Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Современные антисептики и дезинфицирующие вещества. Учебное пособие
.pdf
Энтерококки – молочнокислые грамположительные бактерии, не
образующие спор и капсул, факультативные анаэробы. Оптимальная
температура культивирования энтерококков 35–37 °С.
Энтерококки, высоко резистентные к различным факторам внешней среды и дезинфицирующим средствам, могут длительное время
сохранять жизнеспособность на предметах домашнего обихода, вы-
держивают нагревание до 60 °С в течение 30 мин. В связи с этим энте-
рококки используются как санитарно-показательные микроорганизмы
для оценки качества питьевой воды, минеральных источников и пищевых продуктов с повышенной концентрацией соли. E. faecium заселяют
кишечник в первые дни жизни и являются постоянными обитателями
кишечника. Несмотря на то, что их количество меньше, чем E.coli, они
не способны размножаться во внешней среде (точнее могут размножаться при содержании органических веществ). Энтерококки отмирают во внешней среде значительно раньше, чем E.coli, поэтому всегда
свидетельствуют о свежем фекальном загрязнении. Заселение энтерококками происходит более активно у детей, находящихся на грудном
вскармливании.
Энтерококки вызывают различные инфекции, включая эндокардит,
инфекцию мочевыводящих путей, простатит и раневую инфекцию с
сопутствующей бактериемией.
Pseudomonas aeruginosa
Род Pseudomonas – прямые, или слегка изогнутые, но не спиральные
палочки 0,5–1,0 х 1,5–5 мкм, подвижны (полярные жгутики), аэробы.
Способны к анаэробному дыханию с использованием нитратов
в качестве акцептора электронов. Некоторые виды – факультативные
автотрофы. Род включает более 70 видов. Они широко распространены
в природе. Некоторые виды патогенны для человека, животных и растений, могут загрязнять фармацевтические препараты, размножаться
в растворах антисептиков.
41
Pseudomonas aeruginosa – основной возбудитель гнойно-воспалительных процессов, особенно в условиях стационара. Вызывает общие
и местные нагноительные процессы: отиты, пиелиты, циститы, кератиты,
инфицирует поверхности ран и ожогов. Устойчив к действию антибиотиков. Образует биопленку на оборудовании системы водоснабжения.
Способен разрушать многие химические вещества, в том числе биоциды. Растет на простых питательных средах в широком диапазоне тем-
ператур (4–42 °С), оптимальная температура 37 °С. Строгий аэроб. На
жидких средах (МПБ, пептонная вода) образует характерную сероватосеребристую пленку, по мере старения культуры возникает помутнение. На плотных питательных средах (МПА, среды Эндо, Левина, кровяной агар, Плоскирева) вид колонии зависит от состава среды. Наспециальных средах образует зеленовато-синеватые пигменты. Образует
токсины и другие факторы вирулентности.
Proteus mirabilis
Род Proteus. Прямые палочки 0,4–0,8 х 1–3 мкм. Подвижны (перитрих). У большинства штаммов имеет место роение с периодическими
циклами миграции, приводящая к образованию концентрических зон,
или распространению в виде однородной пленки по влажной поверхности среды.
Встречаются в кишечнике позвоночных, в почве, навозе, загрязненных водах. Вызывают инфекции мочевых путей, вторичные поражения, часто при ожогах. Proteus mirabilis – вид грамотрицательных,
спорнеобразующих, факультативно анаэробных бактерий. Представитель
нормальной, условно-патогенной микрофлоры кишечника человека
может вызывать инфекционные заболевания различных органов, в частности, заболевания мочеполовых органов (простатит, цистит, пиелонефрит). Proteus mirabilis является частой причиной раневых инфекций.
42
Candida albicans
Кандиды – род дрожжеподобных грибков. Они входят в состав
нормальной микрофлоры и обычно не вызывают заболевания. Однако
при наличии благоприятных факторов (например, снижение иммунитета)
могут вызывать кандидоз
Кандиды – род дрожжеподобных грибков. Они входят в состав
нормальной микрофлоры и обычно не вызывают заболевания. Однако,
при наличии благоприятных факторов (например, снижение иммунитета)
могут вызывать кандидоз.
Дрожжеподобные грибки рода Candida – одноклеточные микроорганизмы, размером 6–10 мкм. Грибки рода Candida широко распространены в окружающей среде. Они обнаруживаются в почве, питьевой
воде, пищевых продуктах, на коже и слизистых оболочках человека
и животных. Благоприятными условиями для роста грибков Candida
считается температура 28–37 °С и кислотность среды 5,8–6,5.
Trichophyton mentagrophytes
Это второй по распространенности гриб, вызывающий лишай
у людей, и наиболее распространенный или один из наиболее распространенных грибов, вызывающих зоонозные заболевания кожи.
Трихофитон ментагрофиты часто выделяют у собак, кошек, кроликов, морских свинок и других грызунов, однако, некоторые генетические варианты обладают потенциалом передачи от человека человеку,
43
например, тип VII и тип VIII. Определенные генетические варианты
гриба имеют различные географические ареалы.
Mycobacterium terrae Mycobacterium terrae
Mycobacterium terrae – медленно растущий вид микобактерий (не-
хроматогенные микобактерии). Известно, что он вызывает серьезные
кожные инфекции, которые относительно устойчивы к антибактериальной терапии.
Данный вид бактерии используется для изучения эффективности
процессов дезинфекции медицинских инструментов многоразового использования. Микобактерии используются при проверке процедур переработки хирургических инструментов, более конкретно, в качестве
тестируемого организма при определении эффективности дезинфекции. Для определения количества микроорганизмов экстрагирующую
среду фильтруют, а затем фильтры помещают на агаровые чашки для
инкубации сроком до 21 дня при 37±2 °C. В конце инкубационного периода подсчитывается количество колониеобразующих единиц. Этот
подсчет используется для расчета логарифмического сокращения для
определения эффективности дезинфекции. Культивируют на среде Левенштейна Иенсена, другие бактерии и грибы – на средах, рекомендованных для определения чувствительности к антибиотикам и исследования микробной контаминации лекарственных препаратов. Плотность
микробной взвеси должна составлять 10 8–10 11 КОЕ/мл (КОЕ – колониеобразующая единица). Взвесь готовят на 0,5 %-ном растворе натрия
хлорида с нейтральным pH. Для опытов с белковой нагрузкой в суспензию добавляют 20 % сыворотки крови или 0,2 % альбумина. Экспозицию устанавливают от 30 с до 5 мин. Для установления действующей
в этот срок концентрации готовят растворы с содержанием антисептика
100, 75, 50, 25, 12 %. Параллельно проводят контрольный эксперимент
по определению чувствительности тест-культуры к фенолу в концентрации 1, 0,5, 0,25, 0,125, 0,06 %. В раствор антисептика вносят взвесь
44
тест-культуры (на 1 мл раствора 0,1 мл взвеси.) По истечении экспозиции антисептик нейтрализуют и смесь высевают на стандартную для
данного штамма среду. В качестве нейтрализатора используют вещество, инактивирующее определенный класс соединений, или все классы
антисептических препаратов. К последнему типу относится смесь, содержащая 3 % твина-80 и по 0,1 % сапонина, цистеина и гистидина.
При допуске новых препаратов в медицинскую практику ставят:
1) качественный суспензионный тест;
2) количественный суспензионный тест;
3) тест, приближенный к практике использования антисептика.
Условия культивирования тест-микроорганизмов. Тест-микроорга-
низмы aureus, Е.coli, Р. aeruginosa культивируются на следующих
питательных средах: казеиновом бульоне, МПБ, агаре Эндо, казеино-
вом агаре, МПА при температуре 37 °С в течение 24 ч. Тест-микроорганизмы должны иметь типичные биохимические, морфологические,
тинкториальные, культуральные и ферментативные свойства, присущие
данному виду и обладать стандартной устойчивостью к эталонным дезинфицирующим средствам, растворам хлор амина, перекиси водорода,
глутарового альдегида, алкилдиметилбензиламмония хлорида (АДБАХ)
(табл. 3.3).
Таблица 3.3
Устойчивость тест-микроорганизмов к дезинфицирующим агентам
Время гибели тест-
Дезинфицирующее
вещество
Концентрация
раствора
по ДВ, %
0,020* 5 –Хлорамин
микроорганизмов,
мин, не менее
E.coli,
шт.1257
S.aureus,
шт. 906
0,200* – 15
0,030 10 –Глутаровый альдегид
0,060 – 10
2,000 10 –Перекись водорода
3,000 – 25
* концентрация раствора указана по препарату
45
Устойчивость тест-микроорганизмов к эталонным дезинфицирую-
щим средствам определяют методом батистовых тест-объектов. Проверку устойчивости тест-микроорганизмов проводят не реже 1-го раза
в месяц. При снижении резистентности культур делают их пересевы на
обогащенные питательные среды до восстановления устойчивости.
Качественный суспензионный тест ставят по описанному выше мето-
ду. Тест-культуры: S. aureus, Е.coli, Р. mirabilis, Р. aeruginosa, С. albicans.
Плотность микробной суспензии должна соответствовать 108–109 КОЕ/мл.
Срок инкубации культур после высева: для бактерий 48 ч при 37 °C, для
С. albicans – 72 ч при 20–25 °C. Для гигиенической антисептики препарат
считается пригодным, если он угнетает рост всех тест-штаммов при экспозиции 0,5–1 мин в допустимой по переносимости концентрации. Препарат, предназначенный для хирургической антисептики рук, должен угнетать рост всех тест-культур при экспозиции 3–5 мин.
Количественный суспензионный тест. Тест-культуры – S. aureus,
Е. coli; плотность взвеси 1–1,5×10
11
КОЕ/мл. Для каждой культуры
готовят два ряда разведений антисептика: без белковой защиты и с добавлением 0,2 % альбумина. Экспозиция препарата и культуры 0, 5, 1
и 5 мин. Далее смесь нейтрализуют и высевают на питательный агар.
Активность препарата оценивают по степени снижения величины
КОЕ/мл по сравнению с контролем (микробная взвесь без антисептика).
Препараты для гигиенической антисептики должны снижать КОЕ/мл
в рекомендуемой для применения концентрации при экспозиции
0,5–1 мин не менее, чем в 10
5
раз, препараты для хирургической антисеп-
тики должны обеспечить такую же степень снижения КОЕ/мл за 3–5 мин.
Тест с условиями, приближенными к практическому применению,
ставят на людях-добровольцах. На кожу кисти рук наносят взвесь Е. coli
(1 x 10
11
КОЕ/мл), подсушивают 3 мин на воздухе и протирают руки
испытуемым раствором антисептика: для гигиенической антисептики
1 мин, используя 3 мл препарата, для хирургической – 5 мин 2–3 раза,
используя по 5 мл препарата. Далее делают смыв с рук жидкой питательной средой. В контроле:
1) делают смыв с контаминированных рук без обработки антисеп-
тиком;
2) руки обрабатывают 3 мл стандартного антисептика (изопропанола)
дважды по 30 сек, после чего делают смыв. Разведения смывов (10–1,
10–2, 10–3) засевают на питательный агар и инкубируют при 37 °C 48 ч.
Оценку эффективности испытуемого препарата проводят путем
сравнения степени снижения количества тест-микроорганизма после
обработки рук испытуемым и стандартным антисептиками.
46
Определение антимикробной активности антисептиков в мягких
и твердых формах проводят на плотной питательной среде, засеянной
тест-культурой. Образцы размещают на поверхности среды или в лунках, подобно тому, как это делают при испытании антибиотиков чашечным методом. Об активности препарата судят по диаметру зоны
задержки роста вокруг образца в сравнении со стандартным препаратом. Испытуемый препарат можно растворить или эмульгировать
в жидкой среде (например, в буферном растворе с соответствующим
эмульгатором) и определить его активность методами, описанными
выше для жидких форм.
3.5. Определение эффективности консервантов лекарст-
венных средств.
Консерванты вводят в состав как стерильных, так и нестерильных
лекарственных средств для предотвращения роста микроорганизмов,
попадающих в них во время технологического процесса, или при неоднократном употреблении. Они не должны использоваться, чтобы замаскировать низкое качество производства. Учитывая возможность побочного действия, консерванты следует применять только при строгой
необходимости.
Требования к консервантам
− широкий спектр антимикробной активности;
− быстрота биоцидного действия;
− отсутствие взаимодействия с компонентами лекарственного
средства;
− стабильность;
− отсутствие раздражающего или токсического действия биоцида
или продуктов его распада.
Однако немногие вещества отвечают этим идеальным требованиям. При использовании консерванта следует учитывать ряд факторов,
влияющих на эффективность его действия: микробная нагрузка, температура, рН, состав лекарственного средства. В мультифазной системе
консервант распределяется неравномерно в соответствии с его гидрофильной или гидрофобной природой. Консервант может адсорбироваться на материале первичной упаковки, что снижает его активность.
Концентрация летучих веществ (хлороформа) может снижаться при
повторном открывании контейнера.
47
− Escherichia coli АТСС 8739 (или АТСС 25922);
− Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027;
− Staphylococcus aureus АТСС 6538;
− Candida albicans АТСС 10231 (или NCTC 885-653);
− Aspergillus brasiliensis АТСС 16404 (или АТСС 9642).
зуя стандартный образец мутности или инструментальные методы,
в том числе турбодиметрический.
Для смыва конидий A. brasiliensis используют стерильный 0,9 %-ный
раствор натрия хлорида, содержащий 0,05 % твина-80. Количество
конидий A. brasiliensis в 1 мл смыва определяют с помощью камеры
Горяева или чашечным агаровым методом. Полученную взвесь разводят до концентрации 10
7
конидий в 1 мл.
Стандартизованные суспензии всех тест-штаммов микроорганизмов разводят до концентрации 10
тегории – 10
5
–106 КОЕ/мл. Для определения эффективности консерван-
7
–108 КОЕ/мл, а для препаратов 4 ка-
тов используют готовые ЛП в неповрежденной упаковке. В 5 стерильных флаконов помещают достаточное количество испытуемого препарата. В каждый флакон вносят по 0,1 мл (но не менее 0,5 % от объема
исследуемого препарата) одного из приготовленных инокулятов тестштаммов (Е. coli, Р. aeruginosa, S. aureus,C. albicans, A. brasiliensis) для
получения концентрации 10
5
–106 КОЕ в 1 мл или 1 г испытуемого об-
разца и перемешивают.
Образцы лекарственных препаратов на твердой мазевой основе нагревают до температуры (47,5±2,5) °С. Смешивают инокулят каждой
стандартизованной микробной суспензии с образцом препарата в течение
не менее 1 мин до достижения гомогенной эмульсии. Для улучшения
смешивания можно добавить определенное количество стерильного поверхностно-активного вещества, например, твина-80, если оно не влияет
на жизнеспособность микроорганизмов или на эффективность консерванта.
Фактическую исходную концентрацию бактерий и грибов в контаминированных образцах определяют сразу после контаминации. Для
этого чашечным агаровым методом делают посев на соответствующие
питательные среды, используя подходящие разведения для получения
на чашке от 30 до 300 колоний бактерий и от 10 до 100 колоний грибов.
Для этой цели также можно применять метод мембранной фильтрации
при условии растворимости ЛП в водных растворителях или изопропилмиристате. Контаминированные образцы препаратов выдерживают
при температуре (22,5±2,5) °C в защищенном от света месте в течение
определенного времени. Через 7, 14 и 28 сут. после инокуляции образцов
препаратов 1 категории и через 14, 28 сут. препаратов 2 и 3 категорий определяют количество жизнеспособных микроорганизмов в 1 мл образца,
делая высев на чашки Петри. В случае необходимости в чашки с питательной средой или в соответствующее разведение лекарственного
49
средства перед посевом вводят инактиватор (нейтрализатор) антимикробного действия определенного вещества, указанный в ОФС «Микробиологическая чистота».
Учет результатов испытания проводят после посева чашечным
агаровым методом, определяя количество КОЕ/мл для каждого тестштамма через указанные выше сроки инкубации контаминированного
образца. Изменение количества микробных клеток по сравнению с исходной концентрацией в 1 мл выражают в десятичных логарифмах (lg).
При оценке эффективности антимикробного действия консервантов
увеличение КОЕ/мл не фиксируется, если последующее измерение не
отличается от предыдущего более, чем на 50 %. В период с 7 до 14 сут.
не должно наблюдаться увеличения числа бактерий. Количество клеток
дрожжеподобных и плесневых грибов не должно увеличиваться на
протяжении всего срока исследования для всех категорий лекарственных средств.
Альтернативная отечественная среда для выращивания дрожжевых и плесневых грибов – Среда № 2(агар Сабуро с глюкозой) для контроля микробной загрязненности. Для предотвращения роста бактерий
перед стерилизацией добавляют 50 мг хлорамфеникола (левомицетина)
на 1 л среды или перед использованием добавляют 0,1 г натриевой соли бензилпенициллина и 0,1 г тетрациклина на 1 л среды в виде стерильных растворов.
Контрольные вопросы
1. Каков механизм деструктивного действия антисептиков?
2. В чем сущность окислительного метода антисептиков?
3. Какие особенности мембраноатакующего механизма действия
антисептиков?
4. В чем заключается антиметаболический механизм действия ан-
тисептиков?
5. Каков механизм антиферментного действия антисептиков?
6. Характеристика естественной резистентности к антисептикам и
дезинфектантам.
7. Характеристика приобретенной резистентности к антисептикам
и дезинфектантам.
8. Каков механизм действия антисептических веществ?
9. Повреждающее действие какой группы на ткани определяет ско-
рость образования активного кислорода?
50
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]