8.12. Новокаин и новокаинамид.
К производным пара-аминобензойной кислоты, имеющим токсикологическое значение, относятся новокаин (прокаин), дикаин, новокаинамид и др.
Никотин является местноанестезирующим препаратом, понижает возбудимость периферических холинореактивных систем, уменьшает спазмы гладкой мускулатуры.
Новокаинамид по химическому строению близок к новокаину, хотя по фармакологическим свойствам он применяется как антиаритмическое средство – способен понижать возбудимость и проводимость сердечной мышцы.
Новокаин и новокаинамид растворяются в воде и этаноле, не растворяются в эфире и хлороформе. Обладают основными свойствами (рКвн+=9 для новокаина и 9,24 - для новокаинамида). Имеют характерные интенсивные полосы поглощения в УФ- спектрах, формы спектров изменяются в зависимости от рН.
Изолирование из тканей трупов проводится подкисленной водой, экстракция – хлороформом из щелочных растворов.
Анализ экстрактов проводится методом ТСХ-скрининга в общих и частных системах растворителей. Для качественного обнаружения применяют реакции осаждения (реактив Драгендорфа, раствор бромида золота), окрашивания (образование азокрасителя с бета-нафтолом, оранжево-желтое окрашивание по реакции Витали-Морена), также УФ- спектрофотометрию.
Количественное определение: УФ- спектрофотометрия, фотометрия по реакции образования азокрасителя.
Метаболизм.
Новокаин быстро гидролизуется до пара-аминобензойной кислоты и диэтиламиноэтанола, только 2% этого препарата выделяется с мочой в неизмененном виде. Около 90% дозы новокаина выводится с мочой в виде ПАБК (в свободной форме и в виде коньюгатов). В свободном виде выводится и 30% диэтиламиноэтанола.
Максимальная концентрация новокаинамида обнаруживается в плазме через 15 – 60 минут после орального введения. Основным метаболитом является фармакологически активный N-ацетилновокаинамид. Около 50% новокаинамида выводится с мочой в неизмененном виде, 2-10% метаболизирует до ПАБК. Обнаружены также N- деметилированные метаболиты. Период полувыведения новокаинамида – 3 – 5 часов.
Глава 9. . Тсх- скрининг лекарственных соединений
9.1. Общая схема обнаружения неизвестного яда.
Огромный круг лекарственных веществ, представляющий токсикологический интерес, и постоянное совершенствование методов их анализа привели к формированию процесса идентификации неизвестного лекарственного вещества, ставшего причиной отравления. Этот процесс состоит из 2-х этапов: предварительного, позволяющего выявить принадлежность яда к определенной группе химических соединений, и подтверждающего исследования, которое позволяет идентифицировать конкретное вещество.
Проведение предварительного отбора или «скрининга» может быть основано на использовании разнообразных химических или физико-химических методов. В качестве примера можно привести химический скрининг алкалоидов с общеалкалоидными реактивами. Более совершенным и широко используемым в настоящее время является скрининг исследуемых веществ на основе ТСХ. Он позволяет за минимальное время с достаточно высокой чувствительностью выявить из большого круга лекарственных соединений одно или несколько веществ, чтобы затем целенаправленно выбрать схему химико-токсикологического анализа.
Качественной характеристикой определяемого вещества на данном сорбенте и в данной системе растворителей является величина Rf (отношение расстояния, пройденного веществом, к расстоянию, пройденному растворителем). В соответствии с определением Rf всегда < 1. Величина Rf зависит от техники эксперимента, активности и природы сорбента, толщины слоя сорбента, температуры, качества и толщины слоя сорбента, температуры, качества и природы растворителя, детектирования и др. Отношение величины Rf определяемого вещества к величине Rf стандарта (метчика) обозначают Rst. Воспроизводимые значения Rf и Rst получаются при соблюдении всех методических указаний.
Пробы наносят мерным капилляром, микрошприцом или обычным капилляром на линию старта на расстоянии не менее 1 см от нижнего края пластинки. Диаметр пятна не должен превышать 2-3 мм. Пластины с нанесенной пробой помещают в хроматографическую камеру, при этом слой подвижной фазы должен быть ниже линии старта на 0,5 – 1 см. Расстояние между соседними пробами на стартовой линии должно быть не менее 1 см.
В методе ТСХ используют различные сорбенты (оксид алюминия, силикагель, целлюлоза и др.), нанесенные на пластину.
В качестве хроматографической камеры используют стандартные камеры или стеклянные емкости любой формы, имеющие герметические крышки. В хроматографическую камеру помещают органические растворители или их смеси (подвижная фаза) и насыщают камеру парами растворителя в течении 30 мин. В качестве метчиков (свидетелей) используют субстанции анализируемых («подозреваемых») веществ. Следует иметь в виду, что в случае использования в качестве метчиков лекарственных веществ, извлеченных из таблеток и других лекарственных форм, наблюдается не полное соответствие Rf метчика и определяемого вещества. Обнаружение (детектирование) определяемых веществ на хроматограмме проводят в УФ- свете и после обработки хроматографических пластин специальными реагентами. Пятна, обнаруженные на хроматограмме, копируют и измеряют расстояние от центра пятна до стартовой линии, рассчитывают Rf.
При анализе биологических объектов обязательно проведение холостого и контрольного хроматографического разделения, чтобы выявить влияние фона.
Система ТСХ - скрининга предусматривает поэтапное исследование токсикологически важных соединений: на первом этапе проводится скрининг в общих системах растворителей и, при положительном результате, исследование элюатов в частной системе растворителей.
Критерием выбора общих систем растворителей является разделение определяемых веществ на определенные группы, локализованные в хроматографические зоны.
В основу выбора частных систем растворителей положена высокая эффективность разделения исследуемых соединений, входящих в ту или иную хроматографическую зону.
Обнаружение веществ на хроматограмме осуществляется на основе использования (последовательного или параллельного) реагентов, избирательно реагирующих с лекарственными веществами, входящими в определенную химическую группу.
Метод имеет отрицательное судебно-химическое значение. При положительном результате проводят исследование, включающее: химические реакции, ГЖХ, фотометрию и УФ- спектрофотометрию, фармакологические пробы.
Таким образом, общую схему обнаружения неизвестного яда можно представить следующим образом.
ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
ТСХ в общих системах растворителей
(при положительном результате)
ТСХ в частных системах растворителей