- •Тетрадь
- •Занятие 1 Тема: микробиологическая лаборатория. Методы изучения микроорганизмов.
- •Формы бактерий
- •Этапы приготовления мазков-препаратов.
- •Демонстрационные препараты.
- •Занятие 2 Тема: структура бактериальной клетки и методы ее изучения.
- •Техника окраски по Граму.
- •Техника окраски спор по методу Ожешко.
- •Техника окраски по методу Циля-Нельсена.
- •Прижизненная (витальная) окраска.
- •Демонстрационные препараты.
- •Занятие № 4 Тема: систематика и классификация грибов и простейших. Общая характеристика и биология эукариотических микроорганизмов.
- •Занятие № 5 Тема: физиология микроорганизмов. Метаболизм и питание микробов. Питательные среды.
- •Этапы приготовления питательных сред
- •Исследуемый материал
- •Изучение выросших колоний
- •Занятие № 6 Тема: физиология микроорганизмов. Ферменты бактерий. Антимикробное действие физических факторов. Методы стерилизации.
- •Основные методы стерилизации
- •Ряд гисса (короткий)
- •Занятие № 7 Тема: дыхание микроорганизмов. Выделение чистой культуры анаэробов. Рост и размножение микробов. Дезинфекция.
- •Методы культивирования анаэробов. Физические методы
- •Химические методы
- •Биологические методы
- •Методы выделения чистой культуры
- •Формы изменчивости
- •Генетическая изменчивость, наследственная
- •Опыт коньюгации:
- •Демонстрационные препараты
- •Имеет ген резистентности к стрептомицину Опыта по выявлению Col-плазмид.
- •Занятие № 10 Тема: бактериофаг. Фазы взаимодействия фага с бактериальной клеткой. Практическое применение явления бактериофагии.
- •Титрование бактериофага на жидких средах (метод Аппельмана).
- •Определение специфичности бактериофага (метод Отто).
- •Титрование бактериофага на жидких средах (метод Аппельмана).
- •Седиментационный метод.
- •Определения микробного числа воды.
- •Метод мембранных фильтров.
- •Демонстрационный препарат
- •Метод титрования.
- •Санитарно-микробиологического состояния среды
- •Микробное число - 4
- •Возбудитель дифтерии
- •Определение коли-титра в молоке и других молочных продуктах (гост 9225-84)
- •Мазок микрофлоры рук
- •Занятие № 14 Тема: учение об инфекций (продолжение). Факторы патогености микроорганизмов. Определение факторов патогенности.
- •Занятие № 15 Тема: Микробиологические и молекулярно-биологические основы химиотерапий инфекционных заболеваний. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков.
- •Определение чувствительности бактерий к антимикробным препаратам методом серийных разведений.
- •Микротест - системы для определения чувствительности к антимикробным препаратам.
Техника окраски по методу Циля-Нельсена.
- нанести несколько капель карболового фуксина на фиксированный мазок, покрытый фильтровальной бумагой и подогреть до появления паров (3-5 мин);
- бумагу снять, мазок охладить и обесцветить 5% раствором серной кислоты и 3% раствором солянокислого спирта (2-4 с);
- тщательно промыть водой;
- окрасить синькой Леффлера (3-5 мин);
- промыть водой и высушить споры.
Кислотоустойчивые бактерии, в результате такой окраски становятся рубиново-красными, а все остальные – синими.
Техника обнаружения капсул по методу Бурри-Гинса.
- приготовить тушевой препарат по Бурри (смешать каплю взвеси микробов с каплей туши и при помощи стекла со шлифованным краем приготовить мазок, как мазок из крови), затем высушить и зафиксировать (налить на поверхность мазка 96% спирт и поджечь);
- окрасить препарат водным фуксином (1-2 мин);
- промыть препарат водой, высушить на воздухе и микроскопировать.
Бактерии окрашиваются в красный цвет, неокрашенные капсулы выявляются на черно-розовом фоне.
Прижизненная (витальная) окраска.
Взвесь микроорганизмов вносят в каплю 0,001% раствора метиленового синего или нейтрального красного. Затем готовят препарат «раздавленная» или «висячая» капля и микроскопируют его.
Техника метода «раздавленной капли».
- на середину предметного стекла нанести петлей каплю исследуемого материала, накрыть ее покровным стеклом;
- рассмотреть в микроскопе с темным полем зрения, с объективом х40.
Техника метода «висячей капли».
- каплю исследуемого материала нанести на середину покровного стекла;
- быстро повернуть его каплей вниз и наложить на предметное стекло с углублением («лункой») в середине, причем капля должна свисать в углубление, не соприкасаясь с дном и краями;
- промикроскопировать.
Строение бактериальной клентки
клеточная стенка
нуклеоид
Ц.П.М
мезосомы
рибосомы
цитоплазма
жгутик
пили
капсула
перегородка
Отличительные признаки грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов
№ |
Признак |
Грамположительные микробы |
Грамотрицательные микробы |
1 |
Представители прокариот |
1-шаровидные микробы; за исключением менингококков и гонококков; 2-дифтерийные палочки; 3-туберкулезные палочки; 4-спорообразующие палочки; 5-актиномицеты. |
1-гонококки, менингококки; 2-палочковидные микробы; 3-риккетсии; 4-спирохеты; 5-микоплазмы. |
2 |
Строение клеточной стенки (КС) |
Однослойная клеточная стенка, состоящая из 6-8 рядов пептидогликана+полисахарид+ тейхоевые кислоты |
Двухслойная клеточная стенка: внутренний слой – пептидогликан, наружный слой представлен комплексом липополисахаридов (ЛПС), фосфолипидов, белков и липопротеидов |
3 |
Строение цитоплазматической мембраны (ЦПМ) |
Не связана с КС, имеет многочисленные выросты в цитоплазму |
Тесно связана с КС, имеет незначительное число выростов в цитоплазму |
4 |
Особенности строения жгутикового аппарата |
Одна пара колец для закрепления жгутиков на уровне ЦПМ |
Две пары колец: одна расположена на уровне ЦПМ; вторая – на уровне КС |
5 |
Спорообразование |
да |
Нет |
6 |
Токсинообразование |
Образуют экзотоксины |
Образуют экзо- и эндотоксины (ЛПС) |
7 |
Основные антигены |
Тейхоевые кислоты |
Соматический О-антиген (ЛПС) |
8 |
Действие лизоцима |
(+) образуют протопласты |
(-), иногда (+), образуют сферопласты |
9 |
Действие пенициллина |
(+) |
(-), иногда (+) |