Определение глюкозы в крови

Лабораторная работа

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ГЛЮКОЗЫ В КРОВИ ЭНЗИМАТИЧЕСКИМ КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ.

Принцип метода

При окислении Д-глюкозы кислородом воздуха под действием фермента глюкозооксидазы образуется эквимолярное количество перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски полученного раствора пропорциональна концентрации глюкозы в пробе.

ХОД РАБОТЫ

	Опытная проба	Калибровочная проба	Холостая проба
Рабочий раствор, мл Сыворотка крови Калибратор,мл Вода дистил.	2,0 0,04 - -	2,0 - 0,04 -	2,0 - - 0,04

Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют 15 минут при 37⁰С или в течение 25 минут при 18-25⁰С. Через5-10 минут после начала инкубации пробирки интенсивно встряхнуть. После окончания инкубации измеряют оптическую плотность опытной и калибровочной проб против холостой пробы в кювете с толщиной поглощаемого слоя 5 мм при длине волны 490-540 нм.

Расчет концентрации глюкозы проводят по формуле:

Ео

С = -------------- х 10, где Ео – оптическая плотность опытной пробы;

Ек Ек – оптическая плотность калибровочной пробы;

10-концентрация глюкозы в калибраторе.

Результат:

Вывод:

1. Количественное определение глюкозы в моче с помощью диагностической тест-полоски «Глюкофан»,«Глюкотест»

Принцип теста: определение основано на специфической энзимотической реакции с использованием ферментов глюкозооксидазы и пероксидазы. Окисление глюкозы кислородом катализируется ферментом глюкозооксидазой. При этом образуется глюкозолактон и пероксид водорода, который в последующей реакции, катализируемой ферментом пероксидазой, окисляет хромогенную систему с образованием интенсивно окрашенных продуктов.

Ход работы:

Тест – полоску погружают в исследуемую мочу и немедленно вынимают. Через 20-30 секунд сравнивают окраску индикаторной зоны с цветной шкалой

Результат:

Вывод:

Метод однократной сахарной нагрузки. Сахарные кривые на занятии разбираются по результатам анализа: у больного, при построении сахарных кривых, наблюдалась следующая динамика уровня сахара (ммоль/л):

N	исходный уровень	30 минут	60 минут	90 минут	120 минут	Коэффициенты Рафальского и Бодуэна	При каком заболевании характерно
1	4,6	5,5	6,0	5,7	4,6		Алиментарная гирегликемия
2	4,5	9,0	7,7	6,3	4,5		Гепатит
3	4,7	7,9	11,3	10,1	9,8		Латентный сахарный диабет
4	6,0	9,0	12,4	12,7	12,4		Сахарный диабет
5	5,2	8,0	11,0	8,0	5,2		Гипертиреоз
6	3,2	3,8	4,2	3,8	3,2		Гликогеноз
7	2,9	3,3	4,0	2,7	2,7		Инсулома

Построить сахарные кривые и дать оценку в каждом случае.

Обучающие задачи

1.Мальчик спросил, почему при длительном пережевывании хлеба он ощутил во рту сладкий вкус. Объясните эту ситуацию.ответ: при гидролизе крахмала (под действием амилазы слюны ) образуется мальтоза, которая и придает сладковатый привкус

2.Пациент принял "peros" дозу инсулина, в 10 раз превышающую суточную, назначенную врачом для парэнтерального лечения. Изменится при этом содержание глюкозы в крови? Объясните. Ответ содержание глюкозы не изменится, так инсулин в желудочно-кишечном тракте гидролизуется на отдельные аминокислоты, поэтому инсулин всегда вводят парентерально

3.Блюда, приготовленные без соли, невкусные. Имеет ли добавление соли физиологический смысл или только вкусовой? Ответ Добавление соли к пище имеет несколько смыслов, в том числе- активация амилазы, так NaCl является изостерическим активатором, а другой смысл в том ,что при добавлении соли активируются в кишечнике транспортные белки для переноса глюкозы в кровь

4.При заборе крови медсестра не успокоила ребенка, он громко плакал и вырывался из рук. Биохимическое исследование выяснило существенное увеличение сахара в крови. Объясните механизм такого увеличения.

Возможно ли на основании проведенного исследования исключить у ребенка сахарный диабет? Ответ адреналин, через образованиецАМФ активирует гликогенфосфорилазу

( подключая каскадный механизм активации) разрушая при этом гликоген до свободной глюкозы, что и приводит к гипергликемии

5.В эксперименте животному произведена перевязка протока поджелудочной железы. Отразиться ли это на переваривании углеводов в желудочно-кишечном тракте? Почему? ОтветВ панкреатическом сокевырабатывается альфа-амилаза, гидролизующая декстрины крахмала и гликогена до мальтозы и изомальтозы,поэтому при перевязке протока поджелудочной железы нарушается переваривание углеводов

6.В детскую клинику поступила больная в возрасте 4 лет с жалобами на приступы с временной потерей сознания, частые носовые кровотечения, отставание в росте.

Из анализа: начиная с 8 месяцев отмечались ежемесячные приступы с временной потерей сознания и судорогами. Приступы начинались до еды или рано утром. С 1 года - частые носовые кровотечения. При внешнем осмотре: маленький рост, большой живот, непропорционально худые конечности, геморрагии на коже, "кукольное" лицо, гепатомегалия.

При лабораторном исследовании: сахар крови 2,9 ммоль/л, гиперлактатацидемия, гипертриглицеридемия, гиперурикемия. Отсутствует гипергликемическая реакция на введение глюкагона и адреналина. Объяснить с биохимической точки зрения наличие данной симптоматики.

Какое заболевание можно предположить? Как подтвердить предположение? Ответ у ребенка вероятно отсутствует фермент в печени глюкозо6 фосфатаза, болезнь Гирке, гликоген не распадается, а только синтезируется, при этом печень увеличивается, гликоген в мышцах окисляется до лактата, его содержание увеличивается , наибольшее его количество утилизируется в ГНГ, а он не может происходить, так как этот же фермент обслуживает и распад гликогена и ГНГ, подтверждается предположение введением адреналина, при котором увеличивается в крови не глюкоза, а лактат

7. К эндокринологу обратилась пациентка с жалобами на повышенный аппетит и избыточную массу тела.

При обследовании: рост 160 см, вес 120 кг, повышенное питание.

Биохимические исследования выявили: сахар крови 2,7 ммоль/л.

Оцените содержание сахара в крови и выясните причину гипогликемии.

Ваши рекомендации. Ответ можно предположить гиперинсулинизм – налицо анаболические эффекты гормона и гипогликемия

8. Через 30 мин. после съедания 100 г сахара содержание глюкозы в крови у пациента возросло в 1,5 раза, а после употребления 100 г хлеба оно не изменилось. Почему? Ответ Сахар является легкопереваримым углеводом, его переваривание происходит только под действием сахаро-изомальтазного комплекса, поэтому быстро увеличивает глюкозу крови, в то время как крахмал хлеба долго переваривается под действием амилазы панкреатической, а затем мальтазы, и поэтому глюкоза в крови не увеличивается

Тесты исходного уровня знаний

Выберите один или несколько правильных ответов

ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ КОНЦЕНТРАЦИЯ ГЛЮКОЗЫ СОСТАВЛЯЕТ

1. 6,66-8,88 ммоль/л.

2. 3,33-5,55.ммоль/л

3- 4,44-7,77ммоль/л

ответ 2

ОСНОВНОЕ ПЕРЕВАРИВАНИЕ КРАХМАЛА ПРОИСХОДИТ В

1. ротовой полости

2. 12-перстной кишке

3. кишечнике

ответ 2

АЛЬФА-АМИЛАЗА СЛЮНЫ ДЕЙСТВУЕТ НА СЛЕДУЮЩИЕ СУБСТРАТЫ

1. крахмал

2. гликоген

3. сахароза

4. лактоза

5. мальтоза

ответ 1,2

АЛЬФА-АМИЛАЗА ПАНКРЕАТИЧЕСКАЯ ДЕЙСТВУЕТ НА СЛЕДУЮЩИЕ СУБСТРАТЫ

1. крахмал

2. гликоген

3. сахароза

4. лактоза

5. мальтоза

ответ 1,2

ПОВЫШАЮТ УРОВЕНЬ ГЛЮКОЗЫ В КРОВИ

1. инсулин

2. глюкагон

3. адреналин

ответ 2,3

РЕЗЕРВНОЙ ФОРМОЙ УГЛЕВОДОВ В ОРГАНИЗМЕ ЯВЛЯЕТСЯ

1 -крахмал

2. –гликоген

3. –глюкоза

4. – фруктоза

5. -сахароза

ответ 2

ФОСФОРОЛИЗ ГЛИКОГЕНА АКТИВИРУЕТСЯ В ПЕЧЕНИ

1. адреналином

2. инсулином

3. глюкагоном

ответ 1,3

ИНСУЛИНЗАВИСИМЫЕ ПЕРЕНОСЧИКИ ГЛЮКОЗЫ ИМЕЮТСЯ В КЛЕТКАХ

1. жировой ткани

2. мозга

3. кишечника

4. скелетных мышц

5. поджелудочной железы

ответ все

ТРАНСПОРТ ГЛЮКОЗЫ ИЗ КРОВИ В КЛЕТКИ МЫШЕЧНОЙ И ЖИРОВОЙ ТКАНИ ПРОИСХОДИТ

1. против градиента концентрации

2. по градиенту концентрации

3. во время пищеварения

4. при участии инсулина

5. без участия инсулина

6. при участии К⁺ -Nа⁺- АТФ-азы

7. при участии ГЛЮТ -4

ответ 4,7

ТРАНСПОРТ ГЛЮКОЗЫ В КЛЕТКИ МОЗГА ПРЕИМУЩЕСТВЕННО ПРОИСХОДИТ

1. против градиента концентрации

2. по градиенту концентрации

3. при участии инсулина

4. без участия инсулина

5. по механизму симпорта

6. при участии К⁺ -Nа⁺- АТФ-азы

7. с затратой АТФ

ответ 2

ТРАНСПОРТ ГЛЮКОЗЫ В КЛЕТКИ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ КИШЕЧНИКА ПРОИСХОДИТ

1. путем активного транспорта, когда ее концентрация в просвете кишечника меньше, чем в клетках

2. при участии инсулина

3. без участия инсулина

4. при участии К⁺ -Nа⁺- АТФ-азы

5. с участием белков-переносчиков

ответ 1, 5

Тема реферативного сообщения «Обмен гликогена в антенатальном и перинатальном периодах»

Практические навыки, которыми должен студент овладеть по теме:

Дифференцировать различные сахарные кривые, поясняя при этом данные лабораторных исследований