31. Непрямой метод флюоресцирующих ат.

1. С использованием антивидовых сывороток.

На мазок, мазок-отпечаток, гистосрез нанос предположит специфич сыворотку, пом во влажную камеру при т 37 на 30 мин, препарат промывают, наносят ав сыворотку, меченую ФИТЦ, контакт во влажн камере 30 мин при т 37, препарат промывают, смотрят под иммерс увелич люм микроскопа (+ - свечение, - - тёмный фон).

(ав сыворотку получают на биокомбинатах путём гипериммунизации кроликов сывороткой крови того вида животного, на котором была наработанапредположит специфич сыворотка, теАТ в спец сыв-ке становятся АГ для ав сыв_ки, обр комплекс АГ+АТ+АВС+ФИТЦ).

2.С использованием антикомплиментарных сывороток.

Аналог реакции связ копмлемента (2 сист, 5 компонентов). На мазок, отпечаток, гистосрез наносят предположит специфич сыв-ку, комплемент морской свинки, контакт во влажной камере 30 мин т 37, препарат промывают, наносят ак сыв-ку, меч флюорохромн красит, контакт во влажн кам 30 мин т 37, промывают, микроскопируют под имм увелич люм микроскопа. (+ - свечение, - - тёмный фон). (ак сыв-ку получ набиокомб путём гипериммунизацией кроликов сыв крови или компл морск свинки. Для кролика она явл АГ, на кот выр АТ, это и есть ак сыв-ка, её метят фитцем, в реакции комплемента для неё будет являться АГ, вследствие обр комплекс, кот будет светиться благодаря фитцу)

32. Куриные эмбрионы, отбор, подготовка к заражению, применение.

Преимущества: экономич выгода, не имеют своей иммунной системы, на вир не вырабат АТ, скорлупа предотвр проникновение в него бактерий и вирусов извне, не треб спец ухода.

Условия: яйца для инкубации берут из благополучныз по заболеванию районов (хозяйств), яйца дб оплодотворены (пом в инкубатор, 3-4 суток инкубирования, в овоскоп, удал брак яйца), инкубируют не позднее 20 дней после оплодотв, яйца с белой скорлупой, дб чистыми (мыть нельзя).

Применение: выделение вирусов из патмат, поддержание вирионов в усл лаб, биомодель для постановки РН, наработка вакцин.

33. Строение куриного эмбриона (рисунок), методы, техника заражения.

Методы: на ХОА аболочку, в желточный мешок, в амнион, в тело эмбриона, в кровеносн сосуды (2 последних редко исп в связи с травматичностью)

Техника заражения: В ХОА оболочку:

1.Удаляют скорлупу в районе пуги, пинцетом приподнимают подскорл оболочку, шприцом вводят вируссод мат в объёме 0,2 мл, сверху одевают стекл колпачок, края парафинируют, чтоб воздух не проходил.

2.Под контролем овоскопа опред границу пуги, выпил треугол отверст на границе пуги и ХОА об, пинцетом приподн подскорл об, внос вируссод мат.

3.Под овоскопом опред место предлеж эмбриона, яйцо кладут горизонтально и со стор предлеж эмбр выпил квадратн отверстие, выруссод мат наносят на ХОА об, для этого параллельно верхней части пуги пробойником делают отверстие, при помощи груши отсас воздух из пуги, в рез-те обр искусственная пуга в районе выпил окошк, приподн подскорл об-ку, нанос вируссод мат. Большое отв заклеивают пластырем, маленькое – парафинируют.

Заражение в ХАО полость:

1.Под овоскопом отмечают границу пуги, пробойником дел отверстие в верхн части пуги и шприцом вводят вс мат на глубину 0,2 см ниже очерченной границы пуги, отверстие парафинируют.

2.Под овоскопом опр место предлеж эмбр, яйцо кладут горизонтально в верхнем предлеж эмб, шприцом вводят вс мат в бессосудист участок на глубину 0,2 см.

Заражение в желточный мешок:

1.Под контролем овоскопа наход место предлеж эмбр, пробойником дел отверст в районе пуги, вносят шприцом вс мат под углом 45 градусов к месту предлеж эмбр на глубину 0,5 см, отверстие парафинируют.

2. Горизонтально нижнему предлеж эмбр пробойником дел отверст в бессосуд полости и внос вс мат на глубину 0,5 см.

Заражение в амнион:

Удал скорлупу в районе пуги, приподн подскорлуп оболочку пинцетом, другим пинцетом захват амнион с эмбрионом, подтягивают его к краю яйца, вводят в амнион шприцом вс мат.

Заражённые эмбр помещ в термостат, наблюд ведут в теч 3-4 суток. После гибели эмбр – в холодильник, затем вскрывают.