Вирусология / Herpesviridae-2011-24

ДИАГНОСТИКА

ГЕРПЕСВИРУСОВ

α- Герпесвирусы

Выделение вируса от больных по-прежнему является основным методом для диагностики α- герпесвирусов. Однако использование этого метода представляет значительные трудности: различные технические проблемы при заборе образцов из кожных поражений, ускоренная транспортировка по «холодовой» цепи в вирусологическую лабораторию. Основным ограничением метода является подбор чувствительных клеточных культур (например, фибробласты крайней плоти, клетки Vero, диплоидные клетки Л-68) для выявления характера цитопатического эффекта HSV(VZV) репликации, который развивается в пределах 24 - 48 часов после заражения содержащим инфекционный вирус материалом.

Серологический диагноз HSV заболевания не является главным критерием для постановки клинического диагноза, но до сих пор особенно в нашей стране является основным методом для диагностики герпесвирусных инфекций. До сих пор, неспособность имеющихся в распоряжении отечественных клиницистов коммерческих тест-систем различать антитела к HSV-1 и HSV-2, а также невозможность отличить наличие трансплацентарно приобретенного материнского IgG от эндогенных антител, делает оценку серологического статуса новорожденного чрезвычайно трудной при острой инфекции. Такая оценка может быть очень полезна, если мать с отсутствием в анамнезе HSV заболевания имеет первичную HSV инфекцию в поздние сроки беременности и передает антитела плоду. В настоящее время в медицине попрежнему используются серологические методы для измерения HSV антител: фиксацией комплемента, пассивной гемагглютинацией, предотвращением гемагглютинации, иммунофлуоресценцией и иммуноферментным анализом (ИФА).

Диагностика с помощью цепной полимеразной реакции (PCR)

в настоящее время быстрый эффективный метод для диагноза HSV энцефалитов. Успешная идентификация HSV ДНК в спинномозговой жидкости, анализы образцов биопсии мозга при HSV энцефалитах окончательно поддерживает использование PCR как диагностический метод инфекции центральной нервной системы (ЦНС)[175,340]. Сравнение образцов спинномозговой жидкости с полученными образцами биопсии от больных с HSV энцефалитом показывают чувствительность более чем 95% во время выраженной клинической картины и специфичность, приближающуюся к 100%. Ограничения метода связаны с выбором районов биопсии и наличием гемоглобина в спинномозговой жидкости, как ингибитора PCR.

β- Герпесвирусы

Самые общие симптомы врожденного HCMV заболевания у новорожденных неспецифические: желтуха, петехиальная гепатоспленомегалия, задержка внутриутробного роста и микроцефалия. Врожденное HCMV заболевание невозможно дифференцировать на основе клинических данных от врожденных заболеваний, вызванных другими агентами как, например, Toxoplasma gondii, сифилис, и вирус краснухи. Больные с неинфекционными болезнями как, например, эритробластоз новорожденных, остеопетрозит и болезни обмена веществ могут иметь желтуху, петехии и органомегалию, что подтверждают врожденное заболевание. У детей и взрослых с мононуклеозоподобным заболеванием выделение HCMV дифференцирует эту инфекцию от острых инфекций, вызванных EBV, Toxoplasma gondii, вирус иммунодефицита человека и вирусы гепатита (А, B, и C).

За рубежом, учитывая неоднозначность серологической и ПЦР диагностики, в настоящее время диагноз острой цитомегалийной инфекции ставится при наличии трех показателей.

Первое: выделение инфекционного вируса на культуре клеток. Второе: выявление ДНК цитомегаловируса в исследуемом образце. И третье: наличие рр65 антигенемии. Присутствие рр65 антигена в крови выявляют чаще всего с помощью меченных моноклональных антител к этому белку на поверхности периферических лейкоцитов. Некоторые исследователи называют этот антиген лейкоцитарным антигеном или маркером патогенности.

Иммунофлуоресцентное исследование фрагмента ушка правого предсердия. (Увеличение 1х 100). Препарат обработан флуоресцентной антисывороткой к рекомбинантному белку IE2 цитомегаловируса человека: 1- свечение указывает на присутствие антигена IE2 цитомегаловируса в стенке мелкого сосуда; 2- мелкий сосуд без специфического свечения.

Иммунофлуоресцентное исследование фрагмента маммарной артерии, пораженной атеросклеротическим процессом. (Увеличение 1х 100). Препарат обработан флуоресцентной антисывороткой к рекомбинантному белку рр65 цитомегаловируса человека. 1- свечение в этой области интимы указывает на присутствие антигена рр65 цитомегаловируса; 2- область интимы, в которой не выявляется цитомегаловирусный антиген; 3- средний слой стенки артерии.

γ- Герпесвирусы

Серологические исследования EBV заболевания исторически развивались на основе иммунофлуоресцентных методов [43,201). Эти исследования были направлены на выявление антигенов: а) ядерный антиген (EBNA), экспрессируемый в латентно инфицированных клетках; b) ранний антиген (EA), разделяемый на диффузный метанол-резистентный (EA-D) и дискретный метанол-чувствительный (EA-R) компоненты, экспрессируемые в клетках ранней фазы литического цикла; c) вирусный капсидный антиген (VCA), экспрессируемый в клетках в поздней фазе литического цикла и d) мембранный антиген (MA), экспрессируемый на поверхности клеток в поздней фазе литического цикла. Каждый из этих антигенов состоит из нескольких отдельных вирусных белков. Комплекс EBNA состоит из 6 отдельных ядерных белков: EBNA 1, 2, 3A, 3B, 3C и LP. В стандартном тесте EBNAиммунофлуоресценции с антителами реагирует преимущественно EBNA1. EA это мажорный предранний и ранний вирусные белки, включая предранний BZLF1 и мажорные ранние белки: BALF2, BHRF1, BMRF1 и BMLF1.