4.Какую качественную реакцию на белки можно использовать для их количественного определения?

Самым распространенным химическим методом количественного определения белка является колориметрический метод.Он основан на измерении интенсивности цветных реакций,развивающихся при взаимодействии белков с тем или иным специфическим реагентом.Чтобы рассчитать концентрацию белка,строят калибровочный график.Данный метод количественного определения белка основан на способности пептидных связей белков и полипептидов образовывать с ионами Сu в щелочной среде комплексное соединение фиолетового цвета,интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию белка не отличается высокой чувствительностью.Именно поэтому он применяется в тех случиях,когда содержание белка в исследуемом образце достаточно велико.Ход работы: построение калибровочной кривой.Для построения калибровочной кривой готовится раствор стандартного белка(альбумин или казеин) известной концентрации – 10мг/мл.Из стандартного раствора готовят разведения,по которым затем и будет построена калибровочная кривая.После приготовления разведенной из стандартного раствора проделывают следующее.1.В штатив размещают 5 пробирок,3 из которых представляет собой приготовленные разведения,содер. По 1 мл разведенного белка2.две другие содержать образец белка,коцентрация которого нужно определить,а шестая пробирка будет являться контролем.3.проводят биуретовую реакцию,разливая реактивы по след схеме:

Номер пробы	Количество белка в (мл)	Количество биуретового реактива в (мл)	Время инкубации	Показатель экстинкции1
1 2 3	1 1 1 1 1мл.НО(дист)	4 4 4 4 4	Оставить на 30 мин для проявления окраски
Опыт контроль

Через 30 мин измеряю показатель экстинкции каждой пробы на фотоэлектроколориметре,против Конт.раствора(пробирка-контроль) в кювете толщиной 1 см,при длине волны 540 -560нм(зеленый светофильтр).По полученным показателям экстинкции строят калибровочную кривую,отклад.по оси ординат значения экстинкции(),по оси абцисс – концент.белка(мг/мл).Содержание белка в исследуемом образце находят по построенной калибровочной кривой.

5. Как и для чего строится калибровочный график?

Калибровочный график - график, построенный по измерениям, выполненным для набора эталонных растворов. По оси ординат откладывается концентрация иона в % в логарифмическом масштабе, по оси абсцисс - величина потенциала. По графику с помощью интерполяции определяется концентрация определяемого иона в исследуемом растворе. Калибровочный график обычно строят в координатах оптическая плотность – объем стандартного раствора, чтобы избежать округления данных и уменьшения точности определения.При построении калибровочного графика (на миллиметровой бумаге) необходимо правильно выбрать масштаб с тем, чтобы точность вычислений соответствовала точности исходных данных и требуемой точности результата измерений. При этом разметка осей производится в масштабных единицах,а не по значениям экспериментальных величин.Для построения калибровочной кривой готовится раствор стандартного белка(альбумин или казеин) известной концентрации – 10мг/мл.Из стандартного раствора готовят разведения,по которым затем и будет построена калибровочная кривая.После приготовления разведенной из стандартного раствора проделывают следующее.1.В штатив размещают 5 пробирок,3 из которых представляет собой приготовленные разведения,содер. По 1 мл разведенного белка2.две другие содержать образец белка,коцентрация которого нужно определить,а шестая пробирка будет являться контролем.3.проводят биуретовую реакцию,разливая реактивы по след схеме:

Номер пробы	Количество белка в (мл)	Количество биуретового реактива в (мл)	Время инкубации
1 2 3	1 1 1 1 1мл.НО(дист)	4 4 4 4 4	Оставить на 30 мин для проявления окраски
Опыт контроль

Через 30 мин измеряю показатель экстинкции каждой пробы на фотоэлектроколориметре,против Конт.раствора(пробирка-контроль) в кювете толщиной 1 см,при длине волны 540 -560нм(зеленый светофильтр).По полученным показателям экстинкции строят калибровочную кривую,отклад.по оси ординат значения экстинкции(),по оси абцисс – концент.белка(мг/мл).Содержание белка в исследуемом образце находят по построенной калибровочной кривой.

6)Денатурация белка Денатурация белка.Под денатурацией понимают изменение пространственной структруры белков.,уменьшение или их полное подавление функциональной активности,растворимости или биологических свойств.Следует различать денатурация и деградацию белков.При деградации происодит фрагментация первичной структуры и образования фрагментов белковой маромалекулы.Денатурация не сопроваждаеться фрагментацией ,однако может происходить разрыв дисульфидных мостиков ,а также слабых водородных и гидрофобных связей.В результате подвергаеться четвертичная,третичная ,и меньшей степени вторичная структура.Денатуцирующие агенты делятся на химические и физические.К последним относятся прежде всего температурное воздействие,заморажевание или нагревание,а также давление и ультразвуковое воздействие.Химические агенты –это органические растворители(ацетон,хлорформ,спирт) кислоты,щелочи,соли тяжелых металлов.В лабороторной практике мы использовали мочевину,легко разрывающие водородные и гидрофобные связи.,при помощи них формируется третичная структура.Максимальное денатурирующее действие оба реагента проявляют при высоких концентрациях.Тепловая денатурация белков в растворах при 50-60С также связана с разрывом связей.Денатурация осуществляется в мягких условиях,часто оказывается обратимой,при удалении денатурирующего агента происходит восстановление нативной конформации белков.Денатурация изменяет как стабильность так и функциональность.При денатурации изменяеться форма белковой молекулы.Самый известный случай необратимой денатурации белка в быту — это приготовление куриного яйца, когда под воздействием высокой температуры растворимый в воде прозрачный белоков альбумин становится плотным, нерастворимым и непрозрачным. Денатурация в некоторых случаях обратима, как в случае осаждения(преципитации) водорастворимых белков с помощью солей аммония, и используется как способ их очистки^].Внешние проявления денатурации сводятся к потере растворимости, особенно в изоэлектрической точке, повышению вязкости белковых растворов, увеличению количества свободных функциональных SH-групп и изменению характера рассеивания рентгеновских лучей. Наиболее характерным признаком денатурации является резкое снижение или полная потеря белком его биологической активности (каталитической, антигенной или гормональной). При денатурации белка, вызванной 8М мочевиной или другим агентом, разрушаются в основном нековалентные связи (в частности,гидрофобные взаимодействия и водородные связи). Дисульфидные связи в присутствии восстанавливающего агента меркаптоэтанола разрываются, в то время как пептидные связи самого остова полипептидной цепи не затрагиваются. В этих условиях развертываются глобулы нативных белковыхмолекул и образуются случайные и беспорядочные структур

7)Приведите научное название трипептида Ала-Гли-Про.AланилГлицилПролин

8)Рассчитайте сколько различных пептидов может быть получено из 3 аминокислот.9 пептидов.

Ala-Gly-Val

Gly-Val-Ala

Val-Ala-Gly

CH₃-CH-COOH---H-CH-COOH---CH₃-CH-CH-COOH

/ / / /

NH₂ NH₂ H₃C NH₂

/ / /

H-CH-COOH---CH₃-CH-CH-COOH--- CH₃-CH-COOH

/ / / /

NH₂ H₃C NH₂ NH₂

/ / /

CH₃-CH-CH-COOH---CH₃-CH-COOH---H-CH-COOH

/ / / /

H₃C NH₂ NH₂ NH₂

9)Напишите структурные формулы a и b Д-глюкозы в проекции Хеоруса Формулы Хеуорса. Альтернативный способ изображения циклических структур моносахаридов известен как проекции Хеуорса и назван так в честь английского химика Уолтера Хеуорса (нобелевский лауреат, 1937 г.). В формулах Хеуорса пяти- и шестичленные циклические полуацетали представляют в виде плоских пяти- или шестиугольников, расположенных как бы перпендикулярно плоскости листа бумаги. Группы, присоединенные к углеродам кольца, располагают над или под плоскостью кольца и параллельно плоскости листа бумаги. В формулах Хеуорса аномерный углерод обычно записывают справа, а полуацетальный кислород – сзади него. Проекции Хеуорса - и -пиранозных форм D-глюкозы показаны ниже.

Проекции Хеуорса - и -форм D-глюкопиранозы