микробиология шпоры / билет 25

1. Нормальная микрофлора животного организма. Понятие о дисбактериозе и методы его коррекции.

Нормальная микрофлора человека – это совокупность множества микробиоценозов, характеризующихся определенными взаимосвязями и местом обитания.

В организме человека в соответствии с условиями обитания формируются биотопы с определенными микробиоценозами. Любой микробиоценоз – это сообщество микроорганизмов, существующее как единое целое, связанное цепями питания и микроэкологией.

Виды нормальной микрофлоры:

1) резидентная – постоянная, характерная для данного вида;

2) транзиторная – временно попавшая, нехарактерная для данного биотопа; она активно не размножается.

Нормальная микрофлора формируется с рождения. На ее формирование оказывают влияние микрофлора матери и внутрибольничной среды, характер вскармливания.

Факторы, влияющие на состояние нормальной микрофлоры.

1. Эндогенные:

1) секреторная функция организма;

2) гормональный фон;

3) кислотно-основное состояние.

2. Экзогенные условия жизни (климатические, бытовые, экологические).

Микробное обсеменение характерно для всех систем, имеющих контакты с окружающей средой. В организме человека стерильными являются кровь, ликвор, суставная жидкость, плевральная жидкость, лимфа грудного протока, внутренние органы: сердце, мозг, паренхима печени, почек, селезенки, матка, мочевой пузырь, альвеолы легких.

Нормальная микрофлора выстилает слизистые оболочки в виде биопленки. Этот полисахаридный каркас состоит из полисахаридов микробных клеток и муцина. В нем находятся микроколонии клеток нормальной микрофлоры. Толщина биопленки – 0,1–0,5 мм. В ней содержится от нескольких сотен до нескольких тысяч микроколоний.

Формирование биопленки для бактерий создает дополнительную защиту. Внутри биопленки бактерии более устойчивы к действию химических и физических факторов.

Этапы формирования нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта (ЖКТ):

1) случайное обсеменение слизистой. В ЖКТ попадают лактобациллы, клостридии, бифидобактерии, микрококки, стафилококки, энтерококки, кишечная палочка и др.;

2) формирование сети из ленточных бактерий на поверхности ворсинок. На ней фиксируются в основном палочковидные бактерии, постоянно идет процесс формирования биопленки.

Нормальная микрофлора рассматривается как самостоятельный экстракорпоральный орган с определенной анатомической структурой и функциями.

Функции нормальной микрофлоры:

1) участвие во всех видах обмена;

2) детоксикация в отношении экзо– и эндопродуктов, трансформация и выделение лекарственных веществ;

3) участие в синтезе витаминов (группы В, Е, Н, К);

4) защита:

а) антагонистическая (связана с продукцией бактериоцинов);

б) колонизационная резистентность слизистых оболочек;

5) иммуногенная функция.

Наибольшей обсемененностью характеризуются:

1) толстый кишечник;

2) ротовая полость;

3) мочевыделительная система;

4) верхние дыхательные пути;

5) кожа.

Дисбактериоз (дисбиоз) – это любые количественные или качественные изменения типичной для данного биотопа нормальной микрофлоры человека, возникающие в результате воздействия на макро– или микроорганизм различных неблагоприятных факторов.

Микробиологическими показателями дисбиоза служат:

1) снижение численности одного или нескольких постоянных видов;

2) потеря бактериями тех или иных признаков или приобретение новых;

3) повышение численности транзиторных видов;

4) появление новых, несвойственных данному биотопу видов;

5) ослабление антагонистической активности нормальной микрофлоры.

Причинами развития дисбактериоза могут быть:

1) антибиотико– и химиотерапия;

2) тяжелые инфекции;

3) тяжелые соматические заболевания;

4) гормонотерапия;

5) лучевые воздействия;

6) токсические факторы;

7) дефицит витаминов.

Дисбактериоз различных биотопов имеет различные клинические проявления. Дисбактериоз кишечника может проявляться в виде диареи, неспецифического колита, дуоденита, гастроэнтерита, хронических запоров. Дисбактериоз органов дыхания протекает в форме бронхитов, бронхиолитов, хронических заболеваний легких. Основными проявлениями дисбиоза ротовой полости являются гингивиты, стоматит, кариес. Дисбактериоз половой системы у женщин протекает как вагиноз.

В зависимости от выраженности этих проявлений различают несколько фаз дисбактериоза:

1) компенсированную, когда дисбактериоз не сопровождается какими-либо клиническими проявлениями;

2) субкомпенсированную, когда в результате дисбаланса нормальной микрофлоры возникают локальные воспалительные изменения;

3) декомпенсированную, при которой происходит генерализация процесса с возникновением метастатических воспалительных очагов.

Лабораторная диагностика дисбактериоза

Основной метод – бактериологическое исследование. При этом в оценке его результатов превалируют количественные показатели. Проводится не видовая идентификация, а только до рода.

Дополнительный метод – хроматография спектра жирных кислот в исследуемом материале. Каждому роду соответствует свой спектр жирных кислот.

Коррекция дисбактериоза:

1) устранение причины, вызвавшей дисбаланс нормальной микрофлоры;

2) использование эубиотиков и пробиотиков.

Эубиотики – это препараты, содержащие живые бактерициногенные штаммы нормальной микрофлоры (колибактерин, бифидумбактерин, бификол и др.).

Пробиотики – это вещества немикробного происхождения и продукты питания, содержащие добавки, стимулирующие собственную нормальную микрофлору. Стимулирующие вещества – олигосахариды, гидролизат казеина, муцин, молочная сыворотка, лактоферин, пищевые волокна.

2. Диагностические аллергены (туберкулин, маллеин, бруцеллин). Принципы изготовления, контроля, применения.

Техника аллергических диагностических исследований. В ветеринарии аллергический метод диагностики применяют при туберкулезе бруцеллезе, сапе, реже— при сибирской язве, листериозе, туляремии и др. Способы введения аллергена: внутрикожный (основной) по 0,1...0,5 мл, накожный, подкожный, конъюнктивальный. При внутрикожной туберкулинизации аллерген вводят:

Крупному рогатому скоту, буйволам, оленям, зебу—в область средней трети шеи; быкам-производителям — в одну из подхвостовых складок;

Мелкому рогатому скоту — в подхвостовую складку, веко;

Свиньям — в область наружной поверхности уха на расстоянии 2 см от его основания (в одно ухо — ППД для млекопитающих, в другое — ППД для птиц);

Козам, овцам, собакам, обезьянам и пушным зверям (кроме норок) — в область внутренней поверхности бедра или локтевой складки, норкам — в верхнее веко (интрапальпебрально);

Курам — в бородку; индейкам — в подчелюстную складку;

Кошкам наносят на внутреннюю поверхность уха.

Инструментами, предназначенными для туберкулинизации, не разрешается вводить животным другие препараты. Шприцы и иглы до и после использования стерилизуют в течение 10 мин в дистиллированной или кипяченой воде без добавления дезинфицирующих веществ.

Шерсть на месте инъекции предварительно выстригают и выбривают, кожу обрабатывают 70%-м этиловым спиртом. О правильности выполнения пробы судят по образованию бугорка размером с горошину на месте введения препарата. Реакцию учитывают у крупного рогатого скота, буйволов, зебу, верблюдов и оленей через 72 ч; у коз, овец, свиней, собак, обезьян и пушных зверей — через 48 ч; у птиц — через 30...36 ч.

При учете внутрикожной реакции пальпируют место инъекции (при пальпебральном способе сравнивают веки левого и правого глаза). При обнаружении изменений кожи в месте введения аллергена у крупного рогатого скота, буйволов, зебу, верблюдов, оленей определяют размер утолщения с помощью кутиметра

Определение с помощью кутиметра размера утолщения кожной складки при положительном результате внутрикожной пробы на туберкулез: вверху — кожная складка до введения туберкулина; внизу-через 72 ч после введения туберкулина

Животных считают положительно реагирующими на туберкулин в следующих случаях: крупный рогатый скот, буйволов, зебу, верблюдов и оленей — при утолщении складки кожи на 3 мм и более (независимо от характера реакции); коз, овец, собак, обезьян, пушных зверей, кур и других птиц — при образовании припухлости в месте введения туберкулина; норок — при опухании века.

Офталъмопробу применяют при исследовании лошадей на туберкулез и can, крупного рогатого скота — на туберкулез и только одновременно с внутрикожной инъекцией аллергена. Методом офтальмопробы животных исследуют двукратно с интервалом 5...6 дней. 3...5 капель аллергена наносят стерильной глазной пипеткой на конъюнктиву слегка оттянутого нижнего века или под третье веко.

Результаты первой офтальмопробы с маллеином учитывают через 3, 6, 9, 12 и 24ч, второй—через 3, 6, 9 и 12ч; первой офтальмопробы с туберкулином у лошадей и крупного рогатого скота — через 3, 6, 9, 12 и 24 ч, второй — через 3, 6, 9 и 12ч. При учете реакции осматривают конъюнктиву, открывая во всех случаях глаз животного.

По степени проявления реакцию на маллеин у лошадей подразделяют на положительную, сомнительную и отрицательную. Положительная реакция характеризуются гиперемией и отеком конъюнктивы, выделением из внутреннего угла глаза слизисто-гнойного или гнойного секрета, накапливающегося в конъюнктивальном мешке, а затем вытекающего в

Виде шнура.

Отрицательная реакция характеризуется слабым покраснением конъюнктивы, незначительным слезотечением или отсутствием каких-либо отклонений от нормы.

В качестве сомнительной реакции трактуют небольшое слезотечение или скопление гноя в углу глаза.

Положительная реакция на туберкулин у крупного рогатого скота и лошадей характеризуется выделением из внутреннего угла глаза слизисто-гнойного секрета, накапливающегося вначале в конъюнктивальном мешке, а затем вытекающего в виде шнура.

Для аллергической диагностики бруцеллеза у свиней применяют бруцеллин ВИЭВ. Аллерген вводят внутрикожно с наружной стороны ушной раковины, ближе к основанию уха, в дозе 0,2 мл. На месте введения препарата образуется бугорок размером с горошину. При инъекции обязательно соблюдают правила асептики. Участок кожи перед уколом протирают ватой, смоченной 70%-м этиловым спиртом или 3%-м раствором борной кислоты. Реакцию на бруцеллин учитывают дважды — через 24 и 48 ч путем осмотра, а при неясно выраженной реакции — пальпацией места инъекции. При обнаружении припухлости на месте введения препарата реакцию оценивают как положительную.

Организация массовых аллергических исследований. Прежде чем приступать к массовым аллергическим исследованиям, необходимо продумать способы фиксации животных, обеспечивающие, с одной стороны, безопасность людей и животных в процессе работы, а с другой — точное соблюдение места инъекции и дозы аллергена, что очень важно для правильного учета аллергических реакций. Для этой цели подготавливают различные приспособления и инструменты, а также приглашают вспомогательный персонал, который предварительно инструктируют.

Чтобы массовое аллергическое исследование не стало фактором распространения болезни, тщательно готовят инструментарий: стерильные шприцы и иглы для туберкулинизации, глазные пипетки в необходимом количестве, дезраствор для обработки поля инъекции и использованных игл, ножницы для выстрига-ния шерсти, кутиметры, безыгольные инъекторы (предварительно проверенные на годность к работе и обработанные дезраствором).

Накануне аллергического исследования осматривают поголовье, обращая внимание на состояние кожи (конъюнктивы): на месте инъекции кожа должна быть без ран, язв, ссадин, узлов, утолщений, отеков и пр. Обязательно оценивают качество аллергического препарата (наличие наставления, этикетки, внешний вид, срок годности).

Очень важно правильно обрабатывать поле (при туберкулинизации используют только спирт-ректификат) и вводить препарат, а также точно соблюдать сроки и методы учета реакций.

После окончания аллергического исследования и учета реакций составляют акт с описью исследованных животных аналогично акту на проведение вакцинации.

3. Лабораторная диагностика сибирской язвы.

• бактериоскопии нативного материала,

• посева его на питательные среды,

• заражении животных (биологическая проба),

• постановки реакции термопреципитации по Асколи.

Для диагностики сибирской язвы у больных и ретроспективного анализа используют внутрикожную пробу с антраксилом. Для лабораторного исследования от больного в стерильную посуду берут содержимое пустулы, гной, отделяемое карбункула, кровь, мочу, мокроту, испражнения, рвотные массы, соблюдают при этом правила работы с особо опасными инфекциями. Исследование начинают с бактериоскопии мазков, окрашенных по Граму и анилиновыми красками. Окраску мазков производят также раствором Ребигера на предмет обнаружения капсульных форм бацилл сибирской язвы - капсулы окрашиваются в красно-фиолетовый цвет, бактерии в темно-фиолетовый. Для бактериологического исследования материал засевают в чашки Петри на мясопептонный агар и в пробирки с мясопептонным бульоном. Через 24 ч выращивания в термостате при 37 °С в положительных случаях на поверхности агара можно видеть матовые шероховатые колони с ворсистыми краями типа "львиной гривы", в пробирках с мясопептонным бульоном сибиреязвенный возбудитель растет на дне пробирки в виде комка ваты. Выделенные культуры в мазках исследуют под микроскопом на морфологию и в висячей капле - на подвижность. Биологическая проба. Окончательное подтверждение видовой принадлежности, выделенной культуры устанавливают путем подкожного заражения белых мышей, морских свинок, кроликов эмульсией из однодневной агаровой культуры. Наблюдение за животными проводят 10 дней. Павших животных вскрывают: делают мазки - отпечатки из внутренних органов для микрокопирования, производят посевы из крови, сердца, селезенки и инфильтрата на месте инъекции. Для ускоренной диагностики сибиреязвенной инфекции используют иммунофлюорецентный метод. Этот метод состоит в обработке мазков культур микробов люминесцентными сыворотками и просмотре их в люминесцентном микроскопе - бациллы сибирской язвы выглядят в виде палочек с ободком, светящимся зеленом цветом. Лаборатория может дать предварительное заключение по исследуемому материалу через сутки после его получения и окончательное через 3-4 дня после результатов постановки биологической пробы. Реакцию термопреципитации по Асколи проводят с целью обнаружения сибиреязвенного антигена. Для этого измельчают кусочки органов трупа, кожи, шерсти животных и кипятят в физиологическом растворе 10-15 мин. Полученный термоэкстракт фильтруют. Фильтрат наслаивают на преципигирующую сыворотку, разлитую в узкие пробирки. В положительных случаях на границе обеих жидкостей появляется мутно-белое кольцо преципитации. Аллергическая проба состоит во внутрикожном введении 0,1 мл антраксина - антигена, извлекаемого из оболочки сибиреязвенного возбудителя. На месте введения у больных и переболевших сибирской язвой появляются гиперемия и инфильтрат размером 3,5 х 3 см.