osn_san_mikr

63

количество среды в пробирке (колбе, флаконе и т.д.) должно быть достаточным для полного погружения изделия или его части.

3.3. Посевы в бульон Хоттингера, тиогликолевую среду выдерживают в термостате при температуре 370С, среду Сабуро при температуре 20-220С.

Посевы инкубируют в термостате в течение 14 суток.»

При контроле микробной обсемененности объектов окружающей среды исследованию на стерильность подлежат:

–инъекционные лекарственные формы;

–лекарственные формы для обработки слизистых оболочек и кожи новорожденных;

–растворы для питья;

–шовный и перевязочный материал;

–хирургические перчатки;

–материи для первичной и повторной обработки новорожденных;

–материал для новорожденных в стерильных коробках (биксах);

–материал для операционной;

–индивидуальные комплекты для приема родов;

–зонды, катетеры и другие изделия медицинского назначения.

Посевы на стерильность хирургического инструмента.

«5.1. Хирургический инструментарий с помощью стерильного пинцета извлекают из бикса или мягкой упаковки и целиком погружают в пробирки с питательными средами. Как исключение, в отдельных случаях, если все простерилизованные инструменты в одной упаковке крупных размеров (иглодержатели, ранорасширители и т.д.), производят смыв с поверхности инструмента стерильной салфеткой, смоченной в стерильном физиологическом растворе или стерильной водопроводной воде, и погружают салфетку в пробирку с тиогликолевой средой. Аналогичные смывы с других инструментов засевают в пробирки со средой Хоттингера и Сабуро.»

«5.2. Методика посева на стерильность игл и шприцов.

Для контроля отбирают шприцы малой емкости (1,0мл или 2,0мл) в условиях бактериологического бокса, с соблюдением правил асептики погружают в пробирки с питательными средами отдельно цилиндр, поршень, иглы.

При необходимости контроля шприцев большей емкости (10,0-20,0мл и более) исследование стерильности производят методом смыва, при этом стерильной салфеткой, смоченной в стерильном физиологическом растворе или стерильной водопроводной воде, протирают с помощью пинцета внутренние части шприца и погружают салфетку в питательную среду.»

Контроль стерильности систем переливания крови многоразового использования, зондов, катетеров, резиновых перчаток и других изделий проводят путем полного погружения мелких изделий или небольших отрезанных кусочков (1-2см) в питательные среды.

Посев на стерильность хирургического шовного материала (кетгут, шелк).

64

Подготовленный к работе кетгут в операционном блоке хранят в спиртовом растворе йода. Из раствора моток кетгута перекладывают стерильным пинцетом в стерильный 10% раствор гипосульфита натрия и выдерживают в нем в течение 24 часов при комнатной температуре, затем перекладывают в пробирки с 20,0-30,0мл стерильной дистиллированной воды, где также выдерживают в течение 24 часов при комнатной температуре.

Подготовленный к работе шелк хранят в спиртовом растворе, поэтому перед посевом шелк (лавсан) помещают на 24 часа в стерильную дистиллированную воду при комнатной температуре.

Непосредственно перед посевом кетгут (шелк) извлекают стерильным пинцетом и перекладывают в стерильную чашку Петри, затем его разрезают ножницами на мелкие кусочки длиной 1-2см. Кетгут при этом раздергивают для лучшего прорастания микроорганизмов.

Посев и кетгута, и шелка производится одинаково – в 2 пробирки с тиогликолевой средой, 2 пробирки со средой Сабуро и 2 пробирки со средой Хоттингера, помещая в каждую пробирку по 4-5 кусочков исследуемого материала.

«6. Учет результатов.

Материал считается стерильным при отсутствии роста во всех посевах. Материал не стерилен при росте микрофлоры.»

Бактериологический контроль эффективности обработки кожи операционного поля и рук хирургов.

Смывы с кожи операционного поля и рук хирургов производят стерильными марлевыми салфетками размерами 5х5см2, смоченными в стерильном физиологическом растворе. Марлевой салфеткой тщательно протирают ладони, околоногтевые и межпальцевые пространства обеих рук. После забора проб марлевую салфетку помещают в широкогорлые пробирки, или колбы, с водой или физиологическим раствором и стеклянными бусами, встряхивают в течение 10-ти минут, производя, таким образом, отмыв марлевой салфетки. Отмывную жидкость засевают глубинным способом по 0,5мл на две чашки Петри с МПА, а марлевую салфетку – в 0,5% сахарный бульон.

Посевы инкубируют при температуре 370С в течение 48 часов. «7. Учет результатов.

Кожа и руки стерильны при отсутствии роста микроорганизмов, как на твердой, так и на жидкой питательной среде.»

«О совершенствовании мероприятий по профилактике внутрибольничных инфекций в акушерских стационарах» (приказ №345 МЗ РФ от 26.11.97)

В данном документе проведение микробиологического мониторинга, признается «важным параметром эпидемиологического надзора, преследующего цель – определение этиологической структуры внутрибольничных инфекций и оценку качества противоэпидемиологического режима» и предполагает:

65

–обследование персонала на условно-патогенную и патогенную микрофлору осуществлять только по эпидемиологическим показаниям;

–обследование медицинского персонала на носительство золотистого стафилококка при приеме на работу и в процессе профессиональной деятельности в плановом порядке не проводится;

–родильный дом (отделение) не менее одного раза в год должно закрываться на проведение плановой дезинфекции, в том числе для проведения косметического ремонта)…

Открытие стационара, закрывшегося по эпидпоказаниям, допускается только после получения отрицательного результата лабораторного контроля окружающей среды и разрешения центров Госсанэпиднадзора. В случае планового закрытия обследование объектов окружающей среды не проводится».

Микробиологический контроль стерильности проводится в ЛПУ 1 раз в месяц, центром Госсанэпиднадзора – 1 раз в квартал.

66

7.2. Тесты для самоконтроля

(один правильный ответ)

1.Микроорганизмы, попавшие на объекты окружающей среды- а) интенсивно размножаются б) не размножаются

в) находятся в состоянии анабиоза

2.Санитарно-микробиологические исследования предметов обихода и оборудования проводят:

а) при текущем санитарном надзоре в детских учреждениях и на пищевых продуктах

б) только по эпидемиологическим показаниям в) при составлении годового отчета по эпидситуации в учреждениях

3.Основными источниками бактериального и вирусного загрязнения предметов обихода являются:

а) домашние животные б) не стерилизованная вода, и вода, используемая при влажной уборке

в) больной человек или микробоноситель

4.Чаще всего при исследовании больниц и яслей в смывах с пеленальных столиков, детских игрушек выделяют:

а) аденовирусы и энтеровирусы б) вирусы гепатита В в) ретровирусы

5.Укажите нормативные документы по бактериологическому контролю стерильности комплекса санитарно-гигиенических мероприятий в ЛПУ а) ГОСТ 9225-84 б) приказ №215 МЗ СССР от 14.04.79

в) приказ №345 МЗ РФ от 26.11.97

6.Контроль микробной обсемененности воздуха различных объектов ЛПУ проводят:

а) 1 раз в месяц б) каждую неделю в) один раз в год

7.Объектами обязательного исследования при проведении бактериологического контроля в ЛПУ являются:

а) руки хирурга, кожа операционного поля б) комната для приема пищи медперсонала в) поверхность дистиллятора, автоклава

67

8.Отбор проб с поверхностей осуществляется методом: а) фильтрования б) центрифугирования в) смыва

9.Для контроля стерильности хирургических инструментов используют посев: а) на среду Сабуро, сусло-агар б) в тиогликолевую среду и на среду Сабуро

в) на желточно-солевой агар, в сахарный бульон

10.Согласно приказу №720 МЗ СССР от 31.07.78 обязательными объектами санитарно-бактериологического исследования в ЛПУ являются а) моечная, стерилизационная.

б) перевязочный материал, руки хирургов, в) место регистрации, комната приема анализов на исследование.

11.Исследование микробной обсемененности предметов окружающей среды предусматривает:

а) выявление Mycobacterium spp.

б) осуществляется методом смывов в) смывы проводят с площади 1,0см2

12.Контроль стерильности кетгута проверяют при посеве:

а) в тиогликолевую среду б) в среду Китта-Тароцци

в) на желточно-солевой агар (ЖСА)

13. Согласно какому документу проводят мероприятия по профилактике внутрибольничных инфекций в акушерских стационарах:

а) МУК 2.1.7.730-99.

б) приказу №345 МЗ РФ от 26.11.97 в) приказу №215 МЗ СССР от 14.04.79

68

Глава 8

8.1. Санитарная микробиология почвы

8.1.1. Общие вопросы

Почва является главным резервуаром и естественной средой обитания микроорганизмов в природе, которые принимают активное участие в процессах формирования и самоочищения почвы, а также в круговороте всех веществ в природе.

Все основные процессы превращения органических веществ, обусловленные жизнедеятельностью разнообразных микроорганизмов, интенсивно происходят на глубине 5,0-20,0см, поэтому в этом слое почвы отмечается их наибольшее количество. В более глубоких почвенных слоях микрофлора скуднее – уже на глубине 1,5 метров и более (4,0-5,0м) микроорганизмы обнаруживаются в очень малом количестве (встречаются лишь единичные особи).

Качественный состав микрофлоры почвы очень разнообразен – она включает множество видов бактерий (преимущественно спорообразующих, спирохет, микоплазм), грибы, актиномицеты, вирусы, простейшие, синезеленые водоросли. Состав и соотношения между различными группами микроорганизмов меняются в зависимости от вида почвы, способов ее обработки, содержания органических веществ.

Микроорганизмы почвы способны размножаться при температуре от 250С до 450С, а термофильные – и при более высокой температуре (600С).

Микроорганизмы являются составной частью сложного биоценоза, характеризующегося как антагонистическими, так и симбиотическими взаимоотношениями – как между собой, так и с окружающими их объектами, в том числе растениями. Нередко жизнедеятельность одних групп бактерий подавляется действием антибиотических веществ или бактериоцинов, выделяемых другими группами.

В составе микрофлоры почвы принято выделять так называемые физиологические группы микроорганизмов, участвующие в различных процессах постепенного разложения органических веществ.

Наиболее известными среди них являются:

– бактерии, обеспечивающие круговорот азота в природе – азотофиксирующие бактерии, живущие свободно в почве или в симбиозе с высшими растениями (Rhizobium, Azotobacter, Azospirillum, Agrobacterium), обладающие способностью усваивать из воздуха атмосферный азот; – нитрифицирующие бактерии (Nitrosomas, Nitrobacter), окисляющие аммиак до нитритов и натратов; – денитрифицирующие бактерии, способные преобразовывать в процессе жизнедеятельности нитраты в нитриты, нитритредуцирующие бактерии, восстанавливающие нитриты в аммиак;

69

–бактерии, вызывающие различные виды брожения и расщепляющие клетчатку (целлюлозолитические) (грибы, родов Fusarium, Aspergillus, аэробные бактерии родов Cytophaga и Sporocytophaga, клостридии);

–бактерии, участвующие в круговороте серы, железа (серобактерии, железобактерии), фосфора, преобразующие эти соединения в более доступную для более высших организмов форму.

Таблица 5 Микробный состав постоянной и резидентной микрофлоры почвы

Чтобы оценить роль почвы в передаче возбудителей инфекционных болезней, необходимо знать продолжительность сохранения и размножения представителей нормальной микрофлоры тела человека и животных, и патогенных бактерий в почве. На сроки их выживания в почве оказывают влияние многие факторы: состав и тип почвы, температура, влажность, воздействие атмосферных осадков, степень загрязненности, а также ее характер.

Патогенные для человека бактерии, которые могут быть обнаружены в почве, можно разделить на три группы:

К первой группе относится небольшое число постоянно обитающих в почве микроорганизмов, например, клостридии ботулизма, которые попадают в почву с испражнениями человека и животных и, образуя споры, сохраняются в ней.

Вторая группа включает спорообразующие патогенные микроорганизмы (бациллы сибирской язвы, клостридии столбняка, газовой гангрены), которые также попадают в почву с фекалиями человека и выделениями животных. Однако почва для них является вторичным резервуаром, и клостридии могут в ней не только длительное время сохраняться в виде спор, но и размножаться. Например, споры бациллы сибирской язвы обнаруживаются в почве «проклятых полей» (луга и выпасы, загрязненные спорами возбудителя) через десятки лет. Исходя из этого, раны, загрязненные землей, требуют мер экстренной профилактики этих сапронозных инфекций, и в первую очередь, анаэробной раневой инфекции (газовой гангрены, столбняка) и должны быть объектом первоочередного пристального внимания медицинских работников.

70

В третью группу включены патогенные микроорганизмы, попадающие в почву с выделениями человека и животных, и сохраняющиеся в течение нескольких недель, реже месяцев. Это сальмонеллы, шигеллы, вибрионы, бруцеллы, францизеллы, микобактерии, лептоспиры, возбудители сапа и др.. Они не образуют спор и поэтому быстро гибнут в результате воздействия различных физических и биологических факторов.

Кроме бактерий, почва является одним из звеньев в эпидемической цепи передачи и распространения кишечных вирусов, так как вирусы способны также быстро адсорбироваться на частицах почвы, довольно продолжительное время выживать и сохранять свою инфекционную активность. Например, вирусы Коксаки выживают в почве при 4-80С в течение 8-10 месяцев.

Также как и для бактерий, на сроки выживаемости вирусов в почве для кишечных вирусов оказывает влияние такие факторы как тип почвы, температура, рН, влажность среды.

Кроме того, в отличие от бактерий для вирусов как возбудителей кишечных инфекций более характерно их попадание на овощные и ягодные культуры в процессе их роста и созревания.

8.1.2.Санитарно-микробиологическая оценка почвы

Санитарно-микробиологическое исследование почвы регламентируется СанПиН 2.1.7.1287-03 «Санитарно-эпидемические требования к качеству почвы от 17 апреля 2003».

Забор проб почвы осуществляют согласно ГОСТ 17.4.3.01-83, ГОСТ 17.44.02-84, исследования проводят по МУ 1446-76, МУ 2293-81,

нормируют по СанПин 2.1.7.1287-03

Предупредительный санитарный надзор за почвой осуществляется:

–при планировке, строительстве и реконструкции вновь заселяемых участков и населенных мест;

–при выборе участков для строительства лечебно-профилактических и аптечных учреждений, санаториев, детских учреждений;

–при решении вопросов водоснабжения и канализации населенных территорий;

–при санитарной оценке пляжей и других мест коллективного отдыха.

Текущий санитарный надзор за почвой осуществляется:

–при оценке санитарного состояния почвы и ее способности к самоочищению после загрязнения (почву дворов детских садов, больниц, зон отдыха исследуют 2 раза в год);

–при контроле за методами обезвреживания сточных вод и отбросов (1-4 раза в месяц);

–по эпидемическим показаниям для выяснения возможного пути передачи инфекционных заболеваний;

Текущий санитарный контроль включает в себя определение:

71

–БГКП;

–индекса энтерококков;

–патогенных бактерий, в том числе сальмонелл.

По этим показателям, согласно СанПин 2.1.7.1287-03, почвы делятся на несколько категорий эпидемиологической опасности (таблица 6).

Однако при проведении полного санитарно-микробиологического анализа к указанным показателям добавляют определение:

–численности и процентное соотношение спороносных бактерий к общему числу микроорганизмов;

–количества актиномицетов, грибов;

–количества целлюлозоразрущающих бактерий;

–количества аммонификаторов;

–количества нитрифицирующих бактерий.

По эпидемическим показаниям проводят дополнительное исследование на обнаружение патогенных микроорганизмов.

Забор проб почвы для анализа.

Выбор места и методика отбора проб почв – наиболее ответственный этап лабораторных исследований.

Места отбора проб почвы должны намечаться санитарным врачом. Отбор проб и подготовка их для бактериологического исследования осуществляется при его непосредственном участии и контроле согласно ГОСТ 17.44.02-84.

Обязательным предварительным этапом при санитарнобактериологическом исследовании почвы является санитарное обследование, которое заключается в том, что санитарный врач на основании предварительно составленной карты санитарного обследования визуально и в результате опроса описывает изучаемую территорию, выбирает на ней точки взятия проб, участвует в отборе проб.

На изучаемой территории при наличии одного источника загрязнения пробы почвы для бактериологического анализа отбирают не менее чем с двух участков площадью 25,0см2 каждый; причем один из них должен находиться вблизи источника загрязнения (опытный), другой – вдали (контрольный). Контрольный участок выбирают с таким расчетом, чтобы он был заведомо незагрязненный и имел одинаковый почвенный состав с опытным.

72

Если на изучаемой территории имеется несколько источников загрязнения, то необходимо выделить несколько опытных участков около каждого объекта, загрязняющего внешнюю среду. Если на территории нет видимых источников загрязнения, то необходимо выделить участки согласно элементам рельефа.

При санитарно-бактериологическом обследовании почвы значительных территорий определение количества точек для забора проб почвы, производится согласно следующим рекомендациям. На каждые 100,0га изучаемой территории при спокойном рельефе местности намечают к отбору проб почвы 6-7 участков площадью 25,0м2. При выраженном рельефе количество отводимых участков увеличивается до 8-10.

Для составления средней пробы на каждом участке почву берут в пяти точках по диагонали или по принципу «конверта» (в пяти точках, расположенных конвертом), с глубины до 20,0см стерильным инструментом.

Отбор проб при этом рекомендуется производить путем вычленения цельного монолита почвы и отделения от середины образца для средней пробы. Пробы почвы с глубины более 0,25м отбирают при помощи бура, который перед каждым взятием пробы тщательно стерилизуется. Отобранные образцы помещают в стерильную посуду и доставляют в лабораторию.

Если невозможно исследовать почву немедленно, допускается хранение ее при +4,50С не более 24 часов.

Пробы почвы из более глубоко залегающих слоев (0,25м-2,0м) берут буром или стерильным совком.

При изучении влияния почвы на санитарное состояние подземных вод и водоемов пробы берут с глубины 25,0см, а на участках для обеззараживания хозяйственно-бытовых отбросов – с глубины 25,0-100,0-150,0см.

Пробу почвы (200,0-300,0г) помещают в стерильную банку и накрывают слоем ваты. Горлышко банки обертывают бумагой и перевязывают. На банку ставят номер и наклеивают этикетку с указанием паспортных данных образца (места и даты взятия пробы).

В лаборатории для приготовления среднего образца берут 0,5кг почвы всех образцов одного участка, тщательно перемешивают, освобождают от загрязнения (отбрасывают камни и прочие твердые предметы), и распределяют на листе тонким слоем в форме квадрата.

Диагоналями почву делят на 4 треугольника. Почву из двух противоположных треугольников отбрасывают, а оставшуюся вновь перемешивают, опять распределяют тонким слоем и делят диагоналями, и так несколько раз.

Перед посевом почву диспергируют, для чего с соблюдением условий стерильности просеивают через стерильные сита с диаметром пор 3,0мм. При просеивании сито покрывают сверху стерильной бумагой, а неперегнившую растительную массу отбрасывают.

Полученный образец почвы тщательно перемешивают и из него отбирают навески, величины которых выбираются исходя из предполагаемой степени загрязнения почвы и планируемых определений.