4.5. Санитарная микробиология

Санитарная микробиология — раздел меди­цинской микробиологии, изучающий мик­роорганизмы, содержащиеся в окружающей среде и способные оказывать неблагоприят­ное воздействие на состояние здоровья чело­века. Она разрабатывает микробиологические показатели гигиенического нормирования,

методы контроля за эффективностью обез- зараживания объектов окружающей среды, а также выявляет в объектах окружающей сре­ ды патогенные, условно-патогенные и сани- тарно-показательные микроорганизмы.

Обнаружение патогенных микроорганизмов позволяет дать оценку эпидемиологической

ситуации и принять соответствующие меры по борьбе и профилактике инфекционных заболеваний.

Условно-патогенные микроорганизмы спо­собны вызывать гнойно-воспалительные про­цессы в ослабленном организме. Кроме того, они могут попадать в продукты питания, быс­тро размножаться с накоплением большого количества микробных клеток и их токсинов, вызывая у людей пищевые отравления микро­бной этиологии.

Санитарно-показательные микроорганизмы используют в основном для косвенного опре­деления возможного присутствия в объектах окружающей среды патогенных микроорга­низмов. Их наличие свидетельствует о загряз­нении объекта выделениями человека и жи­вотных, так как они постоянно обитают в тех же органах, что и возбудители заболеваний, и имеют общий путь выделения в окружаю­щую среду. Например, возбудители кишечных инфекций имеют общий путь выделения (с фекалиями) с такими санитарно-показатель-ными бактериями, как бактерии группы ки­шечной палочки — БГКП (в эту группу, кроме кишечной палочки, входят сходные по свойс­твам бактерии родов Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella), энтерококки, клостридии перф-рингенс. Возбудители воздушно-капельных инфекций имеют общий путь выделения с бактериями (кокками), постоянно обитаю­щими на слизистой оболочке верхних дыха­тельных путей, выделяющимися в окружаю­щую среду (при кашле, чиханье, разговоре), поэтому в качестве санитарно-показательных бактерий для воздуха закрытых помещений предложены гемолитические стрептококки и золотистые стафилококки. Санитарно-пока-зательные микроорганизмы должны отвечать следующим основным требованиям:

• должны обитать только в организме лю­дей или животных и постоянно обнаружи­ваться в их выделениях;

• не должны размножаться или обитать в почве и воде;

• сроки их выживания и устойчивость к различным факторам после выделения из ор­ганизма в окружающую среду должны быть равными или превышать таковые у патоген­ных микробов;

• их свойства должны быть типичными и легко выявляемыми для их дифференциации;

• методы их обнаружения и идентифика­ции должны быть простыми, методически и экономически доступными;

• должны встречаться в окружающей среде в значительно больших количествах, чем па­тогенные микроорганизмы;

• в окружающей среде не должно быть близ­ко сходных обитателей — микроорганизмов.

Кроме определения патогенных, условно-патогенных и санитарно-показательных мик­роорганизмов, в практике санитарно-мик-робиологических исследований используется определение общего микробного числа, т. е. общего количества микроорганизмов в опре­деленном объеме или определенной массе ис­следуемого материала (вода, почва, продукты питания, лекарственная форма и др.).

4.5.1. Микробиологический контроль почвы, воды, предметов обихода

Загрязненность почвы, воды, воздуха и дру­гих объектов определяется по общей микро­бной обсемененности и обнаружению сани­тарно-показательных микроорганизмов — ин­дикаторов наличия выделений человека или животных. В воде регистрируют кишечную палочку, БГКП (колиформные палочки), энте­рококк, стафилококки; в почве — кишечную палочку, БГКП (колиформные палочки), клост-ридии перфрингенс, термофилы; на предметах обихода — БГКП (колиформные палочки), золо­тистый стафилококк, энтерококк.

На основании количественного выявле­ния этих санитарно-показательных бак­терий вычисляются индекс БГКП (число БГКП в 1 л воды), перфрингенс-титр, титр энтерококка и г. д. Так. например, пир энтерококка воды— это наименьшее ко­личество воды, в котором определяется энтерококк.

К бактериям группы кишечной палочки относят грамотрицательные палочки, сбра­живающие с образованием кислоты и газа лактозу или глюкозу при температуре 37°С в течение 24—48 ч и не обладающие оксидазной активностью. Наиболее часто этот показатель

применяют как индикатор фекального за­грязнения воды. Другой сходный показатель фекального загрязнения — общие колифор­мные бактерии: грамотрицательные, оксида-заотрицательные палочки, ферментирующие лактозу или маннит (глюкозу) с образованием альдегида, кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 часов. Вместо последнего термина предлагается использовать термин «бактерии семейства Enterobacteriaceae», так как все бактерии этого семейства имеют ин­дикаторное значение. К бактериям семейства Enterobacteriaceae относятся грамотрицатель­ные, оксидазаотрицательные палочки, расту­щие на лактозосодержащих средах типа среды Эндо и ферментирующие глюкозу до кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 ча­сов; колиформные бактерии (палочки).

При бактериальном загрязнении воды свыше допустимых норм следует провести дополни­тельное исследование на наличие бактерий — показателей свежего фекального загрязнения. К таким бактериям относят термотолерантные колиформные бактерии, фекальные кишечные палочки, ферментирующие лактозу до кислоты и газа при температуре 44 °С в течение 24 часов и не растущие на цитратной среде. О свежем фекальном загрязнении свидетельствует также выявление энтерококка. На давнее фекальное загрязнение указывают отсутствие БГКП и на­личие определенного количества клостридии перфрингенс, т. е. наиболее устойчивых споро-образующих бактерий.

В соответствии с нормативными докумен­тами регламентируются следующие нормати­вы микробиологических показателей питьевой воды при централизованном водоснабжении:

1. Общее микробное число воды не должно пре­вышать 100 микробов в 1 мл исследуемой воды;

2. Общие колиформные бактерии должны от­сутствовать в 100 мл исследуемой воды;

3. Термотолерантные колиформные бактерии должны отсутстовать в 100 мл исследуемой воды;

4. Колифаги не должны определяться в 100 мл исследуемой воды (учет по бляшкооб-разующим единицам);

5. Споры сульфитредуцирующих клостридии не должны определяться в 20 мл исследуемой воды;

6. Цисты лямблий не должны определяться в 50 мл исследуемой воды.

Кроме того, загрязненность воды оценива­ется по обнаружению патогенных микробов с фекально-оральным механизмом переда­чи (энтеровирусы, энтеробактерии, холерные вибрионы и др.).

Оценка фекального загрязнения почвы и его давности проводится по индексу БГКП (количество БГКП в 1 г почвы), перфрин-генс-титру (наименьшее количество почвы, в котором обнаруживается Clostridium реr-fringens), а иногда и по титру энтерококков. Параллельно определяется микробное число почвы. Загрязненность почвы навозом и ком­постом оценивается по титру термофилов — бактерий, вырастающих на мясо — пептон-ном агаре при 60 °С в течение 24 часов.

Существуют следующие критерии оценки степени загрязнения почвы:

1. Титр БГКП и перфрингенс-титр для сильно загрязненных почв — соответственно 0,009 и ни­же, 0,00009 и ниже; для чистых почв — коли-титр 1,0 и выше, перфрингенс-титр — 0,01 и выше.

2. Количество термофилов (на 1 г почвы; культивирование при температуре 60°С): в чистых почвах — 100-1000, в загрязнен­ных— 1000—10 000, а в сильно загрязнен­ных— 100 000-400 000 колониеобразующих единиц (КОЕ).

Санитарный надзор за состоянием объектов общественного питания, аптек, лечебных и детских учреждений осуществляется исследо­ванием смывов с рук персонала, посуды, по­верхности столов, оборудования и др. Смыв высевают на различные питательные среды для определения микробной обсемененности, наличия БГКП, патогенных энтеробактерий, золотистого стафилококка, энтерококка, гри­бов рода Candida. Отдельно можно выявлять энтеровирусы.

4.5.2. Микробиологический контроль воздуха

Микробиологический контроль возду-\а проводится с помощью методов естест­венной или принудительной седиментации лкробов. Естественная седиментация (по методу Коха) проводится в течение 5—10 мин путем осаждения микробов на поверхность твердой питательной среды в чашке Петри. Принудительная седиментация микробов

осуществляется путем «посева» проб воздуха на питательные среды с помощью специаль­ных приборов (импакторов, импинджеров, фильтров). Импакторы — приборы для при­нудительного осаждения микробов из воздуха на поверхность питательной среды (прибор Кротова, пробоотборник аэрозоля бактерио­логический и др.). Импинджеры — приборы, с помощью которых воздух проходит через жидкую питательную среду или изотоничес­кий раствор хлорида натрия.

Санитарно-гигиеническое состояние воз­духа определяется по следующим микробио­логическим показателям:

1. Общее количество микроорганизмов в 1 м³ воздуха (так называемое общее микробное число, или обсемененность воздуха) — коли­чество колоний микроорганизмов, выросших при посеве воздуха на питательном агаре в чашке Петри в течение 24 ч при 37 °С, выра­женное в КОЕ;

2. Индекс санитарно-показательных микро­бов— количество золотистого стафилококка и гемолитических стрептококков в 1 м³ воздуха. Эти бактерии являются представителями мик­рофлоры верхних дыхательных путей и имеют общий путь выделения с патогенными микроор­ганизмами, передающимися воздушно-капель­ным путем. Появление в воздухе спорообразу-ющих бактерий — показатель загрязненности воздуха микроорганизмами почвы, а появление грамотрицательных бактерий — показатель воз­можного антисанитарного состояния.

Для оценки воздуха лечебных учреждений мож­но использовать данные из официально рекомен­дованных нормативных документов (табл. 4.2).

4.5.3. Микробиологический контроль продуктов питания

Санитарно-микробиологическое исследо­вание продуктов питания проводится в пла­новом порядке и по эпидемиологическим показаниям. В плановом порядке проводятся исследования по следующим показателям:

1. Общее микробное число (обсеменение). Определяют МАФАМ — мезофилъные и фа­культативно анаэробные микроорганизмы, вы­росшие в виде видимых колоний на плотной питательной среде после инкубации при 37°С в течение 24 ч.

Таблица 4.2. Допустимые уровни бактериальной обсемененности воздуха в некоторых отделениях стационаров
Место отбора проб	Условия работы	Общее количество КОБ в 1 м3 воздуха	Количество золо­тистого стафи­лококка в 1 м^3 воздуха	Количество грамот-рицательных бакте­рий в 1 м^3 воздуха
Операционные (обес­печенные 10— 20-крат­ным и более воздухо­обменом)	Подготовленные к работе	Не более 100	Не должно быть
Реанимационные от­деления (палаты)		Не более 1000	Не более 4	Не должно быть
Процедурная	До начала работы	Не более 50	Не должно быть
	Во время работы	Не более 2000	Не более 1—2

2. Обнаружение санитарно-показательных бактерий в продуктах питания — кишечной па­лочки, БГКП, энтерококка, золотистого ста­филококка, бактерий группы протея, клостри-дий (сульфит-восстановителей).

3. Обнаружение сальмонелл, например, при исследовании продуктов из мяса (наряду с другими показателями).

По эпидемиологическим показаниям продукты исследуют на наличие патогенных и условно-патогенных микроорганизмов — возбудителей пищевых отравлений микробной этиологии.

Общее микробное обсеменение не опреде­ляют в кисломолочных продуктах — твороге, сметане, кефире и других, содержащих спе­цифическую микрофлору (молочнокислые стрептококки, лактобактерии и др.). В этих продуктах исследуют молочнокислую микро­флору бактериоскопическим изучением маз­ков из них, окрашенных метиленовым синим. Отсутствие характерной молочнокислой мик­рофлоры и наличие посторонней микрофло­ры (плесневые грибы, дрожжи и др.) указыва­ют на неудовлетворительное приготовление, нарушение технологии или неправильное хранение продуктов. Исключение составляют кефир, кумыс, в которых при микроскопичес­ком исследовании обязательно выявляются в поле зрения 2-5 дрожжевых клеток, пос­кольку эти продукты есть результат комби-

нированного брожения — молочнокислого и спиртового.

Некоторые ориентировочные микробиоло­гические показатели приведены в табл. 4.3.

Консервированные продукты питания не должны содержать кишечную палочку, про­тей и патогенные микробы. При исследова­нии таких пищевых продуктов, как консервы овощные, рыбные, мясные, предусмотрено:

1. Обнаружение аэробных микроорганизмов.

2. Обнаружение анаэробных микроорганизмов.

3. Определение ботулинических экзотоксинов.

4.5.4. Микробиологический контроль лекарственных средств

Обсеменение лекарственного сырья возмож­но на всех этапах его заготовки и при хра­нении. Активному размножению микроорга­низмов способствует увлажнение растений и растительного сырья. Размножившиеся мик­роорганизмы вызывают изменение фармако­логических свойств препаратов, полученных из лекарственных растений. Микроорганизмы могут также попадать из окружающей среды, от людей и обсеменять лекарственные препараты в процессе их изготовления из растительного сырья. Для соблюдения санитарного режима изготовления лекарственных препаратов про­водят санитарно-микробиологический конт­роль объектов окружающей среды предприятия

Таблица 4. 3. Ориентировочные микробиологические показатели некоторы:
Продукт	Общее микробное число	Наличие БГКП (коли-титр)
Молоко, сливки, пахта	75 000-150000	Не менее 3
Сухое молоко	Не более 2500	Не допускается
Кефир	Не исследуется	Не менее 0,3
Полуфабрикаты из рубленого мяса (кот­леты шницели и яр.)	Не более 1000	Не допускается
Жареная и печеная рыба	Не более 1000	Не должны быть в 10 г продукта

и каждой серии выпускаемой лекарственной формы. Лекарственные средства для паренте­рального введения в виде инъекций, глазные капли, мази, пленки и др., в отношении кото­рых имеются соответствующие указания в нор­мативно-технической документации, должны быть стерильными. Контроль стерильности ле­карственных средств проводят путем посева на тиогликолевую среду для выявления различных бактерий, в том числе анаэробов; при посеве на среду Сабуро выявляют грибы, главным обра­зом рода Candida. Стерильность лекарственных средств с антимикробным действием определя­ют путем мембранной фильтрации: фильтр пос-лe фильтрации исследуемого препарата делят на части и вносят для подращивания задержанных микроорганизмов в жидкие питательные сре­ды. При отсутствии роста препарат считается стерильным.

Лекарственные средства, не требующие стерилизации, обычно содержат микроорга­низмы. Поэтому их испытывают на микро­биологическую чистоту: проводят количес­твенное определение жизнеспособных бак-терий и грибов в 1 г или 1 мл препарата, а

также выявляют микроорганизмы (бактерии семейства энтеробактерий, синегнойная па­лочка, золотистый стафилококк), которые не должны присутствовать в нестерильных ле­карственных средствах. В 1 г или 1 мл лекарс­твенного сырья для приема внутрь должно быть не более 1000 бактерий и 100 дрожжевых и плесневых грибов; должны отсутствовать кишечные палочки и сальмонеллы. В случаях местного применения (полость уха, носа, ин-травагинальное использование) количество микроорганизмов не должно превышать 100 (суммарно) микробных клеток на 1 г или 1 мл препарата при отсутствии энтеробактерий, синегнойной палочки и золотистого стафи­лококка. В таблетированных препаратах не должно быть патогенной микрофлоры, а об­щая обсемененность не должна превышать 10 тыс. микробных клеток на таблетку. Средства гигиены полости рта, зубные пасты и элек-сиры, жевательные резинки не должны со­держать синегнойную палочку, бактерии се­мейства Enterobactericeae, плесневые грибы и грибы рода Candida; микробное число должно быть не более 100 КОЕ/г.