Биологические методы
1. Совместное выращивание анаэробов и аэробов (метод Фортнера). На одну половину чашки Петри засевают исследуемый материал, а на другую – культуру аэробного микроорганизма, способного энергично поглощать кислород. После посева чашку закрыть крышкой, края которой заливают парафином.
2. Помещение в питательную среду кусочков печени, головного мозга, почек и других внутренних органов. При этом тканевые клетки активно поглощают кислород, в результате в среде создаются анаэробные условия.
Для предотвращения попадания кислорода сосуды с питательными средами закрывают резиновыми пробками.
Методы выделения чистой культуры
1. Метод Цейсселера. Исследуемый материал засевают штрихами по поверхности плотной питательной среды, помещают в анаэробные условия и культивируют в термостате при 37°С в течение 24-72 ч. Изолированные колонии анаэробов пересевают в среду для контроля стерильности (СКС) или среду Китта-Тароцци.
2. Метод Вейнберга. Несколько капель исследуемого материала вносят в пробирку с 4-5 мл раствора хлористого натрия, перемешивают и переносят в пробирку с охлажденным до 45-50°С сахарным агаром, разлитым высоким столбиком. После перемешивания последовательно засевают еще в две пробирки с сахарным агаром и быстро охлаждают под струей холодной воды. Выросшие через 24-72 ч в глубине агара изолированные колонии анаэробов засевают в среду Китта-Тароцци.
3. Метод Перетуа. Готовят разведения исследуемого материала как указано выше. Содержимое пробирки с соответствующим разведением выливают в стерильную чашку Петри, на дне которой на двух стеклянных или деревянных палочках лежит стеклянная пластинка размером 6х6 см. Среду заливают таким образом, чтобы она заполнила пространство между пластинкой и дном чашки Петри. При появлении микробного роста стеклянную пластинку удаляют, а изолированные колонии засевают в пробирку со средой Китта-Тароцци для получения чистой культуры.
Схема выделения чистой культуры анаэробов
1 день
исследуемый материал
метод Цейсселера метод Вейнберга
среда Китта-Тароцци
2
-день
3-день
анаэробы
4
-день
чувстви- токсич-
тельность ность
Среды Гиса
5-день учет результатов
ЗАНЯТИЕ № 8
Тема: ГЕНЕТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ. ГЕНЕТИЧЕСКИЙ АППАРАТ БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ. ВИДЫ ИЗМЕНЧИВОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ.
Цель занятия: изучить фенотипическую и генотипическую изменчивость микроорганизмов, познакомиться с классификацией мутаций бактерий, оценить последствия изменчивости для бактериальных клеток.
Феномен строения Proteus mirabilis, на питательном агаре и на агаре с 1% сухой желчью в чашках Петри.
Выявление фенотипической изменчивости можно провести в опыте с феноменом строения у Proteus mirabilis. Сначала изучают колонии бактерий рода Proteus, выросшие на питательном агаре чашки Петри через 24 ч после посева разведенной культуры. Отмечают, что все колонии протея окружены зоной роения. Пересевают все колонии петлей на поверхность агара с сухой 1% желчью в чашках Петри и инкубируют при 370С 18-24 ч. Все колонии протея, выросшие на питательном агаре с желчью, не имеют зон роения. Вновь пересевают каждую колонию в чашку Петри с питательным агаром и инкубируют при 370С 18-24 ч. Наблюдают, что все колонии, выросшие на питательном агаре, окружены зоной строения.