Занятие № 14 Тема: учение об инфекций (продолжение). Факторы патогености микроорганизмов. Определение факторов па­тогенности.

Гиалуронидаза гидролизует гиалуроновую кис­лоту, которая перестает образовывать сгусток при добавлении уксусной кислоты. Для определения этого фермента в пробир­ку с субстратом (гиалуроновой кислотой) вносят суточную культуру бактерий или фильтрат бульонной культуры и инку­бируют в течение 15 мин при 37 ОС. Затем добавляют 2-3 капли концентрированной уксусной кислоты. В пробах, где содержится гиалуронидаза, не происходит образования сгустка.

Плазмокоагулаза выявляется при посеве испытуемой культуры в 0,4 мл стерильной цитратной плазмы крови. Посе­вы ингибируют при 37 ос в течение 2-5 ч. В случае выработки фермента происходит свертывание плазмы, а в контроле она остается жидкой.

Гемолизин определяют путем посева испытуемой куль­туры "бляшками" в чашки Петри с кровяным агаром. Чашки инкубируют в термостате при 37 ос в течение суток. В поло­жительном случае вокруг "бляшек" образуются прозрачные зоны гемолиза.

Определение титра гемолитической активности бактериального экзотоксина (О - стрептолизина). Из фильтрата бульонной культуры l3-гемолитического стрептокок­ка готовят ряд двукратных серийных разведений. К каждому из них добавляют равный объем 5 % взвеси отмытых эритро­цитов кролика. Смесь инкубируют в термостате при темпера­туре 37 ос в течение 1 ч. Параллельно инкубируют контроль­ную взвесь эритроцитов в питательном бульоне того же соста­ва. Учет результатов про изводят по наличию гемолиза (красная, прозрачная "лаковая" кровь) или отсутствию гемолиза (осадок эритроцитов). Определяют наибольшее разведение (титр) фильтрата бульонной культуры стрептококка, при кото­ром еще наблюдается гемолиз. В дальнейшем этим разведением пользуются при определении рабочей дозы О-стрептолизина для постановки антистрептолизиновой реакции.

Лецитиназа выявляется при посеве на агар с лецитином. Вокруг колоний бактерий, выделяющих фермент, образуется зона помутнения с перламутровым блеском.

Лецитиназная проба: для быстрого обнаружения и се­рологической идентификации а-токсина клостридий - возбу­дителей газовой гангрены- в раневом отделяемом определяют его лецитиназную активность в реакции нейтрализации анти­сыворотками против токсинов клостридий разных видов. С этой целью исследуемый материал (раневое отделяемое) помещают в проб ирки с раствором лецитина и добавляют антисыворотки. Присутствие лецитиназы в раневом отделяемом проявляется помутнением жидкости в пробирке. При нейтрализации лецитиназной активности токсина соот­ветствующей анти сывороткой жидкость остается прозрачной.

Гемолиз Определение токсигенности

Исследование трупов

животных

Опыт на плазмокоагулазу

«+» произошло свертывании плазмы «-» плазма не свернулась

Занятие № 15 Тема: Микробиологические и молекулярно-биологические основы химиотерапий инфекционных заболеваний. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков.

Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на МПА в чашке Петри, после чего на его поверхности пинцетом помещают на равном расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37⁰С в течение 24 ч. По диаметру зон задержки роста культуры судят об ее чувствительности к соответствующим антибиотикам.