Микробиология

141

фоне сплошного роста микробов появляются стерильные пятнаколонии бактериофага.

Обнаружение бактериофага на плотных питательных средах по методу Отто. Мясо-пептонный агар (1.5%) разливают в чашки Петри(более высокая концентрация агара угнетает развитие негативных колоний бактериофага). После застудневания питательную среду засевают16-18-часовой бульонной культурой бактерий, гомологичных искомому фагу. Для получения сплошного роста 2-3 капли культуры, нанесенные в центр чашки, растирают шпателем равномерно по всей ее площади. Спустя 5-10 минут после посева на подсушенную поверхность питательной среды наносят каплями исследуемый фильтрат. На одной чашке можно поставить несколько проб. Для этого по дну чашки намечают разделение питательной среды на секторы и в каждый сектор вносят по капле фильтрата. После того, как жидкость впитается в среду, чашки перевертывают вверх дном и ставят в термостат при 37°С на 13-24 часа.

Учет результатов: доказательством наличия бактериофага служит полное отсутствие роста культуры в месте попадания капли фильтрата(активный бактериофаг) или появление в этом участке мелких стерильных пятенколоний бактериофага (бактериофаг слабой активности).

Обнаружение бактериофага на плотных питательных средах двухслой-

ным методом Грациа. Мясо-пептонный агар (1.5%) разливают в чашки Петри в количестве 25-30 мл (первый слой). После застудневания среды чашки ставят на 1.5-2 часа для подсыхания. В пробирку с 2.5 мл 0.7%-ного расплавленного и остуженного до температуры 45°С агара вносят 1 мл исследуемого фильтрата и 0.1 мл густого смыва суточной агаровой культуры, соответствующей искомому фагу.

Содержимое пробирок быстро перемешивают, чтобы не произошло застудневания агара, и выливают в ту же чашку вторым слоем. После застудневания агара посев ставят в термостат при37°С. Учет результатов, как правило, возможен через 5-8 часов после инкубации в термостате. Присутствие бактериофага определяют по наличию прозрачных пятен, хорошо видимых на матовом фоне глубинного роста бактерий.

2.4. Титрование бактериофага

После выявления бактериофага в исследуемом материале необходимо определить его количественное содержание или, как принято говорить, найти титр фага.

Для выражения титра бактериофага можно пользоваться двумя показателями: количеством активных корпускул бактериофага, содержащихся в 1 мл исследуемой жидкости бактериофага, или величиной наибольшего разведения исследуемой жидкости, при которой бактериофаг проявляет свое литическое действие. Полученную при этом величину выражают отрицательным логарифмом10,

где степень указывает разведение фага. Средний титр бактериофага составляет

10-7.

Для титрования бактериофага предложены различные методы, однако наибольшее распространение получил способ титрования фага в жидкой питательной среде, предложенный Аппельманом, и метод агаровых слоев Грациа.

142

Титрование бактериофага в жидкой питательной среде пометоду Ап-

пельмана. Метод Аппельмана основан на внесении различных количеств титруемого бактериофага в бульон, засеянный одной и той же дозой культуры гомологичных микробов, с целью получения феномена бактериофагии.

Двенадцать пробирок, содержащих по 4.5 мл мясо-пептонного бульона, ставят в штатив в один ряд. В 1-ю пробирку стерильной пипеткой вносят0.5 мл исследуемого фага. Содержимое пробирки перемешивают и0.5 мл жидкости из 1-ой пробирки переносят во 2-ю, из 2-ой - в 3-ю и т.д. до 10-ой включительно. Из 10-ой пробирки лишние 0.5 мл выливают. (При получении серийных разведений с целью экономии сред и бактериофага можно уменьшить объемы в5 раз: вместо 4.5 мл мясо-пептонного бульона брать0.9 мл и вместо 0.5 фага - 0.1 мл). 11-я и 12-я пробирки - контрольные. Переносят жидкость из одной пробирки в другую каждый раз отдельной стерильной пипеткой емкостью 1 мл. Таким образом, в 10 пробирках получают разведения бактериофага от 1:10 до 10-10.

Во все 10 пробирок приготовленного ряда разведений вносят по 0.2 мл 1824 часовой бульонной культуры бактерий, одноименных титруемому фагу. Прибавляемая культура не должна содержать устойчивых к фагу клеток.

Густота микробной взвеси, прибавляемой в пробирки с титруемым бактериофагом, существенного значения не имеет, т.к. опытным путем было установлено, что изменение микробной концентрации в пределах100000-4500000 ед. ОК/мл не оказывает заметного влияния на исход титрования бактериофага. Пробирка 11-я - контроль культуры, содержит 5 мл бульона и 0.2 мл бульонной культуры микробов. Пробирка 12-я - контроль на стерильность, содержит 5 мл бульона без добавления культуры и фага. Штатив с пробирками помещают в термостат при 37°С.

Учет результатов производят через 18-20 часов после инкубации. Титром считают то максимальное разведение бактериофага, при котором наблюдается полный лизис чувствительной к нему культуры. Практически это соответствует той последней пробирке вряду, в которой бульон еще остается совершенно прозрачным.

Титрование бактериофага наплотной питательной среде пометоду агаровых слоев Грациа. Метод агаровых слоев Грациа основан на внесении различных разведений бактериофага всоответствующую культуру бактерий и посева смеси на плотную питательную среду с целью получения негативных колоний бактериофага.

Накануне постановки опыта готовят питательные среды. В чашки Петри разливают 1.5%-ный мясо-пептонный агар в количестве25-30 мл. Для подавления роста воздушной микрофлоры к расплавленному агару перед разливкой прибавляют 0.004%-ный спиртовый раствор генцианового фиолетового из расчета 0.1 мл красителя на каждые 100 мл мясо-пептонного агара. Агар покрывают стерильной фильтровальной бумагой и подсушивают 30 минут в термостате или 2-3 часа при комнатной температуре, после чего закрывают крышкой и оставляют на ночь, в комнате. Подготовленный агар должен быть совершенно сухим, т.к. даже незначительное увлажнение может изменить количественные показатели содержания корпускул фага в исследуемой жидкости.

143

Мясо-пептонный агар (0.7%), разлитый в пробирки по 2.5 мл и простерилизованный в них, может быть приготовлен за несколько дней до постановки опыта. Количество чашек Петри, как и пробирок с0.7%-ным мясо-пептонным агаром, должно соответствовать числу пробирок с разведением фага.

В день постановки опыта из жидкости, содержащей титруемый фаг, готовят в пробирках ряд последовательных десятикратных разведений(так же, как и при титровании фага на жидких средах по методу Аппельмана). Для разведений фага можно пользоваться стерильным бульоном или изотоническим раствором хлорида натрия.

Затем в пробирки с 0.7%-ным мясо-пептонным агаром, расплавленным на водяной бане и остуженным до температуры44-46°С, приливают по 1 мл разведений титруемого фага. Одновременно с фагом в каждую пробирку вносят по 0.1 мл одноименной чувствительной к фагу культуры. Содержимое пробирок перемешивают, быстро вращая пробирки между ладонями, и выливают вторым слоем

вчашки с 1.5%-ным агаром. После остывания среды чашки с посевом переносят

втермостат при 37°С.

Учет результатов производят после 5-7 часов инкубации посевов в термостате, подсчитывая количество стерильных пятен в2-3 чашках, засеянных фагом с наиболее высоким разведением. Из этих данных выводят среднее арифметиче-

ское число колоний и полученное число умножают на степень максимального разведения. Например: при разведении фага 10-6 - 92 колонии, при 10-7 - 61 колония, при 10-8 - 27 колоний. Среднее число колоний бактериофага на чашке60. Титр исследуемого бактериофага равен 60·10-8.

2.5. Фаготипаж бактерий и методы фаготипирования

Специфические бактериофаги являются очень точными индикаторами, определяющими видовую и типовую принадлежность бактерий. Поэтому они нашли широкое применение для идентификации бактерий, выделяемых из организма больного и инфицированных объектов внешней среды.

В настоящее время наиболее полно и тщательно разработаны методы фагодиагностики стафилококков и бактерий брюшного тифа и паратифов. По отношению к микробам тифо-паратифозной группы найдены фаги, с помощью которых можно с большой точностью определять виды бактерий и четко разграничивать определенное количество типов в пределах этих видов.

Техника фаготипирования бактерий по модифицированному методу Креджи и Иенсена. В основу фаготипирования положен принцип совместного выращивания типируемой культуры с типовым бактериофагом. Наступление лизиса является индикаторным признаком, определяющим типовую принадлежность бактерий.

Для фаготипирования бактерий рекомендуется применять хорошо подсушенный 1.5%-ный мясо-пептонный агар с 5% глицерина.

Суточную агаровую культуру исследуемого штамма отсевают на бульон и помешают в термостат при37°С. С появлением заметного роста культуру набирают в пастеровскую пипетку с тонко оттянутым капилляром и наносят небольшими каплями на поверхность хорошо подсушенной питательной среды. Распо-

144

ложение капель на поверхности агара можно наметить заранее. С этой целью на поверхности среды донышком стерильной бактериальной пробирки делают вмятины в виде лунок. Таким образом намечают не только места будущих капель наносимой культуры, но и предотвращают растекание их по поверхности среды. Количество капель должно соответствовать числу типовых капель плюс одна капля для контроля роста культуры. Каплям культуры дают возможность впитаться, для чего требуется 3-10 минут. Затем на поверхность каждой капли наносят эксцентрично по 1 капле типового фага с таким расчетом, чтобы часть культуры оставалась свободной от воздействия бактериофага. Сектор, оставшийся свободным от воздействия бактериофага, является контролем роста культур. При постановке опыта для каждого типа бактериофага берут отдельную пипетку. Типовой бактериофаг применяют в критическом тест-разведении, при котором исследуемый бактериофаг вызывает на плотной питательной среде явный лизис культуры гомологичного фаготипа и не лизирует культуры других гетерологических типов. После того, как бактериофаг впитается в питательную среду, чашки с посевом помещают в термостат при37°С. Через 6-8 часов производят учет результатов фаготипирования. Непрерывное 6-часовое инкубирование чашек можно заменить 2-часовой инкубацией, после которой чашки переносят в холодильник, а на следующий день их снова на3-4 часа помещают в термостат и затем учитывают результаты.

Наличие хорошо выраженного лизиса исследуемой культуры с одним из типовых фагов указывает на принадлежность культуры к данному фа-готипу. Появление выраженных признаков лизиса одновременно в нескольких каплях указывает на то, что степень разведения типовых фагов, взятых в опыт, недостаточна. В этих случаях опыт следует повторить с большими разведениями бактериофагов.

Учет фаготипирования производят как в проходящем, так и в падающем свете. Интенсивность лизиса отмечают с помощью четырехкрестной системы: от выраженного лизиса культуры (++++) до едва заметного (+).

Техника безопасности

При проведении практического занятия по определению антагонистической активности микроорганизмов, бактериоциногении, лизогении и изучению методов фаготипирования бактерий необходимо неукоснительно соблюдать правила, обязательные при работе с культурами микроорганизмов, газовыми горелками, сосудами, работающими под давлением (стерилизаторы, автоклавы), лабораторной стеклянной посудой, электрооборудованием.

Вопросы по теме занятия

1.Расскажите об антагонизме микроорганизмов как одной из форм их взаимодействия.

2.Дайте определение понятиям "бактериоцины" и "бактериоциногения".

3.Как называются бактериоцины у разных микроорганизмов?

4.Какими свойствами обладают бактериоциногенные бактерии?

5.Расскажите о бактериофагах.

145

6.Чем различаются вирулентные и умеренные фаги?

7.Как происходит лизогенизация бактерий(интегративная фаговая инфекция)?

8.К чему приводит переход умеренного фага(профага) в вирулентную форму в лизогенной культуре?

9.Расскажите о принципах методов определения микробного антагонизма.

10. На чем основываются микробиологические, нетические и физикохимические методы определения бактериоциногенности культур?

11.Какие методы используются для выделения бактериофагов?

12.Как проводится обнаружение бактериофага в жидкой питательной среде?

13.Как проводится обнаружение бактериофага на плотных питательных средах по методу Отто?

14.На чем основано обнаружение бактериофага по методу Грациа?

15.С какой целью проводится титрование бактериофага?

16.Как проводится титрование бактериофага в жидкой питательной среде по методу Аппельмана?

17.Как проводится титрование бактериофага на плотной питательной среде по методу агаровых слоев Грациа?

18.На чем основана техника фаготипирования бактерий по модифицированному методу Креджи и Иенсена?

Литература по теме занятия

1.Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О.Биргера. – М., Медицина, 1982.

2. Методы общей бактериологии в трех томах / Под ред. Ф.Герхардта и др. Пер.

с англ. под ред. Е.Н.Кондратьевой и Л.В.Калакуцкого. – М., Мир, 1983.

3.Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. – М., Медицина, 1978.

4.Микробиология. Воробьев А.А., Быков А.С., Пашков Е.П. и др. – М., Меди-

цина, 1994.

146

4.ВЛИЯНИЕ ОКРУЖАЮЩИХ БИОЛОГИЧЕСКИХ, ФИЗИЧЕСКИХ И ХИМИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ

НА ЖИЗНЕДЕЯТЕЛЬНОСТЬ МИКРООРГАНИЗМОВ

Лабораторные работы № 4.1 и 4.2.

Микробиологические методы исследования объектов окружающей среды. Микробиологические методы исследования почвы и воздуха,

воды и твердых продуктов

1. Общие сведения

Раздел микробиологии, в котором рассматриваются вопросы изучения микрофлоры и микробиологических процессов на объектах внешней среды и в биосфере, распространения микроорганизмов и их участия в круговороте углерода, азота, кислорода, серы и других элементов, роли микробов в процессах биосинтеза и биотрансформации продуктов и отходов жизнедеятельности людей с целью выдачи рекомендаций по оптимальному использованию природных ресурсов и сохранения или улучшения среды обитания человека, называется экологической микробиологией, в отличие от экологической микробиологии санитарная микробиология осуществляет контроль за санитарно-микробиологическим (эпидемическим) состоянием воды, воздуха, пищевых продуктов, мест обитания людей, биотехнологических производств и пр. в тех случаях, когда может быть нанесен вред человеку патогенными или условно-патогенными микроорганизмами, а также продуктами их жизнедеятельности. Такие исследования выполняются бактериологическими лабораториями СЭС в плановом порядке и по эпидемиологическим показаниям.

Непосредственное обнаружение микробов в объектах внешней среды, как правило, сопряжено с большими трудностями, т.к. встречаются они непостоянно, главным образом в период эпидемических вспышек и в окружении бактерионосителей, представляя ничтожно малую величину по сравнению с постоянной непатогенной микрофлорой исследуемого объекта. Поэтому возможное загрязнение внешней среды патогенными микробами определяют на основаниикосвенного показателя – обнаружения так называемых санитарно-показательных микроорганизмов: кишечных палочек, a- зеленящих и b-гемолитических стрептококков и стафилококков. Присутствие санитарно-показательных микробов в объектах внешней среды указывает на зараженность их выделениями человеческого организма. Кишечная палочка, будучи постоянным представителем нормальной микрофлоры кишечника человека, является показателем фекального загрязнения. На загрязненность исследуют воду, почву, пищевые продукты. Санитарнопоказательными бактериями, указывающими на фекальное загрязнений объектов внешней среды, принято считать все цитратотрицательные и грамнегативные бактерии, ферментирующие с образованием кислоты и газа лактозу, глюкозу, маннит, мальтозу и в некоторых случаях сахарозу.

Цитратположительные разновидности кишечной палочки, растущие на цитратных питательных средах Козера и Симонса, к микробам - показателям фе-

147

кального загрязнения не относятся. Возможность ассимиляции углерода из солей лимонной кислоты указывает на длительное пребывание этих бактерий вне организма животных и на приспособление их к существованию в объектах внешней среды.

Интенсивность загрязнения объектов внешней среды характеризуется двумя показателями: коли-титром и коли-индексом.

Под коли-титром подразумевается наименьшее количество исследуемого материала (выраженное в миллилитрах или граммах), в котором обнаруживается кишечная палочка.

Коли-индекс - количество особей кишечной палочки, найденное в 1 л жидкости или 1 г плотного вещества.

Установив коли-титр исследуемого вещества, можно производить пересчет на коли-индекс и наоборот. Для перевода коли-титра в коли-индекс необходимо 1000 разделить на число, выражающее коли-титр.

2. Содержание лабораторного занятия Цели занятия:

-познакомиться с основными методами выделения микроорганизмов из различных объектов внешней среды;

-освоить методы анализа микрофлоры воздуха;

-практически освоить методы определения показателей загрязненности

воды;

-рассмотреть порядок взятия проб с различных объектов внешней среды на исследование их обсемененности микрофлорой;

-овладеть методами микробиологического контроля биотехнологических процессов и продуктов;

-познакомиться с основными приборами, используемыми при определении обсемененности воздуха, воды, рабочих поверхностей.

Материалы и оборудование

Стерильные чашки Петри, пробирки, водяная баня, термостат, микроскоп, Чашки с дифференциально-диагностическими средами Эндо, Плоскирева и др., красители, МПБ, MПA (косой и прямой), микробиологические петли и др.

Иллюстративный материал по теме: определение обсемененности воздуха, воды, рабочих поверхностей.

Ход работы

Анализ микрофлоры воздуха

Для микробиологического исследования воздуха пользуются методами, в основу которых положены оседание(седиментация) и аспирация. При помощи седиментационных методов можно получить общее представление о встречающихся в воздухе микроорганизмах. Аспирационные методы дают возможность определить не только качественное, но и количественное содержание бактерий в определяемом объеме воздуха.

148

В настоящее время большое внимание уделяется непосредственному обнаружению патогенных и условно-патогенных микроорганизмов(бактерии, вирусы, плесневые и условно-патогенные грибы). На предприятиях микробиологической промышленности изучается наличие и содержание в воздухе микроорганизмовпродуцентов (дрожжеподобные грибы родаCandida на гидролизнодрожжевых заводах и заводах по производству кормовых белковых добавок). Плесневые грибы родов Aspergillus, Penicillium и др. на заводах, выпускающих ферменты и антибиотики, сальмонеллы и B.thuringiensis - при производстве средств защиты растений и борьбы с грызунами и т.д.

Метод оседания (седиментации)

Это простейший метод бактериологического исследования воздуха, который основан на оседании микроорганизмов под влиянием силы тяжести на -по верхность агара открытой чашки Петри. В атмосферном воздухе наряду с седиментацией большое значение приобретает прибивное действие ветра, при помощи которого крупные частицы прибиваются к поверхности агара. Чашки с МПА экспонируют 5-10-15-20 минут в зависимости от предполагаемого бактериального загрязнения. Экспозиция чашек с элективными средами увеличивается до30 минут - 3 часов. Метод оседания не дает количественного представления о -со держании микрофлоры воздуха, т.к. на открытых чашках плохо улавливаются тонкодисперсные фракции капель и пылевых частиц, а задерживаются главным образом крупные пылевые частицы, которые оседают или прибиваются токами воздуха к поверхности среды. В закрытых помещениях иногда используют для количественного представления о содержании микрофлоры в воздухеусловный перерасчет по Омельянскому(на поверхность 100 см2 плотной питательной среды в чашке Петри оседает за5 минут такое количество бактерий, которое содержится в 10 л воздуха). Этот метод малопригоден для открытых помещений и абсолютно не пригоден для атмосферного воздуха, где имеют место большие колебания в скорости его движения. Метод оседания может быть использован в тех случаях, когда отсутствуют более совершенные приборы и методы или когда нет источника электроэнергии.

Прибор Дьяконова - один из простейших аспирационных приборов, основанный на улавливании бактерий в жидкости. Он представляет собой стеклянный цилиндр, в который через отверстия в пробке пропущены две трубки. Одна трубка кончается ниже пробки и соединена с аспиратором, другая - опущена на дно цилиндра, куда поступает исследуемый воздух. В цилиндр наливают стерильный изотонический раствор хлорида натрия или водопроводную воду(жидкости, не образующие пену) и через нее просасывают определенный объем воздуха. Для того, чтобы уменьшить объем пузырьков воздуха и увеличить соответственно поверхность соприкосновения воздуха с водой, на дно прибора помещают стеклянные бусы или стерильный мелкий гравий, а конец трубки или суживают, или на нем делают булавовидное вздутие с несколькими мелкими отверстиями. В качестве аспиратора могут быть использованы воздуходувки, пылесосы, вакуумные насосы и др. На МПА засевают 0,1-0.2 мл улавливающей жидкости, а на элективные среды - по 0,3-0,5 мл. Основным недостатком прибора Дья-

149

конова является его сравнительно слабая улавливающая способность из-за нестаточного контакта крупных пузырьков воздуха с улавливающей жидкостью.

Прибор Кротова (рис.1) - один из самых распространенных для бактериологического исследования воздуха. Механизм улавливания микрофлоры основывается на ударно-прибивном действии воздуха, который проходит через узкую клиновидную щель и с большой скоростью ударяется о влажную поверхность питательной среды. В результате удара находящиеся в воздухе аэрозоли, в т.ч. содержащие бактерии пылевые частицы и капли, прибиваются к поверхности МПА или элективных сред. Во время отбора пробы воздуха чашка Петри вращается вместе со столиком, благодаря чему достигается равномерное обсеменение поверхности агара микрофлорой воздуха. Для отбора проб следует отбирать чашки Петри с плоским дном, а количество среды в чашке не должно превышать15

мл. Щелевой прибор Кротова характеризуется эффективностью улавливания микрофлоры в пылевой фазе аэрозоля, дает четко сопоставимые результаты, прост в работе, позволяет за короткое время произвести отбор проб воздуха непосредственно на чашках Петри с МПА или элективными средами. Производительность прибора от 20 до 40 л/мин. Имеется ряд модификаций прибора, работающих на автономном питании.

Прибор ПАБ-1 (пробоотборник аэрозольный микробиологический) предназначен для бактериологического исследования больших объемов воздуха в течение короткого промежутка времени. Отбор проб воздуха производится со скоростью 125-150 л/мин. Улавливание микроорганизмов основано на ионизации частиц исследуемого воздуха и осаждении их на электрод противоположного знака. При отборе проб воздуха на электрод помещают металлический поддон с плотной или жидкой питательной улавливающей средой. Плотные среды наливают на поддон в количестве 20 мл, а жидкие - 15 мл. В последнем случае прибор ПАБ-1 должен находиться в строго горизонтальном положении, т.к. при смачивании краев поддона прибор может выйти из строя. Большая скорость отбора проб воздуха с помощью прибора ПАБ-1 имеет значение для обнаружения пато-

150

генных и условно-патогенных микроорганизмов из воздушной среды на земледельческих полях орошения, а также единичных жизнеспособных клеток грибов рода Candida при изучении зоны рассеивания грибов продуцентов вокруг предприятий микробиологической промышленности.

Для исследования аэрозолей воздуха применяют ряд других приборов, которые по принципу действия подразделяются на: седиментационные, аспирационные, фильтрационные, комбинированные. По конструктивным особенностям и по принципу действия различают: собственно импакторы, щелевые приборы, сетчатые приборы, центрифуги, термопреципитаторы, электропреципитаторы.

распределения частиц микробного аэрозоля по размерам являетсямногокаскадный импактор Меяи его модификации. Прибор состоит из четырех каскадов прямоугольных сопел, за каждым из которых располагается предметное стекло, покрытое каким-либо улавливающим составом. Осаждение частиц просасываемого через прибор воздушного потока на предметное стекло происходит в том случае, когда скорость движения частицы достаточна для преодоления инерции обтекающего пластинку воздушного потока.

В зависимости от поставленной задачи исследования микрофлоры воздуха и условий отбора проб могут проводиться определения общей бактериальной обсемененности, содержания санитарно-показательных микроорганизмов и наличие патогенных или условно-патогенных микроорганизмов.

При отборе проб воздуха следует исходить из основных положений:

-при высоком содержании микроорганизмов в воздухе исследуютне большие объемы;

-при низком содержании микроорганизмов или необходимости обнаружения патогенных грибов, бактерий или вирусов целесообразно исследовать большие объемы воздуха;

-пробы воздуха следует отбирать на уровне дыхания сидящего или стоящего человека.

Анализ обсемененности воды

Степень загрязненности водоемов органическим веществами и наличие в них микроорганизмов соответствует зонам сапробности. Различают три зоны сапробности:

1.Олигасапробная - содержит небольшое количество органических веществ и мало бактерий - от 10 до 1000 в 1 мл.

2.Мезосапробная - зона загрязненной воды, где происходит распад белков и углеводов. Количество бактерий в 1 мл 1000 до 100000.

3.Полисапробная - зона сильнейшего загрязнения, где резко выражены гнилостные процессы анаэробного типа. Число бактерий превышает 100000.

Для отбора проб воды используют стерильные склянки, пробирки, флаконы или колбы с ватно-марлевыми пробками и бумажными колпачками. Водопро-