Занятие № 10 Тема: бактериофаг. Фазы взаимодействия фага с бактериальной клеткой. Практическое применение явления бактериофагии.
Цель занятия: изучить строение и свойства вирулентных и умеренных бактериофагов, их взаимодействие с бактериальной клеткой, освоить качественные и количественные методы определения фагов.
Титрование бактериофага на жидких средах (метод Аппельмана).
В десять пробирок помещают по 4,5 МПБ. В первую вносят 0,5 мл фага (разведение 10-1), затем берут 0,5 мл и переносят во вторую (разведение 10-2) и т.д. до десятой пробирки (разведение 10-10). Далее в них вносят по 1 капле культуры кишечной палочки, помещают в термостат и через сутки проводят учет результатов. В пробирках, где оказался хотя бы один фаг, роста культуры не будет. Титр фага – то последнее разведение, в котором произошел лизис микроорганизмов (обозначается (10-4 и т.д.).
2.
Определение специфичности бактериофага (метод Отто).
Растопленный 3% мясо-пептонный агар разливают в стерильные чашки Петри. Охлажденные чашки Петри подсушивают в термостате в течение 10-15 мин. На поверхность питательной среды засевают «газоном» бульонную культуру бактерий, гомологичных искомому бактериофагу, наносят каплю известного фага или исследуемого фильтрата, чашку наклоняют и дают капле фага стечь по противоположному краю. Чашки инкубируют в термостате 16-18 часов и учитывают результат. Если фаг гомологичен микроорганизму и биологически активен, то по пути стекания капли роста микробов не будет, среда останется прозрачной.
Титрование бактериофага на жидких средах (метод Аппельмана).
-помещают по 4.5 мл МПБ
0.5-фага
10-110-210-310-410 -510-610-710-810-910-10
-вносят по 1 капле культуры кишечной палочки
Результат:
10-110-210-310-410 -510-610-710-810-910-10
Титр фага - 10 -5
Фаготипирование бактерий
Рис. 13. Структура фага
ЗАНЯТИЕ № 11
Тема: МИКРООРГАНИЗМЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ И САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИХ ОБНАРУЖЕНИЯ.
Цель занятия: изучить экологическую роль микробов в круговороте веществ в природе, оценить значение микрофлоры воздуха, воды и почвы в эпидемиологии инфекционных заболеваний, освоить методы загрязнения воды, воздуха, почвы.
Санитарно-показательные бактерии окружающей среды и пищевых продуктов
|
Объект |
Характер загрязнения |
Санитарно-показательные бактерии |
|
1 |
2 |
3 |
|
Вода |
Фекальное |
Бактерии группы кишечных палочек Escherichia coli, Citobacter freundii, Enterobacter aerogenes, Enterococcus faecalis |
|
Почва |
То же
Промышленно-бытовые (разлагающиеся отбросы) |
Те же бактерии и клостридии (Clostridium perfringens, Cl. sporogenes и др.) Термофильные бактерии, Proteus vulgaris |
|
Пищевые продукты |
Фекальное
Орально-капельное |
Бактерии группы кишечных палочек Е.faecalis,P.vulgaris Staphylococcus aureus |
|
Предметы обихода |
Фекальное
Орально-капельное |
Бактерии группы кишечных палочек Е.faecalis,P.vulgaris Staphylococcus aureus |
|
Воздух |
То же |
St.aureus, S.pyogenes |
|
Вода, почва, воздух |
Промышленное |
Производственные штаммы микробов |