Методичка по иммунологическим препаратам

–Бактериофаг клебсиеллезный поливалентный очищенный от метаболитов бактерий, жидкий – содержит вирусы против клебсиелл озены, пневмонии и риносклеромы. Выпускают в ампулах по 20,0 и 5,0 мл. Применяют для лечения клебсиеллезных инфекций респираторного тракта.

–Бактериофаг стрептококковый жидкий – фильтрат фаголизатов патогенных стрептококков, содержит живой стрептококковый полифаг. Выпускают в ампулах по 2,0 и 10, 0 мл. применяют для лечения стрептококковых инфекций.

–Бактериофаг стафилококковый жидкий – содержит живой вирулентный стафилококковый бактериофаг. Является фильтратом фаголизата коагулазоположительных стафилококков. Применяется для лечения ран, полостей и поверхностей, инфицированных патогенным стафилококком, а также для лечения стафилококкового дисбактериоза.

–Бактериофаг стафилококковый на мазевой основе –

выпускается по 10,0 мл во флаконах. Применяют для лечения гнойных ран.

–Бактериофаг стафилококковый в аэрозольной упаковке –

выпускают в баллонах по 25,0 мл. Применяют для санации бактерионосителей и воздуха больничных помещений.

–Пиобактериофаг поливалентный очищенный (от метаболитов бактерий) – смесь фаголизатов стафилококков, стрептококков, эшерихий, синегнойной палочки, протеев и клебсиелл, содержащих бактериофаги. Препарат активен в отношении возбудителей гнойносептических инфекций и применяется для лечения фурункулеза. Курбункулеза, абсцессов, гнойных ран любой локализации, урогенитальных и кишечных инфекций.

–Пиобактериофаг комбинированный жидкий – представляет собой смесь стерильных очищенных фаголизатов стафилококков, стрептококков, протеев, псевдомонас аэругиноза и кишечной палочки. Применяется для лечения гнойно-воспалительных и кишечных инфекций.

–Бактериофаг против клебсиелл и энтеробактеров поливалентный жидкий – содержит вирусы против клебсиелл и бактерий рода энтеробактер. Применяют для лечения кишечных инфекций и лечения дисбактериозов.

В настоящее время разработаны ассоциированные препараты, состоящие из бактериофагов и бактерий облигатной микрофлоры

49

кишечника. Например, колибактерин с протейным бактериофагом – рекомендуется для лечения дисбактериозов кишечника.

ЧАСТЬ 2. ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ

НА ОСНОВЕ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ

К иммунобиологическим препаратам на основе антител

относятся:

–иммунные сыворотки;

–иммуноглобулины (цельномолекулярные и доменные);

–моноклональные антитела;

–иммунотоксины, иммуноадгезины;

–абзимы (антитела-ферменты).

Глава 4. Сыворотки и иммуноглобулины

Применяются с целью экстренной профилактики и лечения ряда инфекционных заболеваний. Профилактические дозы значительно меньше лечебных. Профилактически их вводят внутримышечно лицам, имеющим контакт с больным или иным источником инфекции (ранее не болевшим и не привитым против соответствующей инфекции). С лечебной целью сывороточные препараты вводят в

больших дозах внутримышечно.

Готовые антитела в составе препаратов иммунных сывороток и иммуноглобулинов при введении в организм специфично связываются с возбудителями заболеваний или их токсинами, образуют иммунные комплексы, которые затем элиминируются из организма с помощью фагоцитов и активированного по классическому пути комплемента.

Преимущество сывороток и иммуноглобулинов перед вакцинными препаратами, используемыми для активной иммунизации, состоит в быстроте создаваемого иммунитета, что особенно важно для профилактики заболеваний с коротким инкубационным периодом и лечения уже развившейся болезни.

Однако, в отличие от вакцин, иммунобиологические препараты на основе антител формируют кратковременный иммунитет. При введении сывороточных препаратов иммунитет наступает через несколько часов и сохраняется 2–3 недели после введения

50

гетерогенных препаратов и в течение 4–5 недель – гомологичных препаратов.

Иммунные сыворотки и иммуноглобулины по способу получения подразделяются на:

–гетерогенные – полученные от животных;

–гомологичные – полученные из сыворотки переболевших людей или специально иммунизированных людей-доноров либо сыворотки из плацентарной и абортной крови.

Производство гетерогенных иммунных сывороток и иммуноглобулинов осуществляется в несколько этапов:

–Гипериммунизация животных (лошадей, ослов, крупного рогатого скота) введением через определенное время возрастающих доз антигенов. В качестве антигенов используют анатоксины, токсины, убитые и живые микробные клетки и вирусы.

–Получение нативных сывороток путем кровопускания и удаления из крови форменных элементов. Иммунные сыворотки, полученные от животных, называются гетерологичными так как они содержат чужеродные для человека сывороточные белки.

–Очистка сывороток от балластных компонентов.

–Выделение и концентрирование иммуноглобулинов –

производится различными физико-химическими методами. Наиболее распространенным является метод «Диаферм-3»,

заключающийся в ферментативном гидролизе (пепсином) сывороточных белков с последующим осаждением балластных

компонентов (термоденатурацией при 58 °С). Осаждение иммуноглобулинов производится 34 %-ным раствором сульфата аммония. Сульфат аммония удаляется путем диализа в фосфатном буфере против проточной воды. Балластные белки извлекаются хлороформом (мертиолятом, фенолом) и отделяются с помощью сепарирования.

– Осветление и стерилизация сывороток производится на бактерийных фильтрах. После чего осуществляется концентрирование сывороток.

В процессе производства иммунных сывороток удаляются альбумины и большая часть альфа-глобулинов. В качестве активной фракции остаются гамма- и бета-глобулины. В результате глубокого изменения молекул антител при протеолизе уменьшается токсическое действие этих белков на организм человека

51

Метод «Диаферм-3» не позволяет достичь расщепления иммуноглобулинов до F (аЬ)2-фрагментов и глубоко гидролизовать неиммунные белки, поэтому постоянно усовершенствуется с целью повышения удельной активности сывороточных препаратов, уменьшения их токсичности (за счет остаточных концентраций хлороформа и др.), повышения производительности производства.

С целью уменьшения потерь антитоксинов в сывороточных препаратах применяется щадящий ферментолиз и осаждение балластных компонентов при более низких температурах (38 °С) и РН = 3,6 с заключительным центрифугированием диализата на сверхцентрифугах СГО-100-750 при 15 000 об/мин. Для очистки и концентрации гетерологичных сывороток применяют спиртовой метод фракционирования (осаждение белков 0,4 %-ным раствором риванола, отстаивание, декантирование, фильтрация раствора, высаливание риванола).

Более совершенные сывороточные препараты получают путем совмещения частичного ферментолиза иммуноглобулинов и иммуносорбции (метод специфического антигенного извлечения и соответственно максимальной очистки антител). Применение иммуносорбентов, приготовленных на основе геля гидрата окиси аллюминия (или полиакриламидного геля, цианбромированной сефарозы 4В) из соответствующих анатоксинов, повышает в 4–5 раз удельную активность ферментированных сывороток; содержание антитоксинов в них составляет до 95–98 %.

Недостатки гетерогенных сывороточных препаратов:

Во-первых, они обеспечивают иммунитет на меньший срок по сравнению с гомологичными антителами. Уже через 1–2 недели после первичного введения гетерологичные антитела не обнаруживают в крови. Быстрое выведение их из организма обусловлено происходящим естественным распадом белковых молекул. Повторное применение сокращает время пребывания антител до 3–5 дней в связи с нейтрализующим действием ранее образовавшихся антител к сывороточному белку.

Во-вторых, введение гетерогенных сывороточных препаратов может сопровождаться возникновением побочных реакций (сывороточной болезни, анафилактического шока). Наибольшую опасность представляет собой анафилактический шок, развивающийся обычно у людей, ранее получавших сыворотку, то есть сенсибилизированных гетерогенным белком.

52

Меры предупреждения развития анафилактического шока и

чувствительности к чужеродным сывороточным белкам с помощью специальной внутрикожной пробы. С этой целью 0,1 мл разведенной 1 : 100 сыворотки вводят внутрикожно и через 20–30 минут учитывают результат реакции. Пробу считают положительной при наличии папулы диаметром более 1,0 см и окруженной широкой зоной гиперемии. Последующая профилактика развития побочных

реакций в течение 30 минут – остальное ее количество.

– При положительной внутрикожной пробе введение сыворотки показано лишь при прямой угрозе жизни больного. В этих случаях вначале подкожно вводят разведенную 1 : 100 сыворотку через 20минутные интервалы в дозах 0,5; 2,0; 5,0 мл. При отсутствии реакции на эти дозы переходят на введение 0,1 мл не разведенной сыворотки подкожно и через 30 минут – остальной ее дозы. Введение сыворотки осуществляется под наблюдением врача для проведения в случае необходимости противошоковой терапии.

Предпочтительнее гетерогенных сывороточных препаратов –

гомологичные иммунные сыворотки и иммуноглобулины.

Для их получения используют сыворотки переболевших людей или специально иммунизированных людей-доноров либо сыворотки из плацентарной, а также абортной крови, содержащие антитела к ряду возбудителей инфекционных болезней вследствие вакцинации или перенесенного заболевания. Они практически лишены реактогенности.

4.1. Лечебно-профилактические сыворотки

Иммунные лечебные и профилактические сыворотки известны более 100 лет. В настоящее время разработаны и применяются не только антитоксические сыворотки, но и противобактериальные и противовирусные сыворотки.

Антитоксические сыворотки содержат антитоксины (антитела против токсинов). Для их получения проводят гипериммунизацию

53

животных сначала возрастающими дозами анатоксинов и в заключение – несколькими дозами токсинов.

Действие антитоксинов направлено на быструю нейтрализацию

заболеваний (анаэробной раневой инфекции клостридиальной этиологии, ботулизма, столбняка, дифтерии и др.).

Лечебно-профилактические антитоксические сыворотки относятся к титруемым препаратам. Их специфическую активность или титр выражают в антитоксических или международных антитоксических единицах ME (то есть количеством антитоксина, связывающего определенное количество токсина в Dlmin). Определяют титр в реакции флоккуляции по анатоксину или токсину известной силы, выраженной в Lf (флоккуляционная доза). Принимая во внимание то, что инициальная флоккуляция наступает при взаимодействии эквивалентных количеств токсина и антитоксина (1 Lf – 1МЕ), подсчитывают титр антитоксической сыворотки и выражают его в Международных антитоксических единицах (ME). За 1 ME принимают такое минимальное количество антитоксина, которое способно нейтрализовать определенную дозу токсина, выраженную в стандартных единицах (Dlm). В зависимости от вида сыворотки 1 ME нейтрализует различные дозы соответствующих токсинов. Так, 1 ME противоботулиновой сыворотки способна нейтрализовать 10 000 Dlm токсина для мышей весом 18–20 г, 1 ME противостолбнячной сыворотки нейтрализует 1000 Dlm токсина для морской свинки весом 350 г, 1 ME противодифтерийной сыворотки нейтрализует 100 Dlm токсина для морской свинки весом 250 г.

Для оценки специфической активности лошадиных антитоксических сывороток предложен новый метод (1998 г.): реакция бактериосорбции иммунных комплексов (по сути реакция КОА [коагглютинации]). Метод позволяет определить полноту ферментолиза иммуноглобулинов и удельный вес F(ab)2-фрагментов.

В настоящее время производят следующие антитоксические сыворотки, очищенные по методу «Диаферм-3»:

– Противоботулинические лечебно-профилактические антитоксические сыворотки типов А, В, С, F, Е.

Препараты выпускают либо в виде комплекса моновалентных сывороток каждого типа, либо в виде поливалентной сыворотки, содержащей антитоксины нескольких типов. Одна лечебная доза

54

антитоксинов типов АЕ – 10 000 ME, типа В – 5 000 ME (сыворотки типов С и F в настоящее время в комплект не входят из-за ограниченной потребности в них). Применяют для лечения и профилактики ботулизма. С лечебной целью, при первых признаках заболевания, вводят внутривенно поливалентную сыворотку. После установления типа токсина – моновалентную сыворотку. С профилактической целью введение сывороток в дозе 1000–2000 ME (каждого типа).

– Противогангренозные моно- и поливалентные сыворотки

выпускают в виде поливалентного препарата, содержащего антитоксины против трех видов возбудителей (Cl. perfringens, Cl. novii, Cl. septicum), а также в виде моновалентных препаратов, включающих антитоксины только одного вида. В 1 мл моновалентной сыворотки содержится 10 000 ME. С лечебной целью

–Противостолбнячная сыворотка лошадиная очищенная концентрированная – содержит 1200 ME в 1 мл столбнячного антитоксина (1 профилактическая доза). Для экстренной профилактики столбняка сыворотку вводят подкожно в дозе 3 000 ME. При лечении, в зависимости от тяжести заболевания, введение препарата производят внутримышечно, внутривенно, внутрь спинномозгового канала в больших дозах (10 000–20 000 ME). Для экстренной профилактики выпускаются ампулы по 3 000 ME.

–Противодифтерийная сыворотка применяется, в основном, с

терапевтической целью. Активность препарата 10 000–20 000 ME. Для лечения сыворотку вводят внутримышечно или подкожно в дозе, которую определяют в зависимости от тяжести заболевания (от 5 000 до 6 000 ME). Форма выпуска по 10 000 ME антитоксина (1 доза) и 20 000 ME (2 дозы).

–Бивалентная противостафилококковая гетерологичная сыворотка, содержащая антитела против лейкоцидина и гемолизина стафилококка.

–Бивалентные противодифтерийная и противоботулиновая сыворотка.

Повышение качества антитоксических сывороток достигается осаждением псевдоглобулинов с последующим диализом в

55

фосфатном буфере и фракционированием методом ионной хроматографии на ДЕАЕ целлюлозе, ДЕАЕ сефадексе или гельхроматографией, зональным электрофорезом, фильтрацией на сефадексе Г-200 в полиакриламидном геле.

В настоящее время перспективным является получение высокоочищенных гетерологичных антитоксических сывороток с помощью иммуносорбции. Получены с помощью ферментолиза и иммуносорбции высокоспецифичный дифтерийный антитоксин и гетерологичный антистафилококковый препарат с высокой удельной активностью и пониженной анафилактогенностью. Получены высокоочищенные препараты из частично ферментированных противогангренозных сывороток, выделением F(аЬ)-фрагментов антител с помощью гелевых иммуносорбентов.

Антивирусные сыворотки содержат вируснейтрализующие антитела, действие которых приводит к инактивации вирусов. Антивирусные сыворотки получают из крови животных, гипериммунизированных соответствующими инактивированными вирусами. Очистку нативных сывороток осуществляют методом спиртового фракционирования на холоду. Вируснейтрализующие антитела представлены главным образом гамма-глобулиновой фракцией сывороточных белков. Активность сывороток выражается в титрах вируснейтрализующей и гемагглютинирующей активности. Выпускают гриппозную, коревую, антирабическую сыворотки.

–Антирабическая сыворотка выпускается в ампулах по 5,0 мл

(1 000 ME). Половину этого количества вводят внутримышечно, другую половину – вглубь раны.

Антибактериальные сыворотки содержат агглютинины,

бактериолизины, опсонины-антитела, способствующие фагоцитозу и лизису микробов в организме.

Активность выражается в агглютинирующей и преципитирующей активности. Сыворотки: противотифозная, дизентерийная, противочумная. К сывороточным препаратам относят также гипериммунную человеческую плазму.

–Антистафилококковая плазма – это жидкая часть крови людей, иммунизированных стафилококковым адсорбированным анатоксином. Препарат содержит стафилококковые антитоксины. Выпускают его в двух видах: замороженном (в стерильных пластиковых мешках объемом от 10 до 250 мл) и сухом (в герметически закрытых флаконах по 125 мл) состоянии. Показания к

56

применению антистафилококковой плазмы те же, что и для иммуноглобулина. Противопоказаний для местного введения нет. Внутривенное введение не проводят лицам с повышенной чувствительностью к белку.

–Плазма противопротейная человеческая – от доноров,

иммунизированных протейной вакциной. Содержит противопротейные антитела в титре 1 : 640 и выше.

–Плазма антитоксическая синегнойная человека – из крови доноров, иммунизированных анатоксином синегнойной палочки. Плазма синегнойная человеческая – из крови доноров, иммунизированных поливалентной синегнойной вакциной.

В настоящее время антивирусные и антибактериальные сыворотки служат главным образом для получения иммуноглобулинов.

4.2.Иммуноглобулины

Иммуноглобулины – очищенные и концентрированные препараты гамма-глобулиновой фракции сывороточных белков животных (гетерологичные) и человека (гомологичные), содержаobt антитела в высоких титрах. В практике такие биологические препараты называют «гаммаглобулины» или «иммуноглобулины». В сравнении с нативной сывороткой они быстрее реагируют и прочнее связываются с антигеном. Основной класс иммуноглобулинов в препаратах – IgG. Иммуноглобулины получают из иммунных сывороток путем фракционирования (спиртовым методом на холоду по Кону, риванолспиртовым методом, методом аффинной хроматографии, ультрафильтрации).

Для повышения специфичности и активности антител из молекулы иммуноглобулина выделяют только антигенсвязывающий участок (Fab-фрагменты). Такие иммуноглобулины получили название доменных антител. Их можно вводить внутривенно с целью экстренной профилактики, так как, связываясь с антигенами, они не активируют комплемент.

Гетерологичные иммуноглобулины:

– Иммуноглобулин антирабический лошадиный представляет собой выделенные из крови гипериммунизированных вирусом бешенства лошадей активные бета-глобулиновые фракции. Выпускается в жидком виде в ампулах и флаконах по 5 и 10 мл с

57

активностью не ниже 800 МЕ/мл. В коробки вкладываются ампулы с разведенным в 100 раз препаратом, который используют для предварительного определения чувствительности к лошадиному белку. Внутрикожная проба считается положительной, если диаметр папулы превышает 1 см и имеется разлитая краснота. Вводят препарат внутримышечно, часть иммуноглобулина можно ввести подкожно вокруг раны. Применяют его для профилактики бешенства. При появлении клинических признаков (гидрофоби) лечение неэффективно.

–Иммуноглобулин против клещевого энцефалита (гамма-

глобулин противоэнцефалитный лошадиный) получают из сыворотки крови лошадей, гипериммунизированных вирусом клещевого энцефалита. Препарат содержит в высоком титре антитела, в основном гамма-глобулиновую фракцию с небольшой примесью бета-глобулиновой (5–30 %). Применяют для лечения и профилактики клещевого энцефалита, а также назначают людям в эндемических очагах в случае присасывания клещей.

–Иммуноглобулин против японского энцефалита из сыворотки лошадей.

–Иммуноглобулин против венесуэльского энцефаломиелита

лошадиный для профилактики венесуэльского энцефаломиелита у людей.

–Иммуноглобулин против лихорадки Эбола из сыворотки крови лошадей содержит вируснейтрализующие антитела к вирусу Эбола в титре 1:4096.

–Иммуноглобулин лептоспирозный (гамма-глобулин) –

поливалентный препарат, представляющий собой иммунологически наиболее активную фракцию сыворотки гипериммунизированных лептоспирозным антигеном волов. Содержит антитела против лептоспир. Предназначен для лечения лептоспирозов в первые 3–4 дня заболевания. Активность препарата оценивается по титрам реакции агглютинации. Агглютинационный титр всех поливалентных антител должен быть не ниже 1 : 8 000. Дозируют препарат по объему. Рекомендуется комбинированное лечение лептоспирозов гамма-глобулином и антибиотиками. Схема введения препарата (кратность, доза, интервалы) индивидуальна.

–Иммуноглобулин (глобулин) противосибиреязвенный

представляет собой выделенные из гипериммунных сывороток лошадей активные бета- и гамма-глобулиновые фракции (AT против

58