные и мононуклеарные фагоциты (происхождение, характеристика, функции). Фагоцитарная реакция (фазы, механизмы и факторы внутриклеточной бактерицидности). Исходы фагоцитоза.
-
Показатели фагоцитоза и методы их определения.–
-
Естественные киллеры. Механизмы распознавания и цитолиза клетки-мишени.
-
Антигены: определение, принцип строения, свойства антигенов. Классификации антигенов. Групповые, видовые, вариантные, стадийные антигены. Перекрестные антигены. Антигенная мимикрия. Антигены бактерий. Антигенные свойства грибов.
ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА
1. Оценка бактерицидной активности кожи по Клемпарской
Принцип метода: На поверхность кожи предплечья наносится культура E. coli. Через определенные промежутки времени определяют количество жизнеспособных бактерий методом отпечатков. На основании полученных результатов рассчитывается индекс бактерицидности (ИБ) по формуле:
КО-К20
ИБ = ------- х 100, где
КО
КО - количество колоний сразу после контаминации кожи;
К20 - количество колоний через 20 минут.
В норме ИБ более 95%
Время, мин |
0* |
5* |
10* |
15* |
20* |
Количество колоний |
43 |
32 |
28 |
7 |
2 |
ИБ = 95,3%
Вывод: бактерицидная активность кожи сохранена
2. Определение активности комплемента в реакции иммунного гемолиза.
Название реакции: Реакция иммунного гемолиза
Ингредиенты реакции:
Исследуемый материал: сыворотка крови обследуемого (содержит комплемент)
Диагностические препараты: Гемолитическая сыворотка (инактивированная нагреванием 56°С сыворотка крови кролика, иммунизированного бараньими эритроцитами), стандартная 5% взвесь эритроцитов барана, физиологический раствор
Разведения сыворотки |
1/10 |
1/15 |
1/20 |
1/25 |
1/30 |
1/35 |
1/40 |
1/45 |
1/50 |
1/55 |
КГС |
КЭ |
Гемолиз +/- |
Гем+ |
Гем+ |
Гем+ |
Гем+ |
Гем+ |
Гем+ |
Гем+ |
Гем- |
Гем- |
Гем- |
Гем- |
Гем- |
Вывод: Сыворотка крови обследуемого содержит комплемент с титром активности 1/45
3. Определение активности лизоцима.
Титр лизоцима - это максимальное разведение исследуемого материала, в котором еще проявляется литическая активность лизоцима по отношению к эталонному штамму микроорганизмов (Micrococcus lysodeicticus).
Ингредиенты реакции:
Исследуемый материал: сыворотка крови обследуемого
Тест-объект: Чистая суточная культура Micrococcus lysodeiticus
Разведения сыворотки |
1/2 |
1/4 |
1/8 |
1/16 |
1/32 |
1/64 |
КК |
КС |
Лизис +/- |
Нет осадка Лизис + |
Нет осадка Лизис + |
Нет осадка Лизис + |
осадок Лизис - |
осадок Лизис - |
осадок Лизис - |
осадок Лизис - |
Нет осадка |
Вывод: Титр ативности лизоцима 1/8.
4. Оценка фагоцитоза.
►Определение процента активных фагоцитов (ФЧ) и фагоцитарного индекса (ФИ)
Процент активных фагоцитов - это количество клеток, обладающих фагоцитарной активностью. В норме - не менее 50%. Фагоцитарный индекс - среднее количество микробов, поглощенных одним фагоцитом (подсчитывают 25 или 50 фагоцитов в разных полях зрения). В норме - 4-6.
Принцип метода: В цитратную кровь вносят культуру стафилококка инкубируют в термостате 30 минут. Затем готовят мазки, окрашивают их по Романовскому-Гимзе, микроскопируют и рассчитывают показатели.
Результат исследования: В поле зрения 25 фагоцитов, 14 захватили стафилококки, фагоцитарная активность: 14 х 100/ 25 = 56%, фагоцитарный индекс : 14 х 4/ 14 = 4
Вывод: Фагоцитарная активность крови обследуемого по активности фагоцитов и фагоцитарному индексу сохранена
►Оценка завершенности фагоцитоза.
где КО - количество колоний сразу после внесения культуры; К120 - количество колоний через 120 мин. инкубации в термостате. |
ЗФ = ------- х 100,
КО
В норме завершенность фагоцитоза - 50-99%.
Результат: Количество колоний в первом высеве 25; количество колоний во втором высеве 12; завершенность фагоцитоза: 25-12=13 х 100/ 25 = 52 %
Вывод: Фагоцитарная активность крови обследуемого по завершенности фагоцитоза сохранена
(соотвествует норме).
|
|
Зарисовать демонстрационный препарат незавершенный фагоцитоз N. gonorrhoeae Окраска Граму Увеличение : x630 |
Схема иммунный фагоцитоз (нарисовать): 1. опсонины; 2. антитела; 3. комплемент; 4. Fc-рецепторы;5. бактерия 6. макрофаг |