8. Иммуноцитохимический и иммуногистохимиеский анализ.
Иммуногистохими́ческое иссле́дование — метод микроскопического исследования тканей, обеспечивающий наиболее специфическое выявление в них искомых веществ и основанный на обработке срезов маркированными специфическими антителами к выявляемому веществу, которое в данной ситуации служит антигеном. Впервые способ окрашивания клеточных и тканевых компонентов с помощью специфических антител для микроскопического исследования был предложен A. Coons с соавт. в 1941 году; позднее были разработаны антитела, меченные не флуоресцентными красителями, а ферментами.
Прямой иммуногистохимический метод основан на реакции специфического связывания маркированных антител непосредственно с выявляемым веществом:
Рис. 10 Схематичное изображение прямого гистохимического метода.
Непрямой иммуногистохимический метод является более чувствительным, основан на том, что немаркированные первичные антитела связываются с искомым антигеном (выявляемым веществом), а далее уже их выявляют при помощи вторичных меченых антител, при этом первичные антитела служат для вторичных антигенами.
Маркировка антител производится путём их связывания с одной из следующих групп веществ:
флуоресцентные красители (родамин, флуоресцеин);
ферменты (щелочная фосфатаза, пероксидаза хрена) — далее выявляются гистохимически;
электронно-плотные частицы (коллоидное золото, ферритин)
Заключение:
Иммунохимические методы анализа имеют большое знаение в биологии, медицине. Благодаря иммуноцитохимическим и имммуногистохимиеским методам определяют наличие онкологии у пациентов; иммунофлюоресцентный метод импользуют в диагностике туберкулеза и других инфекционных заболеваний. Особое место среди иммунохимических методов анализа занимает иммуноферментный анализ.
В ИФА сочетается уникальная специфичность иммунохимического анализа с высокой чувствительностью определения ферментной метки. Чувствительность метода (под чувствительностью подразумевают минимальное выявляемое количество антител или антигена) определяется следующими факторами: аффинностью антител, предпочтительнее использование моноклональных антител; специфической активностью фермента; интенсивностью сигнала; чувствительностью учета сигнала. Различные варианты ИФА различаются по своей чувствительности. Отдельные варианты твердофазного ИФА позволяют выявлять в образце единичные молекулы. Средняя чувствительность ИФА – 10-9 –10-12моль.