Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

Микра / Занятия / 10. Методы изучения резистентности. Антигены

.doc
Скачиваний:
395
Добавлен:
13.02.2016
Размер:
1.18 Mб
Скачать

ЗАНЯТИЕ № 10

ТЕМА: МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ СИСТЕМЫ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ МАКРООРГАНИЗМА. АНТИГЕНЫ.

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

  1. Факторы и механизмы неспецифической резистентности. Барьерные и противомикробные свойства кожи, слизистых оболочек, лимфатических узлов, ареактивность тканей, нормальная микрофлора.

  2. Гуморальные факторы неспецифической защиты: эндогенные пептиды-антибиотики, пропердин, лизоцим, b-лизины, фибронектин, белки острой фазы воспаления.

  3. Интерфероны. Группы интерферонов по продуцентам, типы ИФН по способу образования. Механизм действия интерферонов

  4. Система комплемента. Структура. Пути активации (классический, альтернативный). Активаторы системы комплемента. Ингибиторы и инактиваторы комплементарного каскада. Биологические функции активированных компанентов комплемента. Биологически активные фрагменты, их функции. Анафилатоксины, их биологическая роль. Мембраноатакующий комплекс. Методы определения активности системы комплемента.

  5. Полиморфноядерные и мононуклеарные фагоциты (происхождение, характеристика, функции). Фагоцитарная реакция (фазы, механизмы и факторы внутриклеточной бактерицидности). Исходы фагоцитоза.

  6. Показатели фагоцитоза и методы их определения.–

  7. Естественные киллеры. Механизмы распознавания и цитолиза клетки-мишени.

  8. Антигены: определение, принцип строения, свойства антигенов. Классификации антигенов. Групповые, видовые, вариантные, стадийные антигены. Перекрестные антигены. Антигенная мимикрия. Антигены бактерий. Антигенные свойства грибов.

ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

1. Оценка бактерицидной активности кожи по Клемпарской

Принцип метода: На поверхность кожи предплечья наносится культура E. coli. Через определенные промежутки времени определяют количество жизнеспособных бактерий методом отпечатков. На основании полученных результатов рассчитывается индекс бактерицидности (ИБ) по формуле:

КО20

ИБ = ------- х 100, где

КО

КО - количество колоний сразу после контаминации кожи;

К20 - количество колоний через 20 минут.

В норме ИБ более 95%

Время, мин

0*

5*

10*

15*

20*

Количество колоний

43

32

28

7

2

ИБ = 95,3%

Вывод: бактерицидная активность кожи сохранена

2. Определение активности комплемента в реакции иммунного гемолиза.

Название реакции: Реакция иммунного гемолиза

Ингредиенты реакции:

Исследуемый материал: сыворотка крови обследуемого (содержит комплемент)

Диагностические препараты: Гемолитическая сыворотка (инактивированная нагреванием 56°С сыворотка крови кролика, иммунизированного бараньими эритроцитами), стандартная 5% взвесь эритроцитов барана, физиологический раствор

Разведения

сыворотки

1/10

1/15

1/20

1/25

1/30

1/35

1/40

1/45

1/50

1/55

КГС

КЭ

Гемолиз +/-

Гем+

Гем+

Гем+

Гем+

Гем+

Гем+

Гем+

Гем-

Гем-

Гем-

Гем-

Гем-

Вывод: Сыворотка крови обследуемого содержит комплемент с титром активности 1/45

3. Определение активности лизоцима.

Титр лизоцима - это максимальное разведение исследуемого материала, в котором еще проявляется литическая активность лизоцима по отношению к эталонному штамму микроорганизмов (Micrococcus lysodeicticus).

Ингредиенты реакции:

Исследуемый материал: сыворотка крови обследуемого

Тест-объект: Чистая суточная культура Micrococcus lysodeiticus

Разведения

сыворотки

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

1/64

КК

КС

Лизис +/-

Нет осадка Лизис +

Нет осадка Лизис +

Нет осадка Лизис +

осадок Лизис -

осадок Лизис -

осадок Лизис -

осадок Лизис -

Нет осадка

Вывод: Титр ативности лизоцима 1/8.

4. Оценка фагоцитоза.

Определение процента активных фагоцитов (ФЧ) и фагоцитарного индекса (ФИ)

Процент активных фагоцитов - это количество клеток, обладающих фагоцитарной активностью. В норме - не менее 50%. Фагоцитарный индекс - среднее количество микробов, поглощенных одним фагоцитом (подсчитывают 25 или 50 фагоцитов в разных полях зрения). В норме - 4-6.

Принцип метода: В цитратную кровь вносят культуру стафилококка инкубируют в термостате 30 минут. Затем готовят мазки, окрашивают их по Романовскому-Гимзе, микроскопируют и рассчитывают показатели.

Результат исследования: В поле зрения 25 фагоцитов, 14 захватили стафилококки, фагоцитарная активность: 14 х 100/ 25 = 56%, фагоцитарный индекс : 14 х 4/ 14 = 4

Вывод: Фагоцитарная активность крови обследуемого по активности фагоцитов и фагоцитарному индексу сохранена

Оценка завершенности фагоцитоза.

где КО - количество колоний сразу после внесения культуры;

К120 - количество колоний через 120 мин. инкубации в термостате.

Принцип метода: В цитратную кровь вносят культуру кишечной палочки и делают высев на питательную среду. После 120 минутной инкубации в термостате высев повторяют и инкубируют оба посева в термостате. Через сутки проводят подсчет колоний и рассчитывают процент завершенности фагоцитоза (ЗФ) по формуле: КО120

ЗФ = ------- х 100,

КО

В норме завершенность фагоцитоза - 50-99%.

Результат: Количество колоний в первом высеве 25; количество колоний во втором высеве 12; завершенность фагоцитоза: 25-12=13 х 100/ 25 = 52 %

Вывод: Фагоцитарная активность крови обследуемого по завершенности фагоцитоза сохранена

(соотвествует норме).

Зарисовать демонстрационный препарат незавершенный фагоцитоз N. gonorrhoeae Окраска Граму Увеличение : x630

Схема иммунный фагоцитоз (нарисовать): 1. опсонины;

2. антитела; 3. комплемент; 4. Fc-рецепторы;5. бактерия

6. макрофаг

10