Определение общих липидов по цветной реакции с сульфофосфованилиновым реактивом
Продукты распада ненасыщенных липидов, полученные в результате гидролиза липидов серной кислотой, образуют с реактивом, состоящим из фосфорной кислоты и ванилина, стабилизированный и окрашенный в красный цвет, комплекс. Интенсивность окраски комплекса пропорциональна содержанию общих липидов.
Техника определения. К 0,05 см3 опытного раствора (экстракт липидов) прибавляют 2,5 см3 концентрированной серной кислоты. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и помешают на 10 минут в кипящую водяную баню. Контрольную колбу ставят как опытную, но вместо экстракта липидов берут 0,05 см3 воды. Пробирки вынимают и охлаждают водой до температуры 18-25 0С. Из каждой пробирки отбирают по 0,2 см3 смеси и переносят в пробирку с 3 см3 фосфорнованилиновой смеси. После перемешивания пробы оставляют на 45 минут в темноте. Измеряют поглощение на ФЭК при 500-560 нм (зеленый светофильтр). Для построения калибровочного графика из основного раствора (стандартного) готовят рабочие стандарты, как указано в таблице 2.
Таблица 2 – Данные к построению калибровочного графика
определения липидов
|
№ пробы |
Основной стандартный раствор ванилина, см3 |
Хлороформ, см3 |
Концентрация липидов, мг/ см3 |
|
1 |
0,17 |
0,83 |
2 |
|
2 |
0,33 |
0,67 |
4 |
|
3 |
0,50 |
0,50 |
6 |
|
4 |
0,67 |
0,33 |
8 |
|
5 |
0,83 |
0,17 |
10 |
|
6 |
1,00 |
- |
12 |
Из каждого разведения берут по 0,05 см3, обрабатывают как опытные пробы.
Концентрацию липидов определяют по формуле
,
где Соп – концентрация липидов в опытной пробе; Аоп – поглощение опытного образца раствора; Аст – поглощение стандартного раствора; Сст – концентрация основного раствора стандартного.
Материалы, реактивы и оборудование. Серная кислота (концентрированная), ортофосфорная кислота (концентрированная), 0,6 %-й: раствор ванилина; фосфорнованилиновая смесь – 4 части концентрированной ортофосфорной кислоты смешивают с 1 частью 0,6 %-го раствора ванилина; хлороформ; стандартный раствор триолеина (12 мг/см3) в хлороформе; пробирки, пипетки на 0,1 см3 и на 1 см3, бюретки на 50 см3, водяная баня, фотоэлектроколориметр (ФЭК).
Качественное определение ненасыщенности жиров пробой с раствором брома
а) В пробирку помещают 15 капель 1 %-го раствора подсолнечного масла в четыреххлористом углероде и добавляют 1 мл бромной воды. Взбалтывают. Наблюдают и отмечают обесцвечивание раствора брома.
Объяснить опыт и написать реакцию на примере 1,2-диолео-3-линолеина.
б) В 3 пробирки вносят по 1 см3 1 %-х растворов подсолнечного масла, маргарина и коровьего масла в четыреххлористом углероде.
В каждую из пробирок приливают по каплям из бюретки 2 %-й раствор брома в том же растворителе до прекращения обесцвечивания растворов и установления устойчивой лимонно-желтой окраски раствора брома.
Отмечают по бюретке количество раствора брома, затраченное на каждый из образцов жира до приобретения указанной окраски, и располагают их в ряд по возрастающей степени ненасыщенности.
Написать реакцию на примере следующих глицеролов:
1,2-дистеаро-3-олеина;
1,3- диолео-2-линолеина;
1-пальмито-2,3-дилинолеина.