Растения огурца, устойчивые к заболеваниям

1. Растение, которое является устойчивым к клостеровирусу огурцов и к мучнистой росе, причем указанное растение представляет собой растение вида Cucumis sativus, указанное растение, содержит на одной хромосоме по меньшей мере один хромосомальный регион, который придает устойчивость к клостеровирусу, и по меньшей мере один хромосомальный регион, который придает устойчивость к мучнистой росе, где указанный по меньшей мере один хромосомальный регион, который придает устойчивость к клостеровирусу, связан по меньшей мере с одним маркером, выбранным из группы, состоящей измаркеровE16/M50-244, E16/M50-188 и E11/M48-251, и

где указанный по меньшей мере один регион, который придает устойчивость к мучнистой росе, связан по меньшей мере с одним маркером,выбранным из группы, состоящей из:

маркераоднонуклеотидного полиморфизма 39TG в SEQ ID NO:1,

маркераоднонуклеотидного полиморфизма 29GA в SEQ ID NO:2,

маркераоднонуклеотидного полиморфизма 193CT в SEQ ID NO:3,

мутации вставки 5'-AATTT-3' в позиции 221 в SEQ ID NO:4, и

маркеровE16/M50-F-194, E11/M48-F-251, E23/M38-M001, E23/M40-M003, E24/M46-M002, E24/M46-M003, E12/M91-M003, E26/M43-M003, E14/M59-F-134 и E14/M59-F-200.

2. Растение по п.1, где указанное растение включает по меньшей мере два хромосомальных региона, которые придают устойчивость к мучнистой росе, где первый из указанных по меньшей мере двух регионов связан с по меньшей мере одним маркером, выбранным из группы, состоящей из:

маркераоднонуклеотидного полиморфизма 39TG в SEQ ID NO:1,

маркераоднонуклеотидного полиморфизма 29GA в SEQ ID NO:2, и

маркеровE16/M50-F-194, E11/M48-F-251, E23/M38-M001,

и где второй из указанных по меньшей мере двух регионов связан по меньшей мере с одним маркером, выбранным из группы, состоящей из:

маркераоднонуклеотидного полиморфизма 193CT в SEQ ID NO:3,

мутации вставки 5'-AATTT-3' в позиции 221 в SEQ ID NO:4, и

маркеровE23/M40-M003, E24/M46-M002, E24/M46-M003, E12/M91-M003, E26/M43-M003, E14/M59-F-134 и E14/M59-F-200.

3. Растение по п.2, где указанный по меньшей мере один регион, который придает устойчивость к клостеровирусу, помещен между указанными по меньшей мере двумя регионами, которые придают устойчивость к мучнистой росе, как определено в п.2.

4. Часть растения огурца по любому из пп.1-3.

5. Часть растения по п.4, где указанная часть растения выбрана из пыльцы, семязачатков, листьев, корней, кончиков корней, пыльников, цветов, плодов, стеблей, отростков, прививочных черенков, корневых побегов, семян, протопластов и каллий.

6. Семя F1, полученное скрещиванием растения огурца по любому из пп.1-3, со вторым растением огурца или растением другого сорта, предпочтительно из ряда огурцов, который включает желаемые с коммерческой точки зрения характеристики, где указанное семя включает по меньшей мере один маркерустойчивости к клостеровирусу, выбранный из группы, состоящей измаркеровE16/M50-244, E16/M50-188 и E11/M48-251 и, по меньшей мере одногомаркераустойчивости к мучнистой росе, выбранного из группы, состоящей из:

маркераоднонуклеотидного полиморфизма 39TG в SEQ ID NO:1,

маркераоднонуклеотидного полиморфизма 29GA в SEQ ID NO:2,

маркераоднонуклеотидного полиморфизма 193CT в SEQ ID NO:3,

мутации вставки 5'-AATTT-3' в позиции 221 в SEQ ID NO:4, и

маркеровE16/M50-F-194, E11/M48-F-251, E23/M38-M001, E23/M40-M003, E24/M46-M002, E24/M46-M003, E12/M91-M003, E26/M43-M003, E14/M59-F-134 и E14/M59-F-200.

7. Семя по п.6, где указанное второе растение огурца является чувствительным к клостеровирусу и где указанный по меньшей мере один маркерустойчивости к мучнистой росе представлен в виде гомозиготы.

8. Семя по п.6 или 7, где указанное второе растение огурца является инбредным растением.

9. Гибридное растение, полученное выращиванием семени по любому из пп.4-8.

10. Часть гибридного растения по п.9.

11. Часть растения по п.10, где указанная часть растения выбрана из пыльцы, семязачатков, листьев, корней, кончиков корней, пыльников, цветов, плодов, стеблей, отростков, побегов, корневых побегов, семян, протопластов и каллий.

12. Способ отбора растения, которое является устойчивым к клостеровирусу огурцов и к мучнистой росе огурцов, где указанное растение является растением вида Cucumis sativus, указанный способ включает анализ для определения маркера, где указанный анализ включает стадии:

а) обнаружения в геноме указанного растения наличия по меньшей мере одного маркера, связанного с устойчивостью к клостеровирусу, выбранного из группы, состоящей измаркеровE16/M50-244, E16/M50-188 и E11/M48-251, и

b) обнаружения в геноме указанного растения наличия по меньшей мере одного маркера, связанного с устойчивостью к мучнистой росе, выбранного из группы, состоящей из:

маркераоднонуклеотидного полиморфизма 39TG в SEQ ID NO:1,

маркераоднонуклеотидного полиморфизма 29GA в SEQ ID NO:2,

маркераоднонуклеотидного полиморфизма 193CT в SEQ ID NO:3,

мутации вставки 5'-AATTT-3' в позиции 221 в SEQ ID NO:4, и

маркеровE16/M50-F-194, E11/M48-F-251, E23/M38-M001, E23/M40-M003, E24/M46-M002, E24/M46-M003, E12/M91-M003, E26/M43-M003, E14/M59-F-134 и E14/M59-F-200.

13. Способ по п.12, в котором стадия включает:

обнаружение наличия в геноме указанного растения по меньшей мере одного маркера, связанного с первым QTL, придающим устойчивость к мучнистой росе огурцов, показанным SNPмаркером39ТG в SEQ ID NO:1, SNPмаркером 29GA в SEQ ID NO:2 имаркерамиE16/M50-F-194, E11/M48-F-251, E23/M38-M001; и

обнаружение в геноме указанного растения наличия по меньшей мере одногомаркера, связанного со вторым QTL, придающим устойчивость к мучнистой росе огурцов, показанным SNPмаркером193CT в SEQ ID NO:3, мутацией вставки 5'-AATTT-3' в позиции 221 в SEQ ID NO:4, имаркерамиE23/M40-M003, E24/M46-M002, E24/M46-M003, E12/M91-M003, E26/M43-M003, E14/M59-F-134 и E14/M59-F-200.

14. Способ по п.12, где способ включает:

а) предоставление образца геномнойДНКиз указанного растения;

b) получение указанного по меньшей мере одногомаркера, связанного с устойчивостью к клостеровирусу, и указанного по меньшей мере одногомаркера, связанного с устойчивостью к мучнистой росе, в указанном образце геномнойДНКиз указанного растения.

15. Способ по п.13, где способ включает:

а) предоставление образца геномнойДНКиз указанного растения;

b) получение указанного по меньшей мере одногомаркера, связанного с устойчивостью к клостеровирусу, и указанного по меньшей мере одногомаркера, связанного с устойчивостью к мучнистой росе, в указанном образце геномнойДНКиз указанного растения.

16. Способ по п.14, в котором указанная стадия b) включает применение по меньшей мере одного набора праймеров, для определения указанногомаркера(ов), или применение по меньшей мере одного зонда нуклеиновой кислоты с последовательностью оснований, которая, по существу, комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты, определяющей указанныймаркер,и зонда для нуклеиновой кислоты, который специфически гибридизируется в жестких условиях с последовательностью нуклеиновой кислоты, определяющей указанныймаркер(ы).

17. Способ по любому из пп.12-16, в котором дополнительно доказывают, что указанныемаркерынаходятся на той же самой хромосоме, указывает на то, что они присутствуют и в фазе сцепления, например, путем демонстрации пониженной сегрегации междумаркерамив экспериментах по скрещиванию, когда их сравнивают с несцепленнымимаркерами.

18. Растение, отобранное способом по любому из пп.12-17.

19. Способ получения растения вида Cucumis sativus, причем у растения показана устойчивость к клостеровирусу огурцов и к мучнистой росе огурцов, включающий стадии:

а) отбора первого растения огурца, которое содержит хромосомальный регион, который придает устойчивость к клостеровирусу огурца, путем обнаружения в геноме указанного растения по меньшей мере одногомаркера, связанного с QTL, придающим устойчивость к клостеровирусу огурцов, выявленыймаркерамиE16/M50-244, E16/M50-188, и E11/M48-251;

b) отбора второго растения огурца, которое содержит по меньшей мере один хромосомальный регион, который придает устойчивость к мучнистой росе, путем обнаружения в геноме указанного растения по меньшей мере одногомаркера, связанного с первым QTL, придающим устойчивость к мучнистой росе, показанным следующимимаркерами:

маркероднонуклеотидного полиморфизма 39TG в SEQ ID NO:1,

маркероднонуклеотидного полиморфизма 29GA в SEQ ID NO:2, и

маркерыE16/M50-F-194, E11/M48-F-251, E23/M38-M001;

или путем обнаружения в геноме указанного растения по меньшей мере одногомаркера,связанного со вторым QTL, придающим устойчивость к мучнистой росе, показанным следующимимаркерами:

маркероднонуклеотидного полиморфизма 193CT в SEQ ID NO:3,

мутация вставки 5'-AATTT-3' в позиции 221 в SEQ ID NO:4, и

маркерыE23/M40-M003, E24/M46-M002, E24/M46-M003, E12/M91-M003, E26/M43-M003, E14/M59-F-134 и E14/M59-F-200;

с) скрещивания указанныхрастенийстадии а) и стадии b) с получением семян F1;

d) выращивания некоторого количества семян F1 дорастенийF1, создавая следующую популяцию потомков из указанныхрастенийF1 путем скрещивания или самоопыления, и

e) отбора из числа следующихрастений-потомков растения, которое содержит по меньшей мере одинмаркер, связанный с QTL, придающим устойчивость к клостеровирусу огурца, как определено на стадии а) и по меньшей мере одинмаркер,связанный с QTL, придающим устойчивость к мучнистой росе огурца, как определено на стадии b).

20. Способ по п.19, где стадия отбора второго растения огурца на стадии b) включает отбор второго растения огурца с одним из указанных, первого или второго QTL, придающих устойчивость к мучнистой росе огурца, и где указанный способ дополнительно включает стадию:

f) отбора третьего растения огурца, имеющего другой чем указанные первый или второй QTL, придающие устойчивость к мучнистой росе огурца, (т.е. QTL, который не представлен в указанном втором растении огурца);

g) скрещиваниярастенийF1, полученных на стадии е) с указанным третьим растением огурца с получением последующихрастений-потомков, и

h) отбора из числарастений-потомков растения, которое содержит QTL, придающий устойчивость к клостеровирусу огурца, как определено на стадии а) и оба QTL, придающие устойчивость к мучнистой росе огурца, как определено на стадии b).

21. Способ по п.19, в котором стадия отбора растения огурца, содержащего хромосомальный регион, который придает устойчивость к мучнистой росе огурцов, как определено на стадиях b), e), f) или h), включает

обнаружение в геноме указанного растения по меньшей мере одногомаркера,связанного с первым QTL, придающим устойчивость к мучнистой росе огурца, показанным SNPмаркером39ТG в SEQ ID NO:1, SNPмаркером29GA в SEQ ID NO:2 имаркерамиE16/M50-F-194, E11/M48-F-251, E23/M38-M001; и

обнаружение в геноме указанного растения по меньшей мере одногомаркера,связанного со вторым QTL, придающим устойчивость к мучнистой росе огурцов, показанным SNPмаркером193CT в SEQ ID NO:3, мутацией вставки 5'-AATTT-3' в позиции 221 в SEQ ID NO:4, имаркерамиE23/M40-M003, E24/M46-M002, E24/M46-M003, E12/M91-M003, E26/M43-M003, E14/M59-F-134 и E14/M59-F-200.

22. Способ по п.20, в котором стадия отбора растения огурца, содержащего хромосомальный регион, который придает устойчивость к мучнистой росе огурцов, как определено на стадиях b), e), f) или h), включает

обнаружение в геноме указанного растения по меньшей мере одногомаркера,связанного с первым QTL, придающим устойчивость к мучнистой росе огурца, показанным SNPмаркером39ТG в SEQ ID NO:1, SNPмаркером29GA в SEQ ID NO:2 имаркерамиE16/M50-F-194, E11/M48-F-251, E23/M38-M001; и

обнаружение в геноме указанного растения по меньшей мере одногомаркера, связанного со вторым QTL, придающим устойчивость к мучнистой росе огурцов, показанным SNPмаркером193CT в SEQ ID NO:3, мутацией вставки 5'-AATTT-3' в позиции 221 в SEQ ID NO:4, имаркерамиE23/M40-M003, E24/M46-M002, E24/M46-M003, E12/M91-M003, E26/M43-M003, E14/M59-F-134 и E14/M59-F-200.

23. Способ по любому из пп.19-22, где по меньшей мере одна из стадий a), b), e), f) или h), включает стадию получения образца геномнойДНКиз указанного растения и обнаружения в указанном образце геномнойДНКпо меньшей мере одного указанногомаркера.

24. Способ получения растения вида Cucumis sativus, у которого показана устойчивость к клостеровирусу огурца и к мучнистой росе огурца, включающий стадии:

а) отбора растения вида Cucumis sativus, которое содержит хромосомальные регионы, которые придают устойчивость против клостеровируса огурца и мучнистой росы огурца путем осуществления способа любого из пп.12-17;

b) инбридинга указанного растения с получением гомозиготной линии растения указанных QTL;

с) скрещивания указанныхрастенийстадии а) и стадии b) с получением семян F1 и d) выращивание указанных семян F1 дорастений-потомков F1.

25. Растение или его часть, получаемые способом по любому из пп.19-24.

ПРИЛОЖЕНИЕ З

Заявка на изобретение: 2008139096