36.Серологическая диагностика вир болезней. Назначение, виды серолог реакций.

В основе всех серологических реакций лежит взаимодействие антигена и антитела с образованием иммунных комплексов, которые можно обнаружить в тестах in vitro. Реакции: иммунодиффузии (диффузионной преципитации), иммуноэлектроосмофореза, связ комплемента,задержки гемагглют, непрямой гемагглют, задержки гемадсорбции, нейтрализации, иммунно-фрментн анализ.

В реакциях обязат прин участ 2 компонента: АГ и АТ. АГ – чужеродное в-во белковой природы, кот в ответ на введение или попад в орг выз выработку АТ. Аг различ группоспецифич (для группы вирусов), штаммоспецифич.

В кач АГ исп: пустулы и афты, надосад жид-ть, получ после Ц , мат, получ после заражен кур эмбр, культуральн жидк после термолизиса (в гомогенезатор, развод рост средой, титрование, разлив по флаконам, ампулам, высушивание). АГ мб живой и убитый (убита нк, а белк об ост)

АТ выр органами имм сист (Т-клетками) в ответ на проникн в орг АГ.

5 видов: A (сывороточн и секреторн – в железах); G (продуц после встречи М с АГ, при повторном проникновении АГ – сразу продуцир); M(перв встреч АГ, даёт маркеры для макрофагов); E(связ с гиперчувствит немедл типа);D

Различают АТ: комплементсвяз, преципитирующие, агглютинир, вируснейтрализующие.

37. Реакция диффузионной преципитации (рдп, рид).

Простая серологич реакц, прин уч 2 компонента: АГ и АТ (1 из них бывает неизвестен)

Цель: идентифицир выделенный вирус и опред налич специфич АТ в сыв-ке.

Ставят по методу Оухтерлони: при внесении АГ и сыворотки в агар, они диффундируют в его толще навстречу друг другу, в месте встречи – полосы преципитации серо-белого цвета.

Методика: исп голодный агар фирмы Диффко (прозрачный), готовят из него 1% р-р и доб 0,5% NaCl, став на вод баню до полн распл агара, разлив по чашкам Петри, после застыв при пом спец пробойника дел лунки, оплавляют из на горелке для предупр подтек компонентов под толщей агара. В центр лунку – известный компонент (АГ или АТ), в периферич – неизв (АГ или АТ), на пов-то – комочек ваты, смоч дист водой, пом в термостат. Р учит через 24-48-72 часа. + - на границе между центр и порифер лунками – полосы преципитации.

Контроли:1 с завед положит сыв и АГ, 2 с отр сыв и АГ.

Ставят при диагностике лейкоза КРС, болезни Марека, инф.бруциальн болезни.

38. Реакция гемагглютинации.

Не серологическая р.предложена Херстом в 1941 году (эритр цыплят склеив при добавлен к ним вир гриппа). Сущность: на пов-ти эритроцтов имеются рецепторы мукопротеидной природы, а на пов-тях гемагглют вирусов – АГ. При встреч АГ с эритр происх адсорбция вируса на пов-то эритроцита благодаря ферменту муциназе, причём вирус может адсорбироваться на пов-ти неск эр-тов. В рез адсорбции – «сеточка», однако р непродолжит, муциназа разруш рецепторы, расп на эритроцитах, кот осед на дно пробирки в виде пуговки.

Компоненты: АГ и эритроциты.

Цель: Выяснить, явл ли вирус гемаггл, опред титр вируса (идентифицир не можем, тк отсутств сыв-ка)

Методика: Р став в плексиглаз планшетах. В лунки вносят по 0,2 см куб физраствора, в 1 лунку – вирус в развед 1 к 10, перемеш, перенос во 2, в 3, 4…(завис от предпол титра вируса), из последн лунки 0,2 см3 удал. Общий объём жидкости в пробирках – 0,2 см3. Затем в кажд лунку внос 1% эритроциты в объёме 0,2 см3. Р идёт при комнатной т 20-30 мин (в лунках в 1 – зонтик, в посл – пуговка). 1ГАЕ – макс развед вируса, при кот набл агглют 50% эритр. Планшетку накл, где агглют – там «слёзка».

Контроль: физраствор + эритроциты.